为深入研究山羊AP1M1(adaptor related protein complex 1 subunit mu 1)在机体生长和繁殖中的作用,采用RT-PCR方法克隆了山羊AP1M1基因,并对其序列和编码蛋白进行分析;构建了pET-30α-AP1M1原核表达载体,免疫实验兔,制备AP1M1基因多克...为深入研究山羊AP1M1(adaptor related protein complex 1 subunit mu 1)在机体生长和繁殖中的作用,采用RT-PCR方法克隆了山羊AP1M1基因,并对其序列和编码蛋白进行分析;构建了pET-30α-AP1M1原核表达载体,免疫实验兔,制备AP1M1基因多克隆抗体;采用qPCR和Western blot检测比较AP1M1在山羊不同组织及睾丸不同发育时期的表达特征。结果显示,山羊AP1M1基因CDS为1 272 bp,编码423个氨基酸,具有1个Clat-adaptor结构域、1个Adap-comp结构域和5个蛋白质-蛋白质结合位点,在哺乳动物中极为保守。间接ELISA和Western blot结果表明,制备的兔抗pET-30α-AP1M1多克隆抗体效价为1∶128 000,可以与重组蛋白特异性结合。表达模式检测结果显示,AP1M1在成年山羊各组织中均有不同程度的表达,其中在肾脏的表达量最高,其次是睾丸,均极显著高于其他组织(P<0.01);此外,AP1M1在山羊不同发育时期睾丸组织中均有表达,但在性成熟时显著增加(P<0.01),体成熟时达到最高。本试验为进一步探索该基因在山羊睾丸中的功能奠定基础。展开更多
文摘为深入研究山羊AP1M1(adaptor related protein complex 1 subunit mu 1)在机体生长和繁殖中的作用,采用RT-PCR方法克隆了山羊AP1M1基因,并对其序列和编码蛋白进行分析;构建了pET-30α-AP1M1原核表达载体,免疫实验兔,制备AP1M1基因多克隆抗体;采用qPCR和Western blot检测比较AP1M1在山羊不同组织及睾丸不同发育时期的表达特征。结果显示,山羊AP1M1基因CDS为1 272 bp,编码423个氨基酸,具有1个Clat-adaptor结构域、1个Adap-comp结构域和5个蛋白质-蛋白质结合位点,在哺乳动物中极为保守。间接ELISA和Western blot结果表明,制备的兔抗pET-30α-AP1M1多克隆抗体效价为1∶128 000,可以与重组蛋白特异性结合。表达模式检测结果显示,AP1M1在成年山羊各组织中均有不同程度的表达,其中在肾脏的表达量最高,其次是睾丸,均极显著高于其他组织(P<0.01);此外,AP1M1在山羊不同发育时期睾丸组织中均有表达,但在性成熟时显著增加(P<0.01),体成熟时达到最高。本试验为进一步探索该基因在山羊睾丸中的功能奠定基础。
