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长角血蜱唾液腺Apyrase的生物学特性和功能的研究 被引量：6
1
作者 程远国 吴厚永 +2 位作者 李德昌 李成文 赵彤言 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2000年第3期175-182,共8页
长角血蜱在吸血时 ,其唾液腺中的 apyrase可明显地抑制由 A DP所诱导的血小板聚集反应 ,并呈剂量反应关系 ,1/ 2对唾液腺可以完全抑制血小板的聚集反应。通过 apyrase的动力学、 HPLC分子筛、等电聚焦电泳和温度敏感性实验证明 ,水解 AT... 长角血蜱在吸血时 ,其唾液腺中的 apyrase可明显地抑制由 A DP所诱导的血小板聚集反应 ,并呈剂量反应关系 ,1/ 2对唾液腺可以完全抑制血小板的聚集反应。通过 apyrase的动力学、 HPLC分子筛、等电聚焦电泳和温度敏感性实验证明 ,水解 ATP和 ADP并不是 ATP酶、 ADP酶或几种酶共同作用的结果 ,而是一种酶即 apyrase的作用结果。Apyrase对 Ca2 +具有依赖性。而 Mg2 +、Zn2 +、Mn2 +对之影响较小 ,Hg2 +和EDTA是 apyrase的抑制剂。吸血对蜱唾液腺 apyrase活性影响较大 ,吸血 6天时其活性最大 ,吸血后活力明显下降。A pyrase与哺乳动物的 5′-核苷酸酶相似 ,它是一种糖基 -磷脂酰肌醇 ( GPI)膜锚结构蛋白。 展开更多
关键词 长角血蜱 唾液腺 apyrase 血小板聚集
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志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备
2
作者 王羽 周围 +5 位作者 廖翔 高原 戴红梅 岳俊杰 梁龙 呼和巴特尔 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1080-1084,共5页
目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒... 目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗。Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清。结果:成功构建了原核表达载体pET24a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功。结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 志贺菌福氏5a M90T apyrase 多克隆抗体
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生物发光法测定天然水体细菌数量中游离ATP的去除 被引量：8
3
作者 王佳欣 崔璐璐 谢冰 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1091-1095,共5页
天然水体中存在浮游动植物等体细胞和游离ATP,会对细菌ATP的测定产生严重的干扰,所以探究体细胞和游离ATP的消除方法是生物发光法测定细菌总数中不可缺少的预处理步骤.本文研究了体细胞提取剂Tritonx-100的最适浓度和最适提取时间,游离... 天然水体中存在浮游动植物等体细胞和游离ATP,会对细菌ATP的测定产生严重的干扰,所以探究体细胞和游离ATP的消除方法是生物发光法测定细菌总数中不可缺少的预处理步骤.本文研究了体细胞提取剂Tritonx-100的最适浓度和最适提取时间,游离ATP水解酶apyrase的最适浓度和对细菌ATP测定的影响,并将包含Tritonx-100和apyras e酶的体细胞排除体系应用于实际天然水体细菌数量的测定.结果显示,0.4%的Tritonx-100作用水样2 min能够有效提取水样中的体细胞;Apyrase酶浓度达到0.2 U时能够有效水解水样中的游离ATP;Apyrase酶的加入对细菌无水解作用,对细菌ATP的测定无明显影响;包含Tritonx-100和apyrase酶的体细胞排除体系能够裂解体细胞而不会对细菌ATP的测定造成显著影响;应用于实际天然水体的结果也表明,体细胞排除体系可为ATP生物发光法准确测定环境样品中的细菌数量创造条件.本研究表明,经Tritonx-100和apyrase酶处理后,基本能够排除体细胞和游离ATP的干扰,得到天然水体中的实际细菌总数. 展开更多
关键词 ATP生物发光法 TRITONX-100 apyrase 体细胞ATP 游离ATP
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培养的牛心内膜内皮细胞水解细胞外腺苷酸<英文>
4
作者 易富贤 刘文兰 +2 位作者 谌立伟 曾珊 郭兆贵 《中国药理学报》 CSCD 1999年第8期745-749,共5页
目的:研究牛心内膜内皮细胞(BEEC)腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)的特性并比较牛心内膜及血管内皮细胞的胞外腺苷酸酶活性。方法:以反相HPLC测定核苷酸含量,以磷离子释放法检测apyrase活性。结果:叠氮钠10mmol·L^(-1)和氟化钠20mmol&... 目的:研究牛心内膜内皮细胞(BEEC)腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)的特性并比较牛心内膜及血管内皮细胞的胞外腺苷酸酶活性。方法:以反相HPLC测定核苷酸含量,以磷离子释放法检测apyrase活性。结果:叠氮钠10mmol·L^(-1)和氟化钠20mmol·L^(-1)分别抑制BEEC apyrase 51％及38％活性,而Na^+/K^+ -ATP酶抑制剂哇巴因则对BEEC apyrase活性无影响。过氧化氢0.5mmol·L^(-1)呈时间依赖性地抑制心内膜内皮细胞apyrase活性。BEEC的apyrase活性低于主动脉内皮细胞的apyrase活性,而BEEC的胞外AMP酶则远较血管内皮细胞的活性高。结论:BEEC apyrase具有叠氮钠和氟化钠敏感的、哇巴因不敏感的特性;与血管内皮细胞相比,BEEC apyrase活性较高而胞外AMP酶活性较低。 展开更多
关键词 心内膜 血管内 腺苷酸类 叠氮钠 apyrase
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