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APOBEC-3F和APOBEC-3G与乙肝核心抗原的相互作用研究
1
作者 王革非 曾祥兴 +4 位作者 李蕊 苏景华 刘俊 周艳琳 李康生 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2015年第3期182-186,共5页
目的:人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽APOBEC-3F(A3F)和APOBEC-3G(A3G)可抑制HBV复制,并参与HBV基因组的超突变,其中HBc Ag被认为是潜在作用位点,为此本文研究A3F和A3G与HBcAg可能存在的蛋白相互作用方式。方法:RT-PCR克隆人A3F和A3G的c... 目的:人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽APOBEC-3F(A3F)和APOBEC-3G(A3G)可抑制HBV复制,并参与HBV基因组的超突变,其中HBc Ag被认为是潜在作用位点,为此本文研究A3F和A3G与HBcAg可能存在的蛋白相互作用方式。方法:RT-PCR克隆人A3F和A3G的cDNA,并构建相应酵母双杂交表达载体pGADT7-A3F/-A3G;PCR克隆HBV ayw亚型HBcAg基因,构建其酵母双杂交表达载体p GBKT7-HBc Ag。p GBKT7-HBc Ag分别与p GADT7-3G和p GADT7-3F共转化AH109酵母菌,利用营养二缺平板及四缺平板培养及α-半乳糖苷酶活性测试,检测HBc Ag与A3F和A3G的直接作用情况。构建含有HBcAg、人A3F和A3G基因的多种标签融合真核表达质粒,脂质体法转染HeLa细胞后进行免疫共沉淀实验(Co-IP),并通过Western blot检测免疫共沉淀产物确定HBcAg与A3F和A3G之间是否存在间接相互作用。结果:酶切及DNA测序分析表明成功克隆HBcAg、人A3F和A3G,并成功构建酵母双杂交、真核表达及亚细胞定位相关的表达质粒。通过酵母双杂交实验对α-半乳糖苷酶定性和定量检测显示,A3F和A3G与HBcAg无显著的直接相互作用。Western blot及Co-IP实验结果表明A3F和A3G与HBcAg均存在相互作用。结论:A3F和A3G蛋白与HBcAg蛋白之间确实存在相互作用,推测这种作用不是通过两个蛋白直接结合实现的。 展开更多
关键词 apobec-3F apobec-3g 乙肝核心抗原 酵母双杂交 免疫共沉淀
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A549和MDCK细胞外源性表达人APOBEC-3F和APOBEC-3G对流感病毒复制和突变的影响
2
作者 王革非 彭程 +2 位作者 曾祥兴 张驰 李康生 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2010年第5期346-351,共6页
目的:研究人载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽-3F(human apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide 3F,hA3F)和hA3G对流感病毒的复制和突变的影响。方法:外源性hA3F和hA3G通过脂质体转染至A549和MDCK细胞中,经Western bl... 目的:研究人载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽-3F(human apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide 3F,hA3F)和hA3G对流感病毒的复制和突变的影响。方法:外源性hA3F和hA3G通过脂质体转染至A549和MDCK细胞中,经Western blotting和间接免疫荧光鉴定后,用流感病毒进行感染,通过检测半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)和空斑实验确定病毒滴度;使用不同初始感染剂量,绘制动态的病毒生长曲线,以确认hA3F和hA3G对流感病毒复制的影响。Western blotting检测流感病毒感染后转染细胞表达外源性hA3F和hA3G的情况。病毒在转染细胞和对照细胞中连续传代,RT-PCR和测序分析其血凝素HA基因的突变频率。结果:TCID50检测和空斑实验结果表明在hA3F和hA3G表达细胞中,流感病毒的滴度与对照细胞间差异无统计学意义(P>0.05);病毒生长曲线表明,不同初始感染剂量、不同感染时相,转染hA3F和hA3G的细胞对人流感病毒的抑制作用与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果表明感染后48h仍能够在MDCK细胞中检测到hA3F和hA3G的重组蛋白。病毒HA片段的测序分析表明,转染hA3F和hA3G的细胞对流感病毒基因组的致突变频率与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究表明hA3F和hA3G这两个重要的APOBEC成员,对人流感病毒的复制效率及突变频率无明显作用。 展开更多
关键词 apobec-3F apobec-3g 流感病毒 复制 突变 A549
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APOBEC3G与Vif在HIV-1感染中的作用
3
作者 马寅佳 杨怡姝 曾毅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期496-500,共5页
载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide-like,APOBEC)蛋白是一组胞嘧啶脱氨基酶,具有天然的抗病毒活性,对多种病毒具有抑制作用,特别是逆转录病毒.APOBEC3蛋白能够抑制人类免疫缺陷病毒(HI... 载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide-like,APOBEC)蛋白是一组胞嘧啶脱氨基酶,具有天然的抗病毒活性,对多种病毒具有抑制作用,特别是逆转录病毒.APOBEC3蛋白能够抑制人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的感染,其中APOBEC3G和APOBEC3F的作用最强.APOBEC3G能够通过胞嘧啶脱氨基作用和非胞嘧啶脱氨基作用抑制病毒感染.HIV-1病毒感染因子(Vif)蛋白主要经泛素-蛋白酶体途径介导APOBEC3G降解,从而拮抗其抗病毒作用.APOBEC3G和Vif之间相互作用的研究对于寻求新的抗HIV治疗靶点具有重要意义. 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样3g 病毒感染因子
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