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旋毛虫TsNas36蛋白的表达和生物学特性分析
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作者 司光泉 宋军澎 +4 位作者 吕庆博 白雪 王洋 刘晓雷 张藜潇 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第6期1225-1232,1242,共9页
旋毛虫Nas-36(TsNas36)是一种在旋毛虫排泄分泌产物(excretory secretory products,ESP)中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因,鉴定其生物学特性和时空表达特征,为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论和材料... 旋毛虫Nas-36(TsNas36)是一种在旋毛虫排泄分泌产物(excretory secretory products,ESP)中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因,鉴定其生物学特性和时空表达特征,为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论和材料基础。生物信息学分析显示,TsNas36全长470 AA,分子量约为54.69 kDa,无跨膜区,有一个信号肽(1-20 AA),一个虾红素蛋白酶(Astacin)结构域(116-320 AA)和一个CUB结构域(355-470 AA),有5个活性位点残基分别位于216(His)、217(Glu)、220(His)、226(His)和275(Tyr)位氨基酸。通过构建重组表达质粒pET-28a(+)/TsNas36,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得重组蛋白rTsNas36。使用纯化后的重组蛋白免疫家兔获得抗rTsNas36多克隆抗体血清,间接ELISA结果显示其抗体效价达到1∶10^(5)。qRT-PCR和Western-blot结果显示,TsNas36在新生幼虫(NBL)时期的转录水平显著高于成虫和肌幼虫时期。免疫荧光结果表明,TsNas36仅定位于新生幼虫虫体表皮。综上,本研究表征了TsNas36基因的生物学特征,并发现该基因的表达具有高度的时期特异性,可能参与新生幼虫的发育进程。 展开更多
关键词 旋毛虫 虾红素蛋白酶 锌金属蛋白酶 TsNas36蛋白 原核表达 免疫荧光
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刺参虾青素基因的克隆及不同体色个体间表达差异的分析 被引量:2
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作者 赵鹤凌 杨红生 +1 位作者 赵欢 刘石林 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期22-28,共7页
仿刺参(Apostichopus japonicus Selenka)的体色变化很大,多数背腹均为黄褐色,极少数呈白化特征,背腹均为纯白色。经人工繁育实验发现,白化仿刺参的子代仍多具白化特征。本文研究了虾青素基因与刺参白化特征的相关性。在克隆虾青素基因c... 仿刺参(Apostichopus japonicus Selenka)的体色变化很大,多数背腹均为黄褐色,极少数呈白化特征,背腹均为纯白色。经人工繁育实验发现,白化仿刺参的子代仍多具白化特征。本文研究了虾青素基因与刺参白化特征的相关性。在克隆虾青素基因cDNA全长的基础上,比较了普通仿刺参和白化仿刺参在不同发育时期虾青素基因表达量的差异。结果表明,该基因的cDNA含有2058个核苷酸,编码560个氨基酸。经实时定量PCR分析,白化成参体壁中虾青素基因表达量显著低于普通成参;而在仿刺参色素沉积的早期,白化稚参体壁中虾青素基因表达量从受精后第39天开始显著低于普通稚参。可见,仿刺参体壁中虾青素基因的低表达与刺参白化特征的发生密切相关。 展开更多
关键词 虾青素 仿刺参(Apostichopusjaponicus Selenka) 白化 基因克隆 实时定量PCR分析
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曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)ALSM基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 周超 郭宝英 +1 位作者 刘慧慧 吴常文 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期837-844,共8页
采用RT-PCR和RACE技术分离、克隆得到曼氏无针乌贼肝脏ALSM(Astacin-like squid metalloprotease)基因。序列分析表明,ALSM cDNA序列全长1418bp,其包括53bp的5’端非翻译区,1290bp阅读框以及含有poly(A)信号AATAAA的75bp3’端非翻译区,... 采用RT-PCR和RACE技术分离、克隆得到曼氏无针乌贼肝脏ALSM(Astacin-like squid metalloprotease)基因。序列分析表明,ALSM cDNA序列全长1418bp,其包括53bp的5’端非翻译区,1290bp阅读框以及含有poly(A)信号AATAAA的75bp3’端非翻译区,阅读框编码429个氨基酸残基。推导蛋白的相对分子质量为48916.31Da,等电点为7.978。ALSM氨基酸序列的同源性分析显示,不同进化地位动物的ALSM氨基酸序列都具有较高的同源性。系统发生树分析发现,曼氏无针乌贼ALSM首先与金乌贼、莱氏拟乌贼、长枪乌贼及太平洋褶柔鱼的ALSM-Ⅰ亚型聚类,再与其ALSM-Ⅱ及ALSM-Ⅲ亚型聚类。生物信息学分析表明,ALSM编码的蛋白为一种亲水性的分泌蛋白。这些结果对进一步研究ALSM的结构与功能以及从基因调控角度探索曼氏无针乌贼在养殖条件下生物学特性变化机理具有重要意义。 展开更多
关键词 曼氏无针乌贼 虾红素 ALSM 金属蛋白酶 克隆 序列分析
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Structure, expression, and developmental function of early divergent forms of metalloproteinases in Hydra 被引量:1
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作者 MICHAEL P SARRAS JR ALEXEY LEONTOVICH 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第4期163-176,共14页
Metalloproteinases have a critical role in a broad spectrum of cellular processes ranging from the break-down of extracellulax matrix to the processing of signal transduction-related proteins. These hydrolyticfunction... Metalloproteinases have a critical role in a broad spectrum of cellular processes ranging from the break-down of extracellulax matrix to the processing of signal transduction-related proteins. These hydrolyticfunctions underlie a variety of mechanisms related to developmental processes as well as disease states.Structural analysis of metalloproteinases from both invertebrate and vertebrate species indicates that theseenzymes are highly conserved and arose early during metazoan evolution. In this regard, studies from vari-ous laboratories have reported that a number of classes of metalloproteinases are found in hydra, a memberof Cnidaria, the second oldest of existing animal phyla. These studies demonstrate that the hydra genomecontains at least three classes of metalloproteinases to include members of the 1) astacin class, 2) matrix met-alloproteinase class, and 3) neprilysin class. Functional studies indicate that these metalloproteinases playdiverse and important roles in hydra morphogenesis and cell differentiation as well as specialized functionsin adult polyps. This article will review the structure, expression, and function of these metalloproteinasesin hydra. 展开更多
关键词 Hydra metalloproteinases development astacin matrix metalloproteinases endothelin.
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Structure,expression,and developmental function of early divergent forms of metalloproteinases in Hydra
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作者 MICHAELPSARRASJR LIYAN 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第3期163-176,共14页
Metalloproteinases have a critical role in a broad spectrum of cellular processesranging from the break-down of extracellular matrix to the processing of signaltransduction-related proteins.These hydrolytic functions ... Metalloproteinases have a critical role in a broad spectrum of cellular processesranging from the break-down of extracellular matrix to the processing of signaltransduction-related proteins.These hydrolytic functions underlie a variety of mechanisms related to developmental processes as well as disease states.Structural analysis of metalloproteinases from both invertebrate and vertebrate species indicates that these enzymes are highly conserved and arose early during metazoan evolution.In this regard,studies from vari-ous laboratories have reported that a number of classes of metalloproteinases are found in hydra,a member of Cnidaria,the second oldest of existing animal phyla.These studies demonstrate that the hydra genome contains at least three classes of metalloproteinases to include members of the 1)astacin class,2)matrix met-alloproteinase class,and 3)neprilysin class.Functional studies indicate that these metalloproteinases play diverse and important roles in hydra morphogenesis and cell differentiation as well as specialized functions in adult polyps.This article will review the structure,expression,and function of these metalloproteinases in hydra. 展开更多
关键词 HYDRA METALLOPROTEINASES development astacin matrix metalloproteinases ENDOTHELIN
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广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析 被引量:2
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作者 余良 谷麦 +1 位作者 曹斌斌 罗大民 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期426-432,共7页
目的通过对广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析,探讨其在虫体中的分布及功能。方法根据虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆和进化树分析;制备Ac-ALMP多抗血清,对广州管圆线虫L1,感染期L3和成虫... 目的通过对广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析,探讨其在虫体中的分布及功能。方法根据虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆和进化树分析;制备Ac-ALMP多抗血清,对广州管圆线虫L1,感染期L3和成虫进行免疫组织定位,通过Real-time PCR进行Ac-ALMP定量分析。结果获得广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全基因序列,并将其命名为Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease)。进化树分析Ac-ALMP基因的核酸序列与Dictyocaulus viviparous同源性较高。免疫荧光定位分析Ac-ALMP在广州管圆线虫的各期中主要分布于消化道(肠道与食道)。定量分析显示Ac-ALMP在各期中均有表达,其中L1相对表达量较高,L3次之。结论成功对Ac-ALMP蛋白进行了原核及真核表达,定量分析Ac-ALMP在虫体的肠道、角质层、精巢、体壁等均有分布,推测Ac-ALMP在广州管圆线虫寄生过程中起重要作用,可为广州管圆线虫病的防治及疫苗开发提供参考。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 虾红素金属蛋白酶 多克隆抗血清 免疫定位
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家蚕追寄蝇虾红素样精液蛋白酶EsSemp的基因克隆与特性分析
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作者 王耒耒 王闪闪 +6 位作者 浦月霞 刘吉银 王梅仙 朱娟 沈兴家 沈中元 唐顺明 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期222-231,共10页
虾红素样金属蛋白酶广泛存在于各种昆虫中,参与受精繁殖、孵化及消化等生理功能。为鉴定家蚕追寄蝇生殖繁育相关基因,利用RACE技术克隆获得家蚕追寄蝇虾红素样精液蛋白酶基因全长cDNA序列,命名为EsSemp(GenBank登录号:OP777491),其全长... 虾红素样金属蛋白酶广泛存在于各种昆虫中,参与受精繁殖、孵化及消化等生理功能。为鉴定家蚕追寄蝇生殖繁育相关基因,利用RACE技术克隆获得家蚕追寄蝇虾红素样精液蛋白酶基因全长cDNA序列,命名为EsSemp(GenBank登录号:OP777491),其全长为985 bp,ORF为771 bp,编码256个氨基酸残基。以染色体步移技术克隆获得EsSemp完整基因结构,由1个内含子和2个外显子组成。系统发生树结果显示,EsSemp与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)精液蛋白酶基因副本的产物CG15254高度同源。qRT-PCR结果显示,EsSemp在雄蝇副性腺表达较弱,在蝇蛆和成蝇的中肠和马氏管表达较强,在卵期0 h和卵后期大量表达,推测EsSemp参与了受精、孵化与消化代谢等过程。体外表达EsSemp蛋白,结果显示EDTA可抑制EsSemp酶活。以上研究结果为进一步阐明家蚕追寄蝇繁殖发育相关分子机制提供了参考,为开发家蚕蝇蛆病防治新途径提供了基础信息。 展开更多
关键词 家蚕追寄蝇 虾红素样蛋白酶基因 RACE 繁殖发育 蛋白质表达
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粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶基因的克隆、表达及定位分析
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作者 张碧瀛 单嘉男 +3 位作者 覃裴溪 周涛勋 周焕 胡敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期98-105,共8页
虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶,研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少,研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和... 虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶,研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少,研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和表达分析,为进一步研究其功能奠定基础。利用生物信息学方法对Ss-ast-1基因进行序列分析,通过转录组数据分析Ss-ast-1在各个发育阶段的转录水平,转基因技术进行虫体内表达定位分析。通过体外原核表达重组蛋白,Western blot分析其抗原性。采用免疫荧光组织化学方法对Ss-AST-1在粪类圆线虫幼虫体内的定位进行研究。结果显示:Ss-ast-1基因全长1905 bp,编码634个氨基酸;转录组分析该基因在iL3期的表达水平最高。定位分析表明该蛋白在虫卵细胞的细胞核和细胞质均有表达;体外表达重组蛋白的大小约67.5 kDa,Western blot分析表明多克隆抗体可以较好的识别全虫蛋白中的Ss-AST-1。免疫荧光结果显示Ss-AST-1在幼虫体内表达并分布幼虫的头部和体壁。Ss-ast-1属于虾青素金属蛋白酶家族,其可能在寄生虫入侵过程中发挥作用,为进一步探究粪类圆线虫蛋白功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 粪类圆线虫 虾青素金属蛋白酶 原核表达 显微注射
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ASTL抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响
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作者 赵舒雅 李航 樊赛军 《国际放射医学核医学杂志》 2021年第12期773-782,共10页
目的:探讨龙虾肽酶样金属内肽酶(ASTL)抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响。方法:培养人宫颈癌ME-180、HeLa细胞,根据细胞处理方法的不同,按以下方式进行分组。(1)将ME-180细胞分为4组:对照组、照射组(4 Gy)、ASTL抗体组... 目的:探讨龙虾肽酶样金属内肽酶(ASTL)抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响。方法:培养人宫颈癌ME-180、HeLa细胞,根据细胞处理方法的不同,按以下方式进行分组。(1)将ME-180细胞分为4组:对照组、照射组(4 Gy)、ASTL抗体组、ASTL抗体+照射组(4 Gy),采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测每组细胞的增殖能力与存活情况,并于照射后0、24、48、72 h采用免疫荧光、Western blot实验检测ASTL在细胞中的定位情况。(2)将ME-180细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组,分别进行0、2、4、8 Gy照射,并采用克隆形成实验检测每组细胞的增殖能力。(3)将HeLa细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组,分别进行0、2、4、8 Gy照射,采用MTT实验检测细胞的存活情况。(4)将ME-180细胞分为2组:短发夹RNA对照组(sh-对照组)、短发夹RNA ASTL转染组(sh-ASTL组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot实验检测蛋白激酶B(AKT)等靶基因的表达情况;同时,分别用0、5、10 nmoL/L的抗体处理ME-180细胞,采用Western blot实验检测抗体中和对靶基因表达情况的影响。(5)将ME-180细胞分为2组:对照组、照射组(4 Gy),采用Western blot实验检测ASTL、AKT等靶基因的表达情况。以上照射均使用137Csγ射线照射源,剂量率为1 Gy/min。组间比较采用独立样本t检验。结果:(1)EdU染色实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组(4 Gy)抑制了ME-180细胞的增殖,差异有统计学意义(t=9.25,P<0.05);MTT实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组(4 Gy)在照射后24、48、72 h时,ME-180细胞生长速度明显降低,且差异均有统计学意义(t=5.17、10.32、14.27,均P<0.05)。免疫荧光、Western blot实验结果显示,4 Gy照射后24 h时,ME-180细胞中ASTL在细胞质的定位显著增加,照射后48~72 h,ASTL重新定位于细胞膜上。(2)克隆形成实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组能够抑制8 Gy照射后ME-180细胞的增殖,且差异有统计学意义(t=7.63,P<0.05)。(3)HeLa细胞MTT实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组能够降低2、4、8 Gy照射后HeLa细胞的存活率,且差异均有统计学意义(t=4.27、9.66、15.71,均P<0.05)。(4)qRT-PCR实验结果显示,ASTL干扰片段转入后,AKT的表达水平下调(t=13.94,P<0.05),同时,Western blot实验结果表明,ASTL干扰或加入ASTL抗体能够降低AKT等靶基因的表达水平。(5)Western blot实验结果显示,与对照组相比,照射组(4 Gy)ASTL、AKT等靶基因的表达水平显著升高。结论:人宫颈癌ME-180细胞的放射敏感性与ASTL的水平相关,ASTL抗体或sh-ASTL能够增强照射后ME-180细胞的放射敏感性。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 辐射耐受性 抗体 龙虾肽酶样金属内肽酶
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