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ARH3通过稳定MCM2-7表达促进神经胶质母细胞瘤增殖
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作者 谢晓娟 胡开顺 《岭南现代临床外科》 2023年第1期49-57,63,共10页
目的 探讨ADP-核糖水解酶ARH3在神经胶质母细胞瘤内促进细胞增殖的机制。方法 通过GEPIA2和CPTAC数据库分析ARH3在胶质母细胞瘤中的mRNA及蛋白水平的表达量;设计两条siRNA并分别转入胶质母细胞瘤细胞系U87和LN229细胞内沉默ARH3的表达,... 目的 探讨ADP-核糖水解酶ARH3在神经胶质母细胞瘤内促进细胞增殖的机制。方法 通过GEPIA2和CPTAC数据库分析ARH3在胶质母细胞瘤中的mRNA及蛋白水平的表达量;设计两条siRNA并分别转入胶质母细胞瘤细胞系U87和LN229细胞内沉默ARH3的表达,利用Western Blot验证ARH3的敲低效率;克隆形成检测细胞增殖情况;流式细胞术检测不同时期的细胞比例;利用EdU实验检测细胞处于S期的比例;构建Flag标签的ARH3过表达载体并转染进入细胞,通过免疫共沉淀技术结合质谱分析ARH3的相互作用蛋白组并进行相关通路网络富集分析;通过细胞转染siRNA结合Western Blot验证ARH3对细胞周期相关蛋白稳定性的影响;采用细胞转染siRNA结合质谱技术分析ARH3沉默后胶质母细胞瘤细胞内部的信号通路网络变化。结果 GEPIA2和CPTAC数据库结果显示胶质母细胞瘤显著高表达ADP-核糖水解酶ARH3(P<0.05);在胶质母细胞瘤U87和LN229内敲低内源ARH3后,克隆形成数目减少(P<0.05);流式结果显示内源性ARH3敲降细胞G1期比例增加(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);EdU实验结果显示S期细胞的比例减少(P<0.05);免疫共沉淀联合质谱结果鉴定显示细胞周期相关蛋白与ARH3存在相互作用;Western Blot结果显示ARH3的沉默明显降低MCM2-7的蛋白水平,抑制S期周期蛋白表达量;质谱结果显示ARH3的缺失下调了细胞周期相关通路蛋白的表达量。结论 ADP-核糖水解酶ARH3在胶质母细胞瘤内高表达;ARH3通过促进胶质母细胞瘤在G1/S期的转换,从而维持细胞周期的正常进行,促进细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 arh3 细胞周期 细胞增殖 MCM2-7
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