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pEGFP-C2-ASIC2a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达
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作者 倪文琳 唐杰 +2 位作者 潘春晓 葛金芳 陈飞虎 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第3期304-308,共5页
目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种... 目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pEGFPC2,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌DH5a,挑单克隆菌进行培养,提取质粒,再通过双酶切鉴定及测序后,用Lipofectamine 2000将所构建质粒转染入关节软骨细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,使用RT-PCR和Western blot法检测ASIC2a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果进行双酶切鉴定目的条带清晰准确,转染后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,通过RT-PCR可发现mRNA转录,Western blot法可发现目的蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-ASIC2a表达载体,将用于进一步观察ASICs对软骨细胞的影响。 展开更多
关键词 asic2a PEGFP-C2 软骨细胞 基因表达 蛋白表达
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真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a的构建及功能验证
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作者 李栋 张康 +2 位作者 马晓芸 袁维秀 刘晓燕 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期8-13,共6页
目的构建含大鼠ASIC2a全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)的绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFPN1-ASIC2a并转染至HEK293细胞,观察其表达和分布情况。方法设计、合成ASIC2a基因引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术,以现有质粒pc DNA3.1-ASIC2a为模板扩... 目的构建含大鼠ASIC2a全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)的绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFPN1-ASIC2a并转染至HEK293细胞,观察其表达和分布情况。方法设计、合成ASIC2a基因引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术,以现有质粒pc DNA3.1-ASIC2a为模板扩增出含有限制性内切酶(XhoⅠ与EcoRⅠ)酶切位点的ASIC2a基因片段与载体pEGFP-N1酶切后连接形成重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并瞬时转染至HEK293细胞中,利用细胞膜片钳方法观察其表达电流的情况。为进一步明确其亚细胞定位,将质粒EGFPN1-ASIC2a、pDs Red-Monomer-Mem和pDs Red2-ER共同转染至HEK293细胞中。结果 PCR扩增得到正确的ASIC2a基因片段,酶切鉴定和测序证实获得重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并将其瞬转至HEK293细胞后,成功记录到ASIC2a同聚体电流。然后利用共转染的方法观察到,pEGFP-N1-ASIC2a主要在HEK293细胞内质网表达,细胞膜表达较少。结论重组绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a构建成功,且在HEK293细胞中主要表达于内质网,为下一步研究ASIC2a的功能,特别是为ASIC2a在缺血性神经元损伤中的作用及其机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 asic2a 载体构建 真核表达载体 绿色荧光蛋白
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电针“内关”穴对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达影响的实验研究 被引量:4
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作者 王树东 董宝强 张立德 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第6期1360-1363,共4页
目的:实验通过电针"内关"穴,观察其对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达的影响。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠50只,体质量(230±50)g,由辽宁长生生物技术有限公司提供,采用随机对照方法分为正常组(A)、模型组(B)... 目的:实验通过电针"内关"穴,观察其对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达的影响。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠50只,体质量(230±50)g,由辽宁长生生物技术有限公司提供,采用随机对照方法分为正常组(A)、模型组(B)、内关组(C)、列缺组(D)、非经非穴组(E),每组10只。四肢皮下多点注射异丙肾上腺素。剂量:85 mg/kg,日1次,连续两次成模。造模成功后,分别进行电针治疗。1周后,各组SD大鼠腹腔注射水合氯醛(1 m L/100 g),活体分离大鼠左心室心肌,置于EP管中,放入-70℃冰箱,Western blot法检测各组ASIC2、ASIC3蛋白表达,Realtime RT-PCR法检测各组ASIC2、ASIC3的基因表达,并应用2^(-△Ctof)得出各组大鼠ASIC2、ASIC3的基因表达多少。腹主动脉抽血,离心后通过ELISA法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:电针"内关"穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达,降低肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论:电针"内关"穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达,从而抑制酸敏感离子通道开放,有效改善心肌缺血大鼠心肌细胞的损伤。 展开更多
关键词 内关 ASIC2 ASIC3 蛋白 基因
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苯丁酸钠对SHG-44胶质细胞瘤株的抗肿瘤作用机制研究 被引量:2
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作者 刘向光 黎禅玲 简晓红 《肿瘤药学》 CAS 2011年第6期493-496,共4页
目的观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用的机制是否涉及调节ASIC2的表达。方法体外培养人脑胶质细胞瘤株SHG-44,平皿克隆形成法测定细胞描定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析... 目的观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用的机制是否涉及调节ASIC2的表达。方法体外培养人脑胶质细胞瘤株SHG-44,平皿克隆形成法测定细胞描定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析细胞周期和凋亡率,Hoechst33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态,Western Bloting分析药物对ASIC2蛋白表达的影响。结果平皿集落形成法检测显示苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,且呈浓度依赖性。PI染色FCM结果表明苯丁酸钠以时间和浓度依赖方式对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用。Hoechst33258染色荧光显微镜观察可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,苯丁酸钠处理后凋亡细胞比例增加,且呈时间和浓度依赖性。Western Bloting检测显示苯丁酸钠诱导细胞凋亡的机制涉及上调ASIC2表达。结论苯丁酸钠在体外对人脑胶质细胞瘤株SHG-44具有抑制增值的作用,初步推断苯丁酸钠诱发人脑胶质细胞凋亡与其上调ASIC2表达有关。 展开更多
关键词 人脑胶质细胞 苯丁酸钠 凋亡 ASIC2
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Evaluation of high-resolution and depth-encoding PET detector modules based on single-ended readout with TOFPET2 ASIC
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作者 Mingchen Wang Yonggang Wang Liwei Wang 《Radiation Detection Technology and Methods》 CSCD 2021年第3期451-458,共8页
Purpose We developed a low-complexity,high-resolution depth-of-interaction(DOI)capable positron emission tomography(PET)detector and tested its performance to prove that it can be applied to practical PET instruments.... Purpose We developed a low-complexity,high-resolution depth-of-interaction(DOI)capable positron emission tomography(PET)detector and tested its performance to prove that it can be applied to practical PET instruments.Methods The detector module consists of a 24×24 LYSO crystal matrix,each with dimension of 1.04×1.04×15mm^(3),optically coupled to an 8×8 SiPM photo-sensor array with TOFPET2 ASIC single-ended readout.By only adding a light guide at the top of the crystal to reflect scintillation light back to the SiPM array,the continuous DOI information is extracted using a light sharing and redirection encoding method without adding system complexity.Results The crystal array with 9-to-1 coupling between scintillators and photo-sensors can be clearly separated in the flood image.The other detector performance in terms of DOI resolution,energy resolution and coincidence time resolution are measured on average as 4.1 mm,15.0%and 432 ps,respectively.Conclusion The test results confirm that the light sharing and redirection DOI encoding method can provide reasonably high DOI resolution without deteriorating other performance,even for highly pixelated PET detectors readout with commercially available ASIC chip.It has great potential for applications in future pre-clinical and organ-dedicated PET scanners. 展开更多
关键词 HIGH-RESOLUTION DEPTH-OF-INTERACTION TOFPET2 ASIC PET detector
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