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ALKBH5介导NLRP3的m^(6)A修饰促进心肌梗死小鼠心肌细胞焦亡 被引量：1
1
作者 翟苗苗 尹俭俭 +5 位作者 王智墨 周月姣 于庆文 王沛 张莉蓉 韩圣娜 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期434-444,共11页
目的N 6-甲基腺苷修饰(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠心肌细胞焦亡的影响。方法分别利用腺相关病毒敲低ALKBH5建立左冠状动脉前降支结扎手术的MI模型和采用小干扰RNA敲低目的... 目的N 6-甲基腺苷修饰(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠心肌细胞焦亡的影响。方法分别利用腺相关病毒敲低ALKBH5建立左冠状动脉前降支结扎手术的MI模型和采用小干扰RNA敲低目的基因的方法建立小鼠心肌细胞(HL-1)缺氧模型,观察ALKBH5对MI小鼠和缺氧HL-1细胞焦亡的影响。随后在细胞水平进行机制研究,通过RNA pull-down和RNA免疫共沉淀(RIP)实验检测ALKBH5和阅读蛋白IGF2BP2与NLRP3 mRNA的相互结合,应用MeRIP-qPCR方法测定ALKBH5对NLRP3的mRNA的m^(6)A水平的影响。RNA稳定性实验检测ALKBH5和IGF2BP2对NLRP3 mRNA稳定性的影响。结果体内和体外敲低ALKBH5均可抑制NLRP3炎性小体活化缓解MI小鼠和缺氧HL-1细胞的焦亡。机制上,结果显示在HL-1细胞中NLRP3 mRNA能够和ALKBH5蛋白相互结合;敲低ALKBH5可以增加NLRP3的m^(6)A水平和降低NLRP3 mRNA稳定性;随后证实NLRP3 mRNA和IGF2BP2的蛋白相互结合;敲低IGF2BP2增加NLRP3的mRNA稳定性。Rescue实验表明敲低IGF2BP2可以逆转敲低ALKBH5引起的NLRP3 mRNA表达的减少。结论ALKBH5通过m^(6)A修饰的方式介导NLRP3炎性小体活化参与MI小鼠的心肌细胞焦亡。 展开更多
关键词 心肌梗死 NLRP3炎性小体 alkbh5 m^(6)A修饰 IGF2BP2 细胞焦亡
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖与迁移能力的影响
2
作者 刘芷言 林丽婵 +7 位作者 刘震宇 沙纪名 刘鹏 毛遂 张云森 李锐 张野 陶辉 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第2期235-241,共7页
目的探究N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与迁移能力的影响。方法解剖消化新生乳鼠的心脏提取原代CFs,在光学显微镜及共聚焦显微镜下鉴定细胞类型。... 目的探究N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与迁移能力的影响。方法解剖消化新生乳鼠的心脏提取原代CFs,在光学显微镜及共聚焦显微镜下鉴定细胞类型。使用高糖培养基(33 mmol·L-1葡萄糖)诱导细胞活化,使用ALKBH5表达载体转染细胞构建ALKBH5过表达模型。通过免疫荧光染色、Western blot和RT-qPCR检测CFs中去甲基化酶ALKBH5表达变化;Dot blot方法检测m^(6)A水平的变化;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及纤维化关键指标Ⅰ型胶原的表达变化;EdU染色法检测CFs增殖能力;Transwell迁移实验检测CFs的迁移能力。结果在高糖诱导下,CFs中ALKBH5的表达量明显下降,m^(6)A水平明显上升;同时增殖指标PCNA和纤维化指标Ⅰ型胶原的表达量明显升高,细胞增殖和迁移能力明显提升。过表达ALKBH5逆转了上述变化。结论ALKBH5过表达可抑制PCNA和Ⅰ型胶原的表达,并减弱CFs的增殖和迁移能力,其作用可能与m^(6)A甲基化修饰有关。 展开更多
关键词 RNA甲基化 alkbh5 心肌成纤维细胞 增殖 迁移 心肌纤维化
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ALKBH5在肿瘤和肿瘤免疫中的调控作用及相关药物研究进展
3
作者 高雨雨 熊心怡 +1 位作者 陶怀 何迎春 《生命科学研究》 2025年第2期104-114,共11页
RNA去甲基化酶alkB同源物5(alkB homolog 5,ALKBH5)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)去甲基化通过影响RNA代谢的多个途径调节基因的表达。研究发现,ALKBH5在许多恶性肿瘤的进程中以m6A依赖性方式发挥关键调控作用。因此,探究A... RNA去甲基化酶alkB同源物5(alkB homolog 5,ALKBH5)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)去甲基化通过影响RNA代谢的多个途径调节基因的表达。研究发现,ALKBH5在许多恶性肿瘤的进程中以m6A依赖性方式发挥关键调控作用。因此,探究ALKBH5在肿瘤中发挥的生物学功能和机制,对攻克人类恶性肿瘤和研发相关靶向药物具有重要意义。本综述重点阐述了ALKBH5在肿瘤中发挥各种生物学功能的分子机制和其在肿瘤相关免疫中的作用,并且讨论了靶向ALKBH5的肿瘤治疗策略及临床意义,以期为ALKBH5介导肿瘤发生发展分子机制的深入研究和相关防治药物的研发提供新的思路和见解。 展开更多
关键词 alkB同源物5(alkbh5) N6-甲基腺苷(m6A) 肿瘤 肿瘤免疫 治疗策略 药物研发
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TGF-β1/Smad通路下调ALKBH5调控巨噬细胞极化改善大鼠肺纤维化的作用机制
4
作者 岱德羽 党慧 +2 位作者 王雪 王春雨 侯冬华 《河北医学》 2025年第10期1625-1632,共8页
目的:探讨下调AlkB同源物5(ALKBH5)在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)大鼠中的作用,并基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路探讨其潜在的作用机制。方法:采用气管内滴注博来霉素制备PF大鼠模型。将造模成功的SD大鼠分为模型组(PF... 目的:探讨下调AlkB同源物5(ALKBH5)在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)大鼠中的作用,并基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路探讨其潜在的作用机制。方法:采用气管内滴注博来霉素制备PF大鼠模型。将造模成功的SD大鼠分为模型组(PF+不给予任何药物处理)、si-NC组(PF+转染si-NC,尾静脉注射)、si-ALKBH5组(PF+转染si-ALKBH5,尾静脉注射)和通路激活剂组(PF+转染si-ALKBH5+30mg/kg的TGF-β1通路激活剂SRI-011381,尾静脉注射)。另选12只正常大鼠作为对照组。采用RT-qPCR方法检测肺组织中ALKBH5 mRNA、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA、白细胞分化抗原86(CD86)mRNA、A精氨酸酶-1(Arg-1)mRNA、甘露糖受体(CD206)mRNA水平;肺功能检测仪检测各组大鼠组织衰减(G)、呼吸系统阻力(Rrs)、呼吸系统顺应性(Crs)和组织弹性(H);采用HE、Masson染色进行肺脏病理组织学分析;采用Western Blot法检测ALKBH5、I型胶原蛋白(Col I)、纤连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1/Smad通路相关蛋白表达水平。结果:相较于对照组,模型组大鼠肺结构被破坏,肺泡间隔增厚,肺泡上皮细胞坏死,G、Crs、Arg-1 mRNA、CD206 mRNA水平显著降低(P<0.05),ALKBH5 mRNA及蛋白、Rrs、H、胶原纤维沉积、Col I、FN、α-SMA、iNOS mRNA、CD86 mRNA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3水平显著升高(P<0.05);相较于模型组和si-NC组,si-ALKBH5组和通路激活剂组肺泡隔轻度增厚,肺组织结构较为完整,G、Crs、Arg-1 mRNA、CD206 mRNA水平显著增加(P<0.05),ALKBH5 mRNA及蛋白、Rrs、H、胶原纤维沉积、Col I、FN、α-SMA、iNOS mRNA、CD86 mRNA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3水平显著降低(P<0.05);相较于通路激活剂组,si-ALKBH5组大鼠肺组织损伤程度有所改善,G、Crs、Arg-1 mRNA、CD206 mRNA水平显著增加(P<0.05),ALKBH5 mRNA及蛋白、Rrs、H、胶原纤维沉积、Col I、FN、α-SMA、iNOS mRNA、CD86 mRNA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3水平显著降低(P<0.05)。结论:下调ALKBH5能够缓解肺组织病理损伤和胶原沉积,减轻肺功能损伤,抑制大鼠PF,抑制巨噬细胞向M2型极化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。 展开更多
关键词 alkbh5 肺纤维化 巨噬细胞极化 TGF-β1/Smad通路
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5在缺血性心血管疾病中的作用
5
作者 高源 莫晗 +3 位作者 仝国鼎 王智墨 刘羿君 韩圣娜 《生理科学进展》 北大核心 2025年第3期296-302,共7页
N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是一种转录后RNA修饰,是最丰富的RNA化学修饰类型之一。m^(6)A作为分子开关,在心血管疾病、中枢神经系统和癌症等一系列疾病的发生发展过程中发挥作用。m^(6)A甲基化修饰是动态可逆的,包... N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是一种转录后RNA修饰,是最丰富的RNA化学修饰类型之一。m^(6)A作为分子开关,在心血管疾病、中枢神经系统和癌症等一系列疾病的发生发展过程中发挥作用。m^(6)A甲基化修饰是动态可逆的,包括甲基化转移酶(writers)、去甲基化酶(erasers)和阅读蛋白(readers)等共同参与。RNA去甲基化酶alkB同源物5(alkB homolog 5,ALKBH5)可以消除靶RNA上的甲基化修饰。越来越多的证据表明ALKBH5有可能作为特定疾病的治疗靶点。本文论述了ALKBH5的结构特点、生物学功能以及其在缺血性心血管疾病中作用的研究进展,并关注靶向ALKBH5的小分子抑制剂在心血管疾病中的应用。 展开更多
关键词 N^(6)-甲基腺苷 alkbh5 心血管疾病 小分子抑制剂
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ALKBH5在甲状腺癌患者中的表达及其临床意义
6
作者 武安琪 温思妮 +6 位作者 韩菲 王鑫 王淑君 朱小年 张小英 谭盛葵 张慧霞 《黑龙江医学》 2025年第17期2068-2071,共4页
目的:明确N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化酶AlkB同源物5(ALKBH5)在甲状腺癌组织及血液中的表达及其与临床病理特征和预后的关系,为甲状腺癌的防治提供科学依据。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测人群外周血ALKBH5 m... 目的:明确N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化酶AlkB同源物5(ALKBH5)在甲状腺癌组织及血液中的表达及其与临床病理特征和预后的关系,为甲状腺癌的防治提供科学依据。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测人群外周血ALKBH5 mRNA的表达;采用免疫组化实验检测58对甲状腺癌组织与癌旁组织中ALKBH5蛋白的表达情况;采用生物信息学方法,利用Kaplan Meier plotter在线数据库分析ALKBH5表达对新发甲状腺癌患者预后的影响。结果:qRT-PCR实验结果显示,甲状腺癌患者血液中ALKBH5 mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义(t=2.719,P<0.05)。免疫组化结果显示,ALKBH5高表达在甲状腺癌组织中占96.55%,高于在癌旁组织的12.07%,差异有统计学意义(χ^(2)=52.841,P<0.05);logistic回归分析显示,在甲状腺癌患者中,ALKBH5高表达与年龄、TNM分期、临床分期有关(χ^(2)=14.550、4.852、4.580,P<0.05);ALKBH5高表达的新发甲状腺癌患者的生存率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与癌旁组织相比,ALKBH5在甲状腺癌组织与血液中表达明显升高,且与患者年龄、TNM分期、临床分期和生存时间有关。ALKBH5高表达的新发甲状腺癌患者生存率较差。 展开更多
关键词 N6-甲基腺苷 AlkB同源物5 甲状腺癌 机制研究
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ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌细胞上皮间质转化和血管生成并增强其侵袭和转移 被引量：8
7
作者 徐小艳 王建君 +3 位作者 闫琛 李川 刘微 杨金花 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期355-361,共7页
目的探讨乳腺浸润性导管癌烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)与上皮间质转化(EMT)和血管生成相关蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测原发性乳腺浸润性导管癌组织及对应癌旁组织中ALKBH5、上皮钙黏蛋... 目的探讨乳腺浸润性导管癌烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)与上皮间质转化(EMT)和血管生成相关蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测原发性乳腺浸润性导管癌组织及对应癌旁组织中ALKBH5、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达,免疫组织化学染色法检测ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白表达,用χ^(2)检验分析其与临床病理特征的关系,并采用Spearman相关分析法分析蛋白表达的相关性。采用Kaplan-Meier法评估ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的异常表达与乳腺浸润性导管癌患者无病生存期之间的关系,Cox回归模型分析ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的表达和临床病理参数与乳腺浸润性导管癌患者预后的关系。结果与癌旁组织相比,ALKBH5、MMP9和VEGF的mRNA和蛋白在乳腺浸润性导管癌组织高表达,E-cadherin表达降低。ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白在低分化乳腺癌组织、淋巴结有转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的表达率较高;肿瘤直径越大,ALKBH5和VEGF表达率越高。E-cadherin在高分化乳腺癌组织、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期表达率较高。Spearman相关分析结果显示,乳腺浸润性导管癌中ALKBH5与E-cadherin表达呈负相关,ALKBH5与MMP9和VEGF表达均呈正相关。ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白高表达者的无病生存率均分别低于低表达者,E-cadherin蛋白高表达者无病生存率高于低表达者。Cox回归模型分析显示,ALKBH5和淋巴结转移是乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素。结论ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌侵袭和转移可能与增强乳腺导管癌细胞的EMT和血管生成有关。 展开更多
关键词 乳腺浸润性导管癌 烷基化修复蛋白B同源物5(alkbh5) 上皮间质转化(EMT) 临床病理特征
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ALKBH5对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响 被引量：6
8
作者 陆瑛 王大为 +4 位作者 何俊波 周朦 曾建 龚爱华 徐岷 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第7期865-872,共8页
该研究探讨了6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^6A)去甲基酶ALKBH5(alk B homolog5)对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响。通过数据库分析ALKBH5在胃癌组织中的表达水平;Real-time PCR和Western blot检测ALKBH5在胃癌细胞中表达水平;用sh... 该研究探讨了6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^6A)去甲基酶ALKBH5(alk B homolog5)对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响。通过数据库分析ALKBH5在胃癌组织中的表达水平;Real-time PCR和Western blot检测ALKBH5在胃癌细胞中表达水平;用sh-EGFP和sh-ALKBH5质粒转染人胃腺癌AGS细胞,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,细胞划痕实验进一步检测细胞的迁移能力;用Western blot检测上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白质的变化。结果显示,弥漫性胃腺癌中ALKBH5的m RNA水平明显低于正常胃组织和其他类型的胃癌组织,且其基因拷贝数也明显低于正常胃组织。在胃癌细胞系中,AGS细胞ALKBH5蛋白质和m RNA水平最高,sh-ALKBH5干扰能明显促进AGS细胞迁移和侵袭能力,且下调其上皮指标水平,而上调间质指标水平。上述结果提示,ALKBH5在胃癌组织中可能是一个抑癌基因,与胃癌细胞的迁移和侵袭能力负相关。 展开更多
关键词 alkbh5 m6A去甲基酶 上皮–间质转化 胃癌 细胞迁移 细胞侵袭
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ALKBH5去除NFE2L1的m6A甲基化修饰促进黑色素瘤放化疗抵抗的机制研究
9
作者 李银玲 表贞淑 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2022年第4期236-240,I0006,共6页
目的探讨去甲基化酶AlkB同源蛋白5(AlkB homologue 5,ALKBH5)介导的m6A甲基化修饰在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)放化疗抵抗中的作用。方法自2019年5月至2021年1月,辽宁省人民医院皮肤科采用实时荧光聚合酶链反... 目的探讨去甲基化酶AlkB同源蛋白5(AlkB homologue 5,ALKBH5)介导的m6A甲基化修饰在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)放化疗抵抗中的作用。方法自2019年5月至2021年1月,辽宁省人民医院皮肤科采用实时荧光聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CMM细胞中ALKBH5和NFE2L1(nuclear factor,erythroid 2 like 1)的表达。TCGA分析ALKBH5和NFE2L1的表达及相关性。在CMM细胞中敲减ALKBH5,免疫沉淀检测NFE2L1的m6A甲基化表达变化。MTT检测ALKBH5和NFE2L1在CMM细胞放化疗抵抗中的作用。结果与正常人表皮黑色素细胞相比,CMM细胞中ALKBH5和NFE2L1的表达水平均明显升高(P<0.05);ALKBH5调控NFE2L1的m RNA的m6A甲基化水平。敲减ALKBH5的CMM细胞,在经过照射和顺铂处理后,细胞成活比例下降,放化疗抵抗减轻(P<0.05);而过表达NFE2L1,治疗后的细胞成活比例增加,诱导了CMM的放化疗抵抗(P<0.05)。结论ALKBH5可通过去除NFE2L1的m6A甲基化修饰,上调NFE2L1的表达,促进CMM的放化疗抵抗。ALKBH5对CMM恶性表型的影响是通过NFE2L1实现的。 展开更多
关键词 皮肤黑色素瘤 alkbh5 NFE2L1 m6A甲基化 放化疗抵抗
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速效救心丸经ALKBH5/m 6A调控自噬减轻缺氧/复氧心肌细胞损伤 被引量：4
10
作者 王可妍 高俊杰 +5 位作者 林文勇 王丹 张春伶 牛振超 李益萍 王肖龙 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期918-922,共5页
目的探讨速效救心丸对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及可能机制。方法将H9c2细胞随机分为5组,分别为常氧组、缺氧/复氧组、速效+缺氧/复氧组、川芎嗪+缺氧/复氧组、冰片+缺氧/复氧组。通过RT-qPCR和Western blot检测RNA去甲基化酶ALKBH5 ... 目的探讨速效救心丸对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及可能机制。方法将H9c2细胞随机分为5组,分别为常氧组、缺氧/复氧组、速效+缺氧/复氧组、川芎嗪+缺氧/复氧组、冰片+缺氧/复氧组。通过RT-qPCR和Western blot检测RNA去甲基化酶ALKBH5 mRNA和蛋白的表达。为进一步研究,将H9c2细胞分为空白转染+常氧组、空白转染+缺氧/复氧组、空白转染+速效+缺氧/复氧组、空白转染+川芎嗪+缺氧/复氧组、空白转染+冰片+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+速效+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+川芎嗪+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+冰片+缺氧/复氧组。通过化学发光法检测细胞活力,比色法检测N^(6)-腺嘌呤(m^(6)A)甲基化水平,RT-qPCR检测自噬相关基因的表达。结果与模型组比较,速效救心丸及其有效成分川芎嗪、冰片预处理与ALKBH5过表达可以增加缺氧/复氧后心肌细胞去甲基化酶ALKBH5 mRNA和蛋白的表达,降低m^(6)A甲基化水平,抑制GSK3β、Beclin-1、Atg5的表达,增加mTOR的表达(P<0.01)。结论速效救心丸可以有效减轻缺氧/复氧心肌损伤,其机制可能是通过ALKBH5/m^(6)A途径抑制过度自噬。 展开更多
关键词 速效救心丸 alkbh5 m^(6)A 自噬 心肌细胞 缺氧/复氧
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ALKBH5调控大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的作用研究 被引量：2
11
作者 周洋 涂彬 +7 位作者 宋凯 王娟 孙赫 孙峰 沙纪名 李锐 张野 陶辉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1870-1874,共5页
目的探讨6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法取1~3 d新生SD乳鼠心脏,剪碎消化后进行CFs原代培养,并在显微镜下观察细胞形态。细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型,模... 目的探讨6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法取1~3 d新生SD乳鼠心脏,剪碎消化后进行CFs原代培养,并在显微镜下观察细胞形态。细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型,模型构建成功后分别向各组细胞转染ALKBH5(慢病毒过表达ALKBH5)及慢病毒空载体24~48 h。运用RT-qPCR方法检测ALKBH5、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达;Western blot检测ALKBH5、α-SMA、CollagenⅠ及PCNA蛋白的表达;CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖活性变化。结果在CFs活化增殖模型中,与对照组CFs相比,模型组CFs中ALKBH5蛋白和mRNA的表达降低,而与活化增殖相关蛋白PCNA、α-SMA及CollagenⅠ的表达增加。此外,在慢病毒转染ALKBH5过表达组的CFs中,α-SMA、CollagenⅠ和PCNA蛋白和mRNA同ALKBH5病毒空载体组相比表达下降。CCK-8与EdU染色实验表明,与空载体组相比,ALKBH5过表达组CFs增殖活性受到抑制。结论过表达ALKBH5明显抑制CFs的增殖活性,提示ALKBH5可能是参与调控CFs活化增殖的关键因子。 展开更多
关键词 alkbh5 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 活化 增殖
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5与弱精症的相关性研究 被引量：4
12
作者 夏维 胡玲 +2 位作者 刘东 刘琴 胡红兵 《国际检验医学杂志》 CAS 2021年第6期700-703,共4页
目的探究N^(6)-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5与弱精症的相关性。方法收集精液标本30份,包括弱精症患者与健康者精液标本各15份,密度梯度离心纯化精子,使用液相色谱与质谱联用(LC-MS/MS)检测精子RNA的m^(6)A水平,使用实时荧光定量... 目的探究N^(6)-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5与弱精症的相关性。方法收集精液标本30份,包括弱精症患者与健康者精液标本各15份,密度梯度离心纯化精子,使用液相色谱与质谱联用(LC-MS/MS)检测精子RNA的m^(6)A水平,使用实时荧光定量PCR法检测ALKBH5相对表达水平。结果弱精症患者m^(6)A水平明显高于健康者,ALKBH5相对表达水平低于健康者,差异均有统计学意义(P<0.05)。精子活动度参数相关性分析结果显示,ALKBH5相对表达水平与前向运动精子数和非前向运动精子数呈正相关(r=0.512、0.377,P<0.05),与不动精子数呈负相关(r=-0.497,P<0.05);m^(6)A与前向运动精子数和非前向运动精子数呈负相关(r=-0.442、-0.425,P<0.05),与不动精子数呈正相关(r=0.528,P<0.05)。结论在弱精症患者中,m^(6)A及其去甲基化酶ALKBH5与精子活动度具有相关性。 展开更多
关键词 alkbh5 N^(6)-甲基腺嘌呤 弱精症 精子活动度
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5抑制胃癌细胞运动侵袭和Wnt信号通路活性的机制 被引量：2
13
作者 沈李婷 李金洋 +6 位作者 李先峰 车林茸 刘科伟 刘琴 王斌 覃中毅 陈东风 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期459-466,共8页
目的研究RNA去甲基化酶ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法利用人类癌症基因库(the cancer genome Atlas, TCGA)对ALKBH5差异表达的胃癌患者进行总生存期分析;应用小鼠胃原位种植和转移模型分析ALKBH5的蛋白表达与胃癌... 目的研究RNA去甲基化酶ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法利用人类癌症基因库(the cancer genome Atlas, TCGA)对ALKBH5差异表达的胃癌患者进行总生存期分析;应用小鼠胃原位种植和转移模型分析ALKBH5的蛋白表达与胃癌细胞转移的相关性;通过构建敲低/过表达细胞株,结合Transwell实验研究ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;利用m^(6)A修饰位点预测网站m^(6)AVAR(http://m^(6)Avar.renlab.org/index.html),结合蛋白免疫印迹、放线菌素D处理结合实时荧光定量PCR,检测Wnt信号通路下游基因表达和mRNA稳定性。结果 TCGA数据库提示ALKBH5的低表达提示胃癌患者更短的生存期;体内实验验证ALKBH5的低表达与胃癌细胞远处转移相关;ALKBH5的敲低可以促进胃癌细胞的侵袭和转移;Wnt下游分子MYC,CD44,c-Met的mRNA上存在m^(6)A修饰位点;ALKBH5缺失时,Wnt下游分子的蛋白表达增加及mRNA稳定性增强。结论 ALKBH5表达缺失促进胃癌细胞迁移和侵袭能力,维持Wnt信号通路的激活。 展开更多
关键词 alkbh5 RNA甲基化 WNT信号通路 胃癌侵袭
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猪m^6A去甲基化酶FTO、ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌F18感染抗性的关系分析 被引量：2
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作者 齐晓艺 杨荔 +2 位作者 吴正常 包文斌 吴圣龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第9期2960-2967,共8页
为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRN... 为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRNA表达差异,同时分别利用F18ab、F18ac大肠杆菌菌体刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),检测FTO、ALKBH5基因表达变化。结果表明,FTO、ALKBH5基因在抗性型个体十二指肠和空肠中的表达量均极显著或显著高于敏感型个体(P<0.01,P<0.05);不同F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后,FTO基因表达水平均无显著变化(P>0.05),而ALKBH5基因在F18ac刺激后表达量显著上调(P<0.05);LPS诱导4 h时,FTO和ALKBH5基因表达量均显著上调(P<0.05)。本研究在细胞和个体水平上初步验证并发现了m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌感染仔猪密切相关,为今后深入研究RNA去甲基化修饰在仔猪细菌性腹泻调控中的作用机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪 m6A甲基化 FTO基因 alkbh5基因 大肠杆菌
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ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响 被引量：2
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作者 李鹏飞 鲍思洁 +4 位作者 王从玉 王思文 孙诚浩 康丽华 管怀进 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2022年第11期847-852,862,共7页
目的探究N 6-甲基腺苷(m 6A)去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的... 目的探究N 6-甲基腺苷(m 6A)去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达。通过紫外线B(UVB)构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA(siRNA)转染构建敲降模型,运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达。运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化。免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化。运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因(ODRGs)的mRNA表达变化。结果在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势,其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著。ALKBH5敲降效率结果显示,与转染对照siNC组相比,转染靶向ALKBH5的siRNA后,ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降。CCK-8法检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低。免疫荧光染色检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加。同时,与转染对照siNC组相比,转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中,TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升,DCLRE1A mRNA的表达显著下降,MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异。结论m 6A去甲基化酶ALKBH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升,敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高,参与调控LEC内损伤DNA的修复,阻止ARC的发生。 展开更多
关键词 年龄相关性白内障 DNA损伤修复 晶状体上皮细胞 紫外线B N 6-甲基腺苷 alkbh5
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Men1通过调控FTO/ALKBH5表达和减少m6A甲基化而抑制小鼠肾纤维化 被引量：1
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作者 杨云巧 田倩婷 +8 位作者 潘婷 朱佳美 王子名 王旭艳 张拓 周宇霞 郭兵 陈腾祥 金帮明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2193-2201,共9页
目的:探讨Men1基因在小鼠肾纤维化中的调控作用及分子机制。方法:使用C57BL/6小鼠建立单侧输尿管结扎(UUO)诱导的小鼠肾纤维化模型,随机分为sham组、UUO-3 d组、UUO-7 d组和UUO-14 d组,每组15只;构建条件性Men1敲除的小鼠模型,将Men1敲... 目的:探讨Men1基因在小鼠肾纤维化中的调控作用及分子机制。方法:使用C57BL/6小鼠建立单侧输尿管结扎(UUO)诱导的小鼠肾纤维化模型,随机分为sham组、UUO-3 d组、UUO-7 d组和UUO-14 d组,每组15只;构建条件性Men1敲除的小鼠模型,将Men1敲除的C57BL/6小鼠随机分为sham-Men1-WT、sham-Men1-CKO、UUO-Men1-WT和UUO-Men1-CKO组,每组8只。采用HE染色、Masson染色和天狼星红染色检测UUO诱导肾损伤及肾纤维化分析。构建MEN1敲除的人肾小管上皮HK-2细胞。通过RT-qPCR、Western blot、免疫组化染色和免疫荧光染色检测UUO小鼠肾组织和体外转化生长因子β(TGF-β;10μg/L)处理的HK-2细胞中MEN1、纤维化标志物(α-平滑肌肌动蛋白、Ⅲ型胶原和纤连蛋白1)、m^(6)A相关蛋白[甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、METTL14、YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)、AlkB同源蛋白5(ALKBH5)和脂肪质量及肥胖相关蛋白(FTO)]的mRNA和蛋白表达;斑点印迹(dot blot)实验检测小鼠肾组织和HK-2细胞中m^(6)A甲基化水平。结果:Men1的表达随着肾纤维化加剧逐渐降低(P<0.01);Men1抑制肾组织中纤维化标志物的表达,Men1敲除增加UUO和TGF-β诱导的纤维化胶原的累积(P<0.01);Men1敲除小鼠肾组织和HK-2细胞中FTO和ALKBH5的表达下调(P<0.01),m^(6)A甲基化修饰水平升高(P<0.01);过表达FTO显著降低Men1缺失引起的m^(6)A修饰累积和肾纤维化(P<0.01)。结论:Men1基因缺失促进小鼠肾纤维化;Men1通过调控FTO/ALKBH5的表达降低m^(6)A修饰,从而抑制小鼠肾纤维化。 展开更多
关键词 MEN1基因 肾纤维化 单侧输尿管结扎 m6A RNA甲基化 FTO/alkbh5
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去甲基化酶ALKBH5高、低表达食管鳞癌细胞株的构建 被引量：1
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作者 方婷晓 翟坚学 +3 位作者 林桃燕 别亚男 肖东 蔡开灿 《山东医药》 CAS 2019年第12期37-40,共4页
目的构建高、低表达去甲基化酶ALKBH5的食管鳞癌(ESCC)细胞株。方法将生长状态良好的人源胚胎肾细胞293T于培养瓶内培养,分别记为A、B、a、b、c组,待细胞融合80%～90%后进行质粒转染,A组293T细胞转染高表达ALKBH5的质粒p LV-ALKBH5,B组2... 目的构建高、低表达去甲基化酶ALKBH5的食管鳞癌(ESCC)细胞株。方法将生长状态良好的人源胚胎肾细胞293T于培养瓶内培养,分别记为A、B、a、b、c组,待细胞融合80%～90%后进行质粒转染,A组293T细胞转染高表达ALKBH5的质粒p LV-ALKBH5,B组293T细胞转染对照质粒p LV-con,上述2个质粒中均带有GFP蛋白和Flag标签蛋白(用于后续感染细胞的筛选); a组293T细胞转染低表达ALKBH5的质粒p LKO-shALKBH5-1,b组293T细胞转染低表达ALKBH5的质粒p LKO-shALKBH5-2,c组293T细胞转染对照质粒p LKO-shSCR,上述3个质粒中均带有嘌呤霉素抗性(用于后续感染细胞的筛选)。上述各组293T细胞质粒转染72 h后,分别收集细胞上清液,离心后分装;用A、B组细胞上清液分别感染ESCC细胞株(Eca109细胞和Kyse510细胞),采用流式细胞术筛选GFP蛋白(+)的细胞待测;用a、b、c组细胞上清液分别感染ESCC细胞株(Eca109细胞和TE-13细胞),用嘌呤霉素筛选细胞待测。采用qRT-PCR法和Western blotting法分别检测感染高、低表达ALKBH5上清液的ESCC细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白。结果感染A组细胞上清液的Eca109细胞、Kyse510细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于感染B组细胞上清液的Eca109细胞、Kyse510细胞(P均<0. 05),感染a、b组细胞上清液的Eca109细胞、TE-13细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白的相对表达量均显著低于感染c组细胞上清液的Eca109细胞、TE-13细胞(P均<0. 05)。结论成功构建高、低表达ALKBH5的ESCC细胞株,为进一步探讨ALKBH5在ESCC发生发展中的作用提供了细胞模型。 展开更多
关键词 去甲基化酶 去甲基化酶alkbh5 细胞株构建 RNA甲基化修饰 N6-甲基腺苷化修饰 食管鳞状细胞癌细胞
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ALKBH5在肝癌中的表达及其对抗肿瘤免疫的影响 被引量：1
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作者 马荷花 洪雨欣 +1 位作者 宋伟 李娟 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2024年第4期508-515,共8页
目的:探讨N6-甲基腺苷(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5在人肝癌中的表达及其对抗肿瘤免疫的影响。方法:采用免疫组织化学染色(IHC)检测50例肝细胞癌(HCC)样本中ALKBH5的表达;采用χ^(2)检验分析其与临床特征之间的关系;采用Kaplan-Meier法分... 目的:探讨N6-甲基腺苷(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5在人肝癌中的表达及其对抗肿瘤免疫的影响。方法:采用免疫组织化学染色(IHC)检测50例肝细胞癌(HCC)样本中ALKBH5的表达;采用χ^(2)检验分析其与临床特征之间的关系;采用Kaplan-Meier法分析其与患者生存之间的关系;采用GSEA、GO、KEGG和Reactome通路富集分析预测ALKBH5潜在的作用机制;利用TIMER、TISIDB数据库分析ALKBH5 mRNA与免疫细胞浸润及免疫检查点分子之间的关系。结果:ALKBH5在HCC组织中低表达,并且在肿瘤直径>5 cm、有包膜浸润、ES分级Ⅲ/Ⅳ级的HCC组织中的表达更低,ALKBH5低表达组患者总生存(OS)和无进展生存(PFS)较差;基因富集分析显示ALKBH5可能参与免疫相关通路,ALKBH5与CD4^(+)T、CD8^(+)T、DC、NK等免疫细胞的浸润相关,与PD-1/L1和CTLA4的表达呈正相关。结论:ALKBH5可能通过影响抗肿瘤免疫促进肝癌恶性进展,导致患者预后不良。 展开更多
关键词 肝癌 m^(6)A甲基化 alkbh5 抗肿瘤免疫
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左归丸上调ALKBH5对小鼠BMSCs成骨分化的作用 被引量：2
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作者 刘慧雯 刘昊 +9 位作者 尚奇 陈桂锋 陈弘林 伍子贤 余富勇 颜先伟 秦威城 沈耿杨 任辉 江晓兵 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1744-1749,1762,共7页
目的基于去甲基化酶ALKBH5探讨左归丸对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用。方法体外分离培养小鼠BMSCs,将3~5代细胞随机分成:①成骨诱导0、3、7 d;②空白组(CON)、左归丸组(ZGW,1000μg/m... 目的基于去甲基化酶ALKBH5探讨左归丸对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用。方法体外分离培养小鼠BMSCs,将3~5代细胞随机分成:①成骨诱导0、3、7 d;②空白组(CON)、左归丸组(ZGW,1000μg/mL);③使用小干扰RNA(siRNA)转染小鼠BMSCs,构建ALKBH5沉默的小鼠BMSCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测沉默效率,而后将细胞分成对照组(si-NC)、左归丸组(si-NC+ZGW)、沉默组(si-ALKBH5)、沉默+左归丸组(si-ALKBH5+ZGW)。以碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色法检测各组BMSCs成骨分化水平与矿化能力;RT-qPCR检测各组成骨分化相关因子COL1A1、BMP4、Osx以及去甲基化酶ALKBH5的mRNA表达水平;通过免疫印迹法(Western-blot)检测各组BMSCs中成骨相关蛋白Runx2、BMP4、BMP2以及ALKBH5的蛋白表达水平。结果小鼠BMSCs成骨分化过程中,ALKBH5 mRNA和蛋白表达均上调。左归丸能够上调ALKBH5的蛋白表达水平,上调成骨相关蛋白Runx2、BMP2的表达,促进小鼠BMSCs成骨分化。使用siRNA沉默ALKBH5后,Runx2、Osx的mRNA表达和蛋白表达均下调,左归丸干预ALKBH5沉默细胞逆转了ALKBH5的蛋白表达下调,Runx2、BMP2相应表达上调,成骨分化能力下降被抑制。结论小鼠BMSCs成骨分化过程中ALKBH5去甲基化酶的表达水平上调。左归丸上调ALKBH5促进小鼠BMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 左归丸 骨髓间充质干细胞 成骨分化 N6-甲基腺苷 alkbh5
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m6A去甲基化酶ALKBH5对上皮性卵巢癌恶性生物学行为的影响及其作用机制研究 被引量：2
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作者 王充 杨诗敏 +3 位作者 张春晓 周冬梅 向江东 席晓薇 《现代生物医学进展》 CAS 2023年第17期3201-3210,共10页
目的:ALKBH5最近被证明是与各种癌症相关的RNA N6-甲基腺苷(m6A)去甲基转移酶之一,但其在上皮性卵巢癌中的作用缺乏研究。本研究旨在探讨ALKBH5在上皮性卵巢癌中的机制。方法:利用蛋白免疫印迹、免疫组化检测ALKBH5在卵巢癌细胞和组织... 目的:ALKBH5最近被证明是与各种癌症相关的RNA N6-甲基腺苷(m6A)去甲基转移酶之一,但其在上皮性卵巢癌中的作用缺乏研究。本研究旨在探讨ALKBH5在上皮性卵巢癌中的机制。方法:利用蛋白免疫印迹、免疫组化检测ALKBH5在卵巢癌细胞和组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征和预后关系;通过慢病毒感染构建ALKBH5稳定过表达或敲减卵巢癌细胞系,采用CCK-8、平板克隆、划痕、Transwell迁移和侵袭等实验研究ALKBH5对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;通过蛋白免疫印迹和斑点印迹实验,探究ALKBH5-HIF-1α环的相互作用情况。结果:ALKBH5在卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中高表达,ALKBH5蛋白在卵巢癌组织中的表达与CA125水平、FIGO分期和组织学类型相关,且高表达的ALKBH5水平与较差的预后相关。通过慢病毒感染构建出可靠的ALKBH5敲减/过表达稳转细胞系,CCK-8、平板克隆实验表明敲减ALKBH5降低卵巢癌细胞体外增殖速率和集落形成,划痕、Transwell迁移和侵袭实验表明敲减ALKBH5可抑制卵巢癌细胞体外迁移和侵袭能力。与对照组相比,过表达ALKBH5增强卵巢癌细胞体外增殖速率、集落形成、迁移和侵袭能力。进一步的实验发现ALKBH5和HIF-1α互相促进表达。结论:m6A去甲基化酶ALKBH5在上皮性卵巢癌中高表达且与预后相关,通过促进卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭发挥致癌基因的作用。因此,抑制ALKBH5的表达可能是靶向治疗上皮性卵巢癌的潜在策略。 展开更多
关键词 m6A alkbh5 上皮性卵巢癌
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