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莱茵衣藻小G蛋白ARL1的原核表达、纯化及多克隆抗体制备 被引量：1
1
作者 陶冶 鲍冬雪 +1 位作者 刘雁霞 樊振川 《天津科技大学学报》 CAS 2024年第6期14-20,共7页
为研究小G蛋白ARL1在纤毛生成和纤毛信号转导过程中的作用,特制得一种特异性较强的莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)ARL1多克隆抗体。构建6×His标签的原核表达载体pET-28a(+)-arl1,并在大肠杆菌(E.coli)DH5α/C+感受态中诱导... 为研究小G蛋白ARL1在纤毛生成和纤毛信号转导过程中的作用,特制得一种特异性较强的莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)ARL1多克隆抗体。构建6×His标签的原核表达载体pET-28a(+)-arl1,并在大肠杆菌(E.coli)DH5α/C+感受态中诱导表达融合蛋白6×His-ARL1,经纯化后免疫新西兰雄性大白兔。3次免疫后取耳动脉血清,以间接ELISA法测试效价后取血。通过Protein A和抗原抗体亲和纯化后获得了灵敏度高、特异性强的ARL1抗体。通过免疫荧光和免疫印迹(Western blot)检测,发现大量ARL1定位于细胞质、细胞基体和纤毛,为后续研究ARL1在莱茵衣藻纤毛生成和信号转导中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 arl1 原核表达 多克隆抗体 莱茵衣藻
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ADP核糖基化因子样6相互作用蛋白1(ARL6IP1)低表达对电离辐射所致小鼠小肠上皮细胞损伤的影响 被引量：1
2
作者 闫华 邢源 +5 位作者 叶雨萌 郝延辉 喻超 贾兆乾 左红艳 李杨 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期588-594,共7页
目的探讨ADP核糖基化因子样6相互作用蛋白1(ARL6IP1)对电离辐射后小肠上皮细胞损伤的影响。方法①动物实验:C57BL/6N小鼠进行^(60)Co源γ射线全腹部单次照射,剂量15 Gy,制备小鼠放射性肠损伤模型,Western印迹法测定正常对照组及照射后1,... 目的探讨ADP核糖基化因子样6相互作用蛋白1(ARL6IP1)对电离辐射后小肠上皮细胞损伤的影响。方法①动物实验:C57BL/6N小鼠进行^(60)Co源γ射线全腹部单次照射,剂量15 Gy,制备小鼠放射性肠损伤模型,Western印迹法测定正常对照组及照射后1,3,7和14 d小鼠空肠组织ARL6IP1蛋白表达。②细胞实验:设计3条不同序列的Arl6ip1-小干扰RNA(siRNA)(Arl6ip1-siRNA-132,Arl6ip1-siRNA-249和Arl6ip1-siRNA-565),以慢病毒LV5(EF-1aF/GFP&Puro)为载体,构建Arl6ip1敲低的小肠上皮IEC-6细胞。用流式细胞术测定上述慢病毒转染细胞绿色荧光蛋白表达,计算转染效率。分别用CCK-8法和免疫荧光法测定细胞存活率和磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达水平。结果①动物实验:与正常对照组相比,小鼠腹部照射15 Gy后1和3 d,空肠组织中ARL6IP1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);照射后7和14 d,ARL6IP1蛋白表达无显著差异。②细胞实验:阴性对照siRNA组和Arl6ip1-siRNA-565组慢病毒的转染效率均>80%,Arl6ip1-siRNA-132和Arl6ip1-siRNA-249组慢病毒转染效率<80%。与阴性对照siRNA组相比,转染Arl6ip1-siRNA-565慢病毒的IEC-6细胞中ARL6IP1蛋白表达显著降低(P<0.05)。照射15 Gy后,与阴性对照siRNA细胞相比,Arl6ip1-siRNA-565转染后Arl6ip1敲低细胞存活率显著下降(P<0.01),γH2AX表达显著升高(P<0.01)。结论ARL6IP1低表达可促进照射后细胞DNA损伤,抑制细胞存活,从而加重电离辐射所致小鼠小肠上皮细胞损伤。 展开更多
关键词 电离辐射 肠损伤 小干扰RNA ADP核糖基化因子样6相互作用蛋白1(ARL6IP1) DNA损伤
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沉默circRNA hsa_circ_0061137通过miR-217/ARL6IP1轴抑制宫颈癌细胞生长和转移 被引量：1
3
作者 张小利 董丽 +3 位作者 杜晨旭 崔玲玲 张适 谢林森 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第3期435-442,共8页
目的:探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)hsa_circ_0061137对宫颈癌(cervical cancer,CC)生长转移的影响及其相关作用机制。方法:取CC组织样本(93例)及癌旁组织样本(93例),正常宫颈上皮细胞系(End1/E6E7)和CC细胞系(HeLa、SiHa、C-33A、... 目的:探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)hsa_circ_0061137对宫颈癌(cervical cancer,CC)生长转移的影响及其相关作用机制。方法:取CC组织样本(93例)及癌旁组织样本(93例),正常宫颈上皮细胞系(End1/E6E7)和CC细胞系(HeLa、SiHa、C-33A、CaSki),用qRT-PCR法检测组织和细胞中hsa_circ_0061137、miR-217、ARL6IP1的表达;双荧光素酶报告实验验证hsa_circ_0061137、ARL6IP1与miR-217的靶向调控作用。敲低CC细胞系(HeLa、SiHa)中hsa_circ_0061137及HeLa细胞共转染si-hsa_circ_0061137和miR-217抑制物(miR-217 inhibitor)后,用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、Vimentin)的表达;qRT-PCR法检测各组细胞中hsa_circ_0061137、miR-217、ARL6IP1的表达。裸鼠荷瘤实验检测敲低hsa_circ_0061137后对肿瘤生长的影响。结果:hsa_circ_0061137、ARL6IP1在CC组织及细胞系中表达水平显著高于正常宫颈组织及正常宫颈上皮细胞(P<0.05);miR-217在CC组织及细胞系中表达水平显著低于正常宫颈组织及正常宫颈上皮细胞(P<0.05)。hsa_circ_0061137、ARL6IP1分别与miR-217之间存在靶向负调控关系。敲低hsa_circ_0061137,可抑制CC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT特性,并促进CC细胞凋亡(P<0.05);miR-217 inhibitor可部分逆转hsa_circ_0061137敲低发挥的抗CC生长及转移作用(P<0.05)。裸鼠荷瘤实验证实hsa_circ_0061137敲低可显著减弱瘤体生长增殖,并抑制ARL6IP1表达(P<0.05)。结论:沉默hsa_circ_0061137可发挥抗CC增殖及转移作用,其作用可能与靶向miR-217/ARL6IP1轴有关。 展开更多
关键词 环状RNA hsa_circ_0061137 miR-217/ARL6IP1信号轴 宫颈癌 生长 转移
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