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知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型大鼠精子线粒体通透性转化的影响 被引量：4
1
作者 宾东华 王孙亚 +1 位作者 周青 何清湖 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期540-546,共7页
目的:观察知柏地黄汤对解脲脲原体(UU)感染模型大鼠精子线粒体通透性转化的影响。方法:取SPF级SD雄性大鼠90只,随机分成正常对照组、模型组、中药组(知柏地黄汤)、西药组(强力霉素)、中西组(知柏地黄汤+强力霉素),除正常对照组外,其他... 目的:观察知柏地黄汤对解脲脲原体(UU)感染模型大鼠精子线粒体通透性转化的影响。方法:取SPF级SD雄性大鼠90只,随机分成正常对照组、模型组、中药组(知柏地黄汤)、西药组(强力霉素)、中西组(知柏地黄汤+强力霉素),除正常对照组外,其他组均采用经大鼠膀胱注射UU建立UU感染动物模型。造模成功后,给予对应药物连续灌胃21 d,末次给药24 h后取标本,采用RT-PCR法测定大鼠精子线粒体VDAC_2m RNA、ANT_4m RNA表达水平,采用Western印迹法检测大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平,采用高效液相色谱法检测精子线粒体ATP、ADP、AMP含量。结果:正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子VDAC_2蛋白表达水平分别为0.626±0.074、0.039±0.011、0.101±0.037、0.236±0.070、0.475±0.064;ANT_4蛋白表达水平分别为0.527±0.096、0.044±0.011、0.127±0.040、0.253±0.054、0.367±0.086;模型组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.05,P<0.01);西药组、中西组较模型组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平显著升高(P<0.01);西药组、中西组较中药组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平上升显著(P<0.05,P<0.01);中西组较西药组线粒体VDAC_2蛋白表达水平上升显著(P<0.01)。正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子VDAC_2m RNA表达水平分别为0.008±0.001 035、0.000 79±0.000 226、0.002 06±0.000 861、0.003 34±0.000 229、0.004 85±0.000 495;ANT_4m RNA表达水平分别为0.026 50±0.003 401、0.001 64±0.000 205、0.005 04±0.002 537、0.008 57±0.000 690、0.013 13±0.000 826;模型组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平明显低于正常对照组(P<0.05,P<0.01);治疗组(中药组、西药组、中西组)大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平较模型组显著升高(P<0.01);西药组、中西组较中药组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平显著上升(P<0.01);中西组较西药组大鼠精子VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平显著上升(P<0.01)。正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子ATP值分别为(203.41±13.16)、(96.22±12.55)、(101.99±5.97)、(159.44±33.16)、(194.07±9.36)mg/L;ADP值分别为(129.87±14.68)、(99.87±3.28)、(104.99±16.40)、(118.51±12.99)、(121.62±9.41)mg/L;AMP值分别为(149.05±5.65)、(212.53±19.43)、(183.97±12.43)、(160.64±14.19)、(150.21±12.87)mg/L;EC值分别为0.56±0.01、0.36±0.03、0.40±0.01、0.50±0.06、0.55±0.01;与正常对照组比较,模型组大鼠精子ATP及EC值降低,AMP值上升,差异有显著性(P<0.01)。与模型对照组比较,西药组、中西组大鼠精子ATP及EC值上升,AMP值下降,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。与中西组比较,中药组大鼠精子ATP及EC值下降,AMP值上升,西药组大鼠精子ATP、EC值下降,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:UU感染能使大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平下降,VDAC_2m RNA、ANT_4m RNA表达水平降低,使ANT/VDAC的转运异常,进而使线粒体能量代谢异常,ATP、ATP/ADP及EC值下降。知柏地黄汤能够使UU感染大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平上升,VDAC_2m RNA、ANT_4m RNA表达水平升高,调控ANT/VDAC蛋白复合体的转运功能,保证了ATP、ADP在线粒体与胞质间的有效转运,提升ATP、ATP/ADP及EC值,维护了大鼠精子线粒体正常的能量代谢。这可能是知柏地黄汤治疗UU感染性不育症的机制之一。 展开更多
关键词 知柏地黄汤 解脲脲原体 线粒体膜通透性 VDAC2 ant4 能量代谢
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牦牛SLC25A31基因的CDS序列及其表达蛋白生物信息学分析 被引量：1
2
作者 王志强 俞红贤 +4 位作者 荆海霞 张勤文 魏青 梁林 牛亮 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期29-32,227,共5页
为了研究牦牛ANT4在脑组织中的表达情况,试验通过RT-PCR技术克隆牦牛SLC25A31基因的cDNA序列,并利用DNAMAN、MAGA4、SWISS-MODEL、ExPASy等生物信息学软件系统对其进行分析。结果表明:扩增出的牦牛SLC25A31基因的编码区长972 bp,编码32... 为了研究牦牛ANT4在脑组织中的表达情况,试验通过RT-PCR技术克隆牦牛SLC25A31基因的cDNA序列,并利用DNAMAN、MAGA4、SWISS-MODEL、ExPASy等生物信息学软件系统对其进行分析。结果表明:扩增出的牦牛SLC25A31基因的编码区长972 bp,编码323个氨基酸;与普通牛、鼠和人相应基因核苷酸序列进行比对,序列一致性分别为99.28%、84.88%和89.81%;其编码蛋白分子质量为35.695 ku,含多个修饰位点。说明SLC25A31基因的CDS序列及其表达蛋白的结构在高原牦牛与普通牛间并无明显差异,保守性极强;并且通常在睾丸中表达的ANT4在高原牦牛脑组织中也能表达。 展开更多
关键词 牦牛 线粒体 SLC25A31基因 ant4蛋白 生物信息学分析
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NT4p53(N15)Ant融合基因重组腺病毒的构建及其体外抑瘤作用 被引量：1
3
作者 宋丽萍 李跃萍 +3 位作者 邱曙东 黄辰 王爱英 李围围 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第2期144-148,共5页
背景与目的:有研究发现P53氨基端15肽与穿膜肽(antennapedia,Ant)的融合肽能迅速穿透细胞膜,直接、快速引起乳腺癌、胰腺癌细胞坏死而非凋亡,但对正常细胞几乎没有毒性。本研究构建缺陷型腺病毒载体表达NT4p53(N15)Ant融合基因,研究其... 背景与目的:有研究发现P53氨基端15肽与穿膜肽(antennapedia,Ant)的融合肽能迅速穿透细胞膜,直接、快速引起乳腺癌、胰腺癌细胞坏死而非凋亡,但对正常细胞几乎没有毒性。本研究构建缺陷型腺病毒载体表达NT4p53(N15)Ant融合基因,研究其体外抑瘤作用。方法:应用Ad-EasyTM系统,在大肠杆菌同源重组,构建NT4p53(N15)Ant腺病毒表达载体,在HEK-293细胞内成功包装并鉴定后,感染肝癌细胞株HepG2,用倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态学变化、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验及培养基中的乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)测定研究其体外抑瘤作用。结果:Ad-NT4p53(N15)Ant对肝癌细胞株HepG2有明显抑制作用,48、72、96h细胞存活率分别为36.67%、20.47%、17.82%,与空病毒处理组比较差异有统计学意义(P<0.05);电镜观察到感染的HepG2细胞胞膜、核膜破坏,胞浆内出现囊泡状物质,染色质聚集。Ad-NT4p53(N15)Ant处理HepG2细胞24、48、72、96h时培养液中LDH释放分别为94、236、267、313U/L,较空病毒处理组明显增加,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建的腺病毒载体Ad-NT4p53(N15)Ant感染HepG2细胞后能抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 NT4p53(N15)Ant 腺病毒载体 肿瘤 基因治疗
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NT4p53(N15)Ant重组腺病毒对肝癌细胞腹腔种植瘤的治疗作用 被引量：2
4
作者 吴学元 白斌 +1 位作者 张党锋 马巍 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期73-76,107,共5页
目的研究NT4p53(N15)Ant融合基因重组腺病毒预先感染ICR小鼠腹腔后,对肝癌细胞株H22腹腔种植瘤的治疗作用。方法将16只ICR小鼠随机平均分成2组,分别于腹腔内预先感染Ad-NT4p53(N15)Ant(治疗组)及等量空病毒(对照组)。将H22细胞悬液接种... 目的研究NT4p53(N15)Ant融合基因重组腺病毒预先感染ICR小鼠腹腔后,对肝癌细胞株H22腹腔种植瘤的治疗作用。方法将16只ICR小鼠随机平均分成2组,分别于腹腔内预先感染Ad-NT4p53(N15)Ant(治疗组)及等量空病毒(对照组)。将H22细胞悬液接种于小鼠腹腔,建立小鼠腹腔泛发性种植瘤模型。根据小鼠生长情况、生存期以及腹水瘤细胞形态、细胞凋亡率和小鼠腹腔内瘤体重量等结果,评价Ad-NT4p53(N15)Ant对H22细胞种植瘤及癌性腹水的治疗效果。结果成功构建了小鼠腹腔泛发性种植瘤动物模型。与对照组相比,Ad-NT4p53(N15)Ant组小鼠生存期延长、腹水的产生时间延迟,腹水中多核巨细胞减少,细胞凋亡及坏死的比率升高,腹腔内瘤体的质量减少。结论 Ad-NT4p53(15)Ant可有效抑制H22肝癌细胞腹腔移植瘤生长,延迟腹水形成,诱导体内腹水瘤细胞凋亡及坏死,延长小鼠生存期。 展开更多
关键词 NT4p53(N15)Ant 重组腺相关病毒 肝癌 凋亡 癌转移 腹水
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重组腺相关病毒-NT4p53(C22)Ant对肝癌荷瘤小鼠的治疗作用 被引量：1
5
作者 周琦 纪宗正 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1355-1357,1367,共4页
目的研究NT4p53(C22)Ant重组腺相关病毒(rAAV)对肝癌荷瘤小鼠的治疗作用。方法构建NT4p53(C22)Ant,将其亚克隆于重组腺相关病毒载体中,经293细胞包装、扩增构成具有感染性的rAAV-NT4p53(C22)Ant,将小鼠源的H22肿瘤细胞接种于ICR小鼠皮下... 目的研究NT4p53(C22)Ant重组腺相关病毒(rAAV)对肝癌荷瘤小鼠的治疗作用。方法构建NT4p53(C22)Ant,将其亚克隆于重组腺相关病毒载体中,经293细胞包装、扩增构成具有感染性的rAAV-NT4p53(C22)Ant,将小鼠源的H22肿瘤细胞接种于ICR小鼠皮下,成瘤后根据瘤体质量、抑制率、动物生存时间及病理组织学结果,评价rAAV-NT4p53(C22)Ant治疗肝癌细胞(H22)的移植瘤作用。结果一次性肿瘤局部注射NT4p53(C22)Ant重组腺相关病毒100μl/次(2×1011pfu/ml)接种于ICR荷瘤小鼠皮下的H22肝癌细胞,12只小鼠7只瘤块消失,1只死亡,瘤体的质量明显减小,生存时间大于70d;而对照组中,7只小鼠均死亡,死亡率100%,生存时间约为30d,较治疗组明显缩短。治疗组肿瘤抑制率大于90%,较未治疗和注射空病毒对照组有显著性差异,组织学观察rAAV-NT4p53(C22)Ant治疗组较对照组肿瘤细胞明显减少。结论NT4p53(C22)Ant重组腺相关病毒可以有效地杀伤小鼠体内的H22肝癌细胞,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,生存期延长。 展开更多
关键词 NT4p53(C22)Ant 重组腺相关病毒 肝癌 荷瘤小鼠
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NT4p53(C22)Ant重组腺伴病毒对人Miapaca-Ⅱ胰腺癌细胞的杀伤作用
6
作者 周琦 纪宗正 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2006年第22期2054-2056,共3页
目的:研究NT4p53(C22)Ant重组腺伴病毒对人M iapaca-Ⅱ胰腺癌细胞杀伤作用.方法:构建NT4p53(C22)Ant,将其亚克隆于腺伴病毒载体中,经293细胞包装、扩增构成具有感染性的重组腺伴病毒AAV-NT4p53(C22)Ant,转染人胰腺癌M iapaca-Ⅱ细胞,经... 目的:研究NT4p53(C22)Ant重组腺伴病毒对人M iapaca-Ⅱ胰腺癌细胞杀伤作用.方法:构建NT4p53(C22)Ant,将其亚克隆于腺伴病毒载体中,经293细胞包装、扩增构成具有感染性的重组腺伴病毒AAV-NT4p53(C22)Ant,转染人胰腺癌M iapaca-Ⅱ细胞,经光镜下观察、MTT比色试验、PI染色实验及乳酸脱氢酶释放检测(LDH),观察AAV-NT4p53(C22)Ant对细胞的杀伤作用.结果:光镜下可见随AAV-NT4p53(C22)Ant感染Miapaca-Ⅱ细胞时间延长,肿瘤细胞数目明显减少;MTT实验检测发现细胞存活率明显降低(P<0.05);流式细胞检测凋亡细胞数目较对照组及空病毒组增加(P<0.05);LDH检测培养基中LDH只有轻度增加(P>0.05).结论:重组腺伴病毒NT4p53(C22)Ant对胰腺癌细胞有杀伤作用,并且是通过引起细胞凋亡而实现的. 展开更多
关键词 NT4p53(C22)Ant 重组腺伴病毒 胰腺肿瘤 细胞系
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