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DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响 被引量：2
1
作者 孙笑笑 王科 +3 位作者 冯红蕾 罗进勇 王虹 张彦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第11期1285-1289,共5页
目的探讨DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中ALK2基因mRNA的转录;分别以腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞,并设空白对照组,通过MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试... 目的探讨DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中ALK2基因mRNA的转录;分别以腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞,并设空白对照组,通过MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果 MDA-MB-231细胞中内源性表达ALK2。腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞36 h后,荧光表达量一致,约为70%。MDA-MB-231/DN-ALK2细胞中高表达DN-ALK2。与MDA-MB-231/RFP组相比,MDA-MB-231/DN-ALK2组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05);而MDA-MB-231/RFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论DN-ALK2可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭。 展开更多
关键词 DN.alk2腺病毒 乳腺肿瘤 细胞增殖 细胞运动 肿瘤浸润
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初步探讨石蜡标本制备方案的选择及ALK2在小鼠牙胚中的表达
2
作者 张雪 赵欢 +4 位作者 李媛 张琦 胡月 史册 孙宏晨 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期437-441,共5页
目的:探讨ALK2在小鼠牙胚中的表达及牙胚标本和切片的制备方案。方法:取E12.5-E18.5的小鼠胚胎,4%多聚甲醛于4℃固定24 h后,按脱水总时间23 h和8.5 h两种方案脱水,石蜡包埋切片后,HE染色观察标本制备情况,免疫组织化学染色观察ALK2在牙... 目的:探讨ALK2在小鼠牙胚中的表达及牙胚标本和切片的制备方案。方法:取E12.5-E18.5的小鼠胚胎,4%多聚甲醛于4℃固定24 h后,按脱水总时间23 h和8.5 h两种方案脱水,石蜡包埋切片后,HE染色观察标本制备情况,免疫组织化学染色观察ALK2在牙胚中的表达情况。结果:大体显微镜下观察到的胚胎形态和文献所述一致。脱水总时间8.5 h的脱水方案所制备的石蜡切片平整、完整、无裂痕,染色质量良好,牙胚形态完整,结构清楚。免疫组化染色发现,ALK2广泛地表达于蕾状期的口腔上皮和间充质,帽状期及钟状期的成釉器、牙乳头。结论:减少脱水时间,不影响切片和染色质量,可提高实验效率。ALK2广泛表达于牙胚早期,可能在牙发育中具有重要作用。 展开更多
关键词 牙胚 组织脱水 牙发育 alk2
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ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖分化的影响
3
作者 张琦 张雪 +4 位作者 赵亮 胡月 史册 孙宏晨 黄洋 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第1期6-9,共4页
目的:探讨ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖及成软骨分化的作用。方法:采用酶消化法提取小鼠髁突软骨细胞并鉴定。体外采用siRNA沉默小鼠髁突软骨细胞中Alk2基因的表达,通过MTT法检测细胞增殖。通过实时定量RT-PCR方法检测软骨细胞标志基因... 目的:探讨ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖及成软骨分化的作用。方法:采用酶消化法提取小鼠髁突软骨细胞并鉴定。体外采用siRNA沉默小鼠髁突软骨细胞中Alk2基因的表达,通过MTT法检测细胞增殖。通过实时定量RT-PCR方法检测软骨细胞标志基因的表达。结果:倒置显微镜观察体外培养的小鼠髁突软骨细胞形态。免疫组化染色显示COLⅠ强阳性,AGGRECAN弱阳性,COLⅡ弱阳性。Pellet培养后实时定量RT-PCR检测发现ColⅡ,ColⅩ和ColⅠ表达上调。证实所分离的细胞是髁突软骨细胞。MTT结果显示Alk2沉默后细胞数量增加,实时定量RT-PCR结果显示Alk2沉默后软骨细胞基因表达下调,并有显著统计学意义。结论:ALK2抑制小鼠髁突软骨细胞的增殖,促进小鼠髁突软骨细胞的成软骨分化。 展开更多
关键词 髁突软骨细胞 激活素受体样激酶2(alk2) 增殖 分化
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ALK2使内皮细胞转化为类干细胞的机制
4
作者 罗文 何月 +1 位作者 刘曼 张吉翔 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期564-568,共5页
内皮细胞向间充质细胞转分化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程是血管内皮细胞转化为类干细胞的基础,持续激活状态的ALK2在EndMT过程起到关键的促进作用,EndMT发生后内皮细胞能获得类干细胞的表现型。TGF-β2和BMP4作... 内皮细胞向间充质细胞转分化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程是血管内皮细胞转化为类干细胞的基础,持续激活状态的ALK2在EndMT过程起到关键的促进作用,EndMT发生后内皮细胞能获得类干细胞的表现型。TGF-β2和BMP4作为特异性配体激活ALK2,下调某些内皮细胞标志物并上调某些间质细胞标志物,促进EndMT过程。此外,编码ALK2的基因序列在206号氨基酸上突变形成R206H ALK2后作用类似持续激活状态ALK2,同样也能达到促进内皮细胞向间充质细胞转分化的目的。 展开更多
关键词 alk2 血管内皮细胞 类干细胞 EndMT
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下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响 被引量：2
5
作者 费嫦 王林 +3 位作者 陈湘莲 米华 陈玲群 桂芳 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第13期2194-2198,共5页
目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2,下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达,研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组,空载病毒(RFP)作为感染对照,并设空白... 目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2,下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达,研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组,空载病毒(RFP)作为感染对照,并设空白对照组,通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平,通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高;RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降;MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05)。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭,为后续实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 细胞增殖 alk2
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ALK2基因敲除小鼠的饲养繁育与基因型鉴定
6
作者 高旭广 张雪 +3 位作者 刘麒麟 郑嵘 孙宏晨 吴立鹏 《黑龙江医药科学》 2017年第6期3-5,共3页
目的:为了繁育和鉴定体内ALK2基因被敲除的小鼠,特将从美国引进的ALK2基因敲除小鼠进行饲养繁育,继续保种;以及初步探究激活素受体样激酶2(Alk2)功能缺陷对出生后小鼠在生存能力、繁殖能力、主要组织器官的生长状态等方面的影响。方法:... 目的:为了繁育和鉴定体内ALK2基因被敲除的小鼠,特将从美国引进的ALK2基因敲除小鼠进行饲养繁育,继续保种;以及初步探究激活素受体样激酶2(Alk2)功能缺陷对出生后小鼠在生存能力、繁殖能力、主要组织器官的生长状态等方面的影响。方法:首先用Cre-loxp重组酶系统培育出ALK2条件基因敲除小鼠,通过基因型鉴定筛选出实验组(基因型:Osx-Cre;Alk2fx/fx)和对照组(基因型:Osx-Cre;Alk2fx/+)。结果:成功饲养和繁殖出从美国引进的小鼠,并成功从中筛选出ALK2基因敲除小鼠。结论:采用正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对筛选出基因敲除小鼠及继续保种意义重大;初步探究小鼠ALK2基因敲除后小鼠的变化为进一步深入研究小鼠的组织器官的生长发育方面的变化及机理奠定了基础。 展开更多
关键词 alk2 条件基因敲除 PCR 繁殖
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人乳腺癌病理组织中ALK2表达水平的研究
7
作者 兰栋 刘敏 +1 位作者 赵静伊 费嫦 《临床医学研究与实践》 2020年第25期39-41,共3页
目的检测原发性乳腺癌、转移性乳腺癌和乳腺良性病变病理组织中ALK2 mRNA和蛋白水平的差异,探索ALK2在乳腺癌的发生和发展中的作用。方法收集各类型乳腺病变病例的新鲜病理组织,提取组织中的RNA和总蛋白,采用RT-PCR法检测组织中ALK2 mRN... 目的检测原发性乳腺癌、转移性乳腺癌和乳腺良性病变病理组织中ALK2 mRNA和蛋白水平的差异,探索ALK2在乳腺癌的发生和发展中的作用。方法收集各类型乳腺病变病例的新鲜病理组织,提取组织中的RNA和总蛋白,采用RT-PCR法检测组织中ALK2 mRNA的表达量,Western blot检测ALK2蛋白的表达。结果原发性乳腺癌和转移性乳腺癌病理组织中的ALK2的mRNA和蛋白表达水平明显高于乳腺良性病变病理组织的表达量,且转移性乳腺癌病理组织中的高于原发性乳腺癌病理组织。结论ALK2 mRNA和蛋白的表达在乳腺癌发生、发展和转移中起到一定的作用。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 alk2 MRNA
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ALK2对小鼠前成骨细胞增殖和分化的影响
8
作者 赵欢 史册 +6 位作者 张雪 李媛 胡月 刘苍维 闫广兴 周怡君 孙宏晨 《口腔生物医学》 2017年第3期141-144,共4页
目的:研究激活素受体样激酶2(ALK2)对小鼠前成骨细胞增殖和分化的影响。方法:体外培养小鼠颅骨前成骨细胞,利用siRNA方法沉默Alk2基因,流式细胞术检测转染效率,实时定量RT-PCR方法检测沉默效率和成骨标志基因的表达,MTT法检测细胞增殖,... 目的:研究激活素受体样激酶2(ALK2)对小鼠前成骨细胞增殖和分化的影响。方法:体外培养小鼠颅骨前成骨细胞,利用siRNA方法沉默Alk2基因,流式细胞术检测转染效率,实时定量RT-PCR方法检测沉默效率和成骨标志基因的表达,MTT法检测细胞增殖,茜素红染色检测矿化程度。结果:正常小鼠颅骨前成骨细胞形态不规则,多呈三角形和多角形,有较多突起;流式细胞术和实时定量RT-PCR显示siRNA可以使小鼠前成骨细胞内Alk2的表达降低至13%;MTT显示Alk2沉默后细胞数量增加;实时定量RT-PCR结果表明Alk2沉默后Runt相关转录因子2基因(Runx2)表达明显下降(P<0.05),碱性磷酸酶基因(Alp)表达有下降趋势;茜素红染色结果表明Alk2沉默后细胞矿化能力明显减弱。结论:ALK2可以抑制小鼠前成骨细胞的增殖,而促进其向成骨细胞的分化。 展开更多
关键词 激活素受体样激酶2 前成骨细胞 增殖 分化
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冷藏对新鲜冰冻血浆诱导内皮细胞迁移的影响及其分子机制研究 被引量：1
9
作者 张春芳 谭潭 +3 位作者 李建国 马虹英 陈主初 段朝军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第6期528-535,共8页
探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首... 探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首先采用ELISA法分析当天解冻FFP(FFP Day 0)和解冻后4℃冷藏1～5天FFP中TGF-β含量,迁移实验及Western blot分析比较FFP(Day 0)和FFP(Day 5)处理人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)后的细胞迁移率及TGF-β信号通路Smad2和Smad3磷酸化,进一步采用ALK5-siRNA和ALK5特异性抑制剂阻断细胞TGF-βⅠ型受体ALK5的活性,分析下调TGF-β/Smad2/3信号传导后的内皮细胞迁移率.结果显示:随着冷藏时间的延长,FFP中TGF-β1水平逐渐增加,其增加率为244.31 ng/(L.d)(P<0.05);与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导内皮细胞HPMECs的TGF-β信号通路Smad2/3磷酸化显著增加(P<0.05);不管是FFP(Day 0)还是FFP(Day 5)体外均能诱导内皮细胞迁移,与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导细胞迁移能力显著降低(P<0.05);阻断TGF-βⅠ型受体ALK5的活性、下调Smad 3信号传导可恢复FFP(Day5)诱导细胞迁移能力.上述结果表明,FFP能显著诱导内皮细胞迁移,4℃冷藏增加FFP中TGF-β1水平并增加内皮细胞TGF-β1信号传导,进而降低FFP诱导内皮细胞迁移.提示,FFP复苏疗效的提高可能与增加内皮细胞迁移有关,冷藏导致内皮细胞迁移降低进而降低FFP复苏疗效. 展开更多
关键词 冷藏 新鲜冰冻血浆 内皮细胞 迁移 TGF—β/ALK5/Smad2/3
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益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面TGF-β/ALK5/Smad2/3通路的影响 被引量：10
10
作者 张臻 阙华发 《新中医》 CAS 2015年第6期270-272,共3页
目的 :探讨益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面转化生长因子-β(TGF-β)/激活素受体样激酶(ALK)5/Smad蛋白2/3通路的影响。方法 :将50只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、糖尿病对照组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐... 目的 :探讨益气化瘀法中药对糖尿病大鼠肉芽增生期创面转化生长因子-β(TGF-β)/激活素受体样激酶(ALK)5/Smad蛋白2/3通路的影响。方法 :将50只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、糖尿病对照组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,运用Westernblot技术手段分别检测各组肉芽增生期创面成纤维细胞ALK5/Smad2/3的表达水平。结果:糖尿病对照组ALK5表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组ALK5表达水平明显低于糖尿病对照组(P<0.05),其与益气组、化瘀组、正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。糖尿病对照组smad2表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组smad2表达水平与各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病对照组smad3表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);益气化瘀组smad3表达水平低于化瘀组(P<0.05),明显低于糖尿病对照组、益气组(P<0.01),高于正常对照组(P<0.05)。结论:糖尿病创面难以愈合及瘢痕形成的机制可能与ALK5/Smad2/3通路有关,益气化瘀中药可能通过抑制ALK5/Smad2/3通路,加速创面愈合,减少瘢痕形成。 展开更多
关键词 糖尿病 溃疡 益气化瘀法 转化生长因子-β(TGF-β)/激活素受体样激酶(ALK)5/Smad蛋白2/3通路
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