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胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIVA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立 被引量：13
1
作者 黄红亮 周锐 +3 位作者 陈美玲 刘建杰 徐晓娟 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期294-299,共6页
参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2 4 4 5bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET_2 8b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,... 参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2 4 4 5bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET_2 8b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,再转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG的诱导下表达大小约 90kD的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在 ,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法 (ApxIVA_ELISA) ,特异性良好。用ApxIVA_ELISA检测猪胸膜肺炎三价 (1、2和 7型 )灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性 ,而 1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明 ,ApxIVA_ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体 ,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxiv 克隆与表达 ELISA 鉴别诊断
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猪传染性胸膜肺炎的ApxIV-ELISA检测方法 被引量：7
2
作者 李凤梅 龙小曾 +4 位作者 李崇 谢娟 苏亚权 林昌华 钟诚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2098-2101,共4页
【目的】建立一种敏感性好、简便快捷,适用于临床诊断、实验室检测和血清学调查的诊断技术,为规模化养猪场监控胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染及净化猪传染性胸膜肺炎(PCP)提供技术支撑。【方法】以ApxIV重组蛋白为抗原,建立ApxIV-ELISA检... 【目的】建立一种敏感性好、简便快捷,适用于临床诊断、实验室检测和血清学调查的诊断技术,为规模化养猪场监控胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染及净化猪传染性胸膜肺炎(PCP)提供技术支撑。【方法】以ApxIV重组蛋白为抗原,建立ApxIV-ELISA检测方法,经可行性、特异性、准确性、重复性检验后,对采自广西南宁周边地区随机抽取的未免疫APP疫苗育肥猪与经产母猪进行血清抗体检测。【结果】经试验证实,以ApxIV-ELISA检测APP具有可行性,且具有特异性良好、准确性较高、重复性较好的特点,其判断标准:S(样品孔OD630 nm)≥0.397为阳性,S<0.397为阴性。以ApxIV-ELISA检测的90份血清样品中有40份为阳性,阳性率为44.4%;其中经产母猪阳性血清33份,占总阳性血清的82.5%。【结论】广西南宁周边地区的养猪场已普遍存在APP感染,特别是经产母猪较严重。采用ApxIV-ELISA检测方法能及时鉴别诊断猪群的APP感染情况,且敏感性好、简便快捷,适用于临床诊断、实验室检测和血清学调查。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌 经产母猪 阳性率 apxiv—ELISA
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胸膜肺炎放线杆菌血清7型apxIV基因缺失突变株的构建和鉴定
3
作者 刘金林 郭毅 +3 位作者 谭臣 陈砚 贝为成 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期634-638,共5页
ApxIV是胸膜肺炎放线杆菌的一种RTX毒素,为探究其在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中的作用,以血清7型APP HB04为亲本菌株,通过接合转移和负向筛选方法,构建了一株apxIV基因缺失突变株。通过PCR、序列分析、Southern blot分析及遗传稳定性分... ApxIV是胸膜肺炎放线杆菌的一种RTX毒素,为探究其在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中的作用,以血清7型APP HB04为亲本菌株,通过接合转移和负向筛选方法,构建了一株apxIV基因缺失突变株。通过PCR、序列分析、Southern blot分析及遗传稳定性分析等证明成功构建了突变株。对突变株生物学特性进行初步研究,发现突变株与亲本菌株相比,体外生长速度未发生明显变化,对小鼠的致病力有所降低。结果表明,毒素ApxⅣ在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中发挥一定作用。突变株的成功构建及生物学特性研究为进一步阐明胸膜肺炎放线杆菌的致病性及开发更为安全、高效的基因工程疫苗奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxiv 突变株 构建 鉴定
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安徽地区猪传染性胸膜肺炎流行病学调查 被引量：13
4
作者 施雷 李郁 +7 位作者 魏建忠 耿照玉 殷宗俊 顾秋成 王海洋 李好磊 郭志英 孙裴 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期922-925,共4页
为了解安徽地区猪传染性胸膜肺炎(PCP)的流行情况,本研究采用ApxIV-ELISA试剂盒对1 288份猪血清样品中胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染抗体进行检测,并采用PCR方法对573份母猪鼻腔棉拭子样品和92份屠宰生猪肺脏样品的APP核酸检测。结果显示,... 为了解安徽地区猪传染性胸膜肺炎(PCP)的流行情况,本研究采用ApxIV-ELISA试剂盒对1 288份猪血清样品中胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染抗体进行检测,并采用PCR方法对573份母猪鼻腔棉拭子样品和92份屠宰生猪肺脏样品的APP核酸检测。结果显示,APP感染抗体总阳性率为26.40%,母猪/后备母猪/公猪APP感染抗体阳性率(45.47%)高于哺乳仔猪(28.02%)、保育猪(6.16%)、育肥猪(7.20%);夏季(41.42%)高于春季(29.75%)、秋季(26.35%)、冬季(19.26%);淮北地区(30.73%)和江淮地区(28.57%)高于皖南地区(13.77%);中型猪场(47.16%)高于大型猪场(19.28%)和小型猪场及散养户(23.15%);屠宰生猪肺脏样品APP核酸阳性率(11.96%)高于母猪鼻腔棉拭子(1.92%)。ELISA试剂盒与PCR同步检测的符合率为49.77%。表明PCP在安徽地区普遍存在,为引起猪呼吸道疾病综合征的主要原因之一。本研究结果为PCP的有效防控提供了现地调查依据。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎 apxiv—ELISA PCR 流行病学
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猪胸膜肺炎放线杆菌间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
5
作者 刘珊珊 陈征 +2 位作者 刘健 贺东生 罗满林 《中国兽药杂志》 2008年第7期1-4,共4页
用纯化的重组蛋白抗原作为ELISA包被抗原,通过对抗原包被浓度、血清稀释倍数、酶标二抗稀释倍数、抗原和血清反应时间、血清和酶标二抗反应时间、显色剂作用时间和中止液滴加量的优化,建立了检测胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接ELISA方法。... 用纯化的重组蛋白抗原作为ELISA包被抗原,通过对抗原包被浓度、血清稀释倍数、酶标二抗稀释倍数、抗原和血清反应时间、血清和酶标二抗反应时间、显色剂作用时间和中止液滴加量的优化,建立了检测胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接ELISA方法。特异性实验证明该ELISA方法特异性较强。将建立的ELISA方法与IDEXX公司的标准试剂盒进行了比较,二者的符合率较高,说明建立的ELISA方法比较敏感,为ELISA检测方法的商品化奠定了基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxiv 间接ELISA
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胸膜肺炎放线杆菌APXⅣ部分基因片段的表达及纯化 被引量：1
6
作者 刘珊珊 陈征 +2 位作者 刘健 王新波 罗满林 《中国动物检疫》 CAS 2009年第7期33-36,共4页
参照GenBank中已发表的ApxⅣ基因序列,以自行分离的AppDNA为模板,利用PCR方法扩增出ApxⅣ3’端,大小为552bp的保守基因序列。将PCR产物克隆到pMD18-T Simple Vector中,获得重组质粒pMD-ApxⅣ,对其重组质粒pMD-ApxⅣ进行BamHI、HindIII... 参照GenBank中已发表的ApxⅣ基因序列,以自行分离的AppDNA为模板,利用PCR方法扩增出ApxⅣ3’端,大小为552bp的保守基因序列。将PCR产物克隆到pMD18-T Simple Vector中,获得重组质粒pMD-ApxⅣ,对其重组质粒pMD-ApxⅣ进行BamHI、HindIII双酶切,并将酶切产物克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组表达质粒pET-ApxⅣ。将表达质粒转化至大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明pET-ApxⅣ在BL21中成功表达,并能被App阳性血清所识别,具有良好的免疫原性。表达蛋白的分子质量约为39.5KDa。利用HiTrapFFcrude columns将表达的蛋白进行了纯化。 展开更多
关键词 APP APXⅣ 克隆 表达 纯化
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涪陵区集约化猪场猪传染性胸膜肺炎血清学调查
7
作者 蔺露 张传平 +1 位作者 黄强 何玉发 《畜牧市场》 2010年第8期60-60,共1页
为了调查猪传染性胸膜肺炎在我区集约化猪场的流行情况,我们采用血清学方法于2009年11月对本区19个集约化猪场未免疫猪传染性胸膜肺炎疫苗的哺乳仔猪和成年种猪进行抽样调查,380份血清样品用间接ELISA对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxIV... 为了调查猪传染性胸膜肺炎在我区集约化猪场的流行情况,我们采用血清学方法于2009年11月对本区19个集约化猪场未免疫猪传染性胸膜肺炎疫苗的哺乳仔猪和成年种猪进行抽样调查,380份血清样品用间接ELISA对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxIV蛋白进行抗体检测。结果表明,血清样品阳性率为28.95%,其中哺乳仔猪和成年种(母)猪抗体阳性率分别为15.79%和42.22%。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎 猪胸膜肺炎放线杆菌apxiv蛋白 间接ELISA
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