期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到2篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
基于Cas9-Free的拟南芥ALB3基因编辑载体构建及验证 被引量：2
1
作者 马铭赛 布梁灏 +4 位作者 陈自银 黄嘉玲 欧阳乐军 李莉梅 王玉涛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期44-50,共7页
建立一种高效安全的基因定点编辑体系,为研究植物的光合作用途径以及生理代谢过程提供理想材料。针对拟南芥靶基因ALB3设计2个sgRNA,引导Cas9蛋白识别PAM位点,从而实现ALB3基因的大片段敲除;将荧光筛选标记基因mCherry组装到CRISPR/Cas... 建立一种高效安全的基因定点编辑体系,为研究植物的光合作用途径以及生理代谢过程提供理想材料。针对拟南芥靶基因ALB3设计2个sgRNA,引导Cas9蛋白识别PAM位点,从而实现ALB3基因的大片段敲除;将荧光筛选标记基因mCherry组装到CRISPR/Cas9载体中,构建一种带有荧光筛选标记的CRISPR/Cas9载体;利用农杆菌转化法转化拟南芥,对其后代进行筛选验证,在倒置荧光显微镜下挑选便可获得Cas9-Free的纯合突变种子。测序结果表明,含有可视化筛选标记基因的拟南芥ALB3基因编辑载体序列与预期一致,由此证明载体构建成功;通过倒置荧光显微镜观察,发现阳性转化拟南芥T0种子含有红色荧光标记,表观观测以及分子鉴定表明T1植株得到纯合突变后代,条带大小小于野生型,白化突变性状明显。挑选T1不含荧光的种子进行培育得到的T2植株,经分子鉴定发现已成功实现Cas9-Free且植株白化。本研究成功构建了一种带有荧光筛选标记且可实现拟南芥ALB3基因敲除的CRISPR/Cas9载体,并获得Cas9-Free的纯合突变植株,为拟南芥基因高效编辑载体的构建以及Cas9-Free基因编辑后代的获得提供了借鉴与参考。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 alb3基因 拟南芥 基因编辑 载体
在线阅读 下载PDF
一种可视化鉴定尾巨桉阳性转化子的基因编辑体系构建研究
2
作者 李莉梅 邹武 +3 位作者 梁楚炎 欧阳乐军 柯梓婷 江炳伟 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2025年第10期218-224,共7页
【目的】桉树用途广泛且遗传背景复杂,基因工程研究可加快桉树遗传改良与基因功能研究。建立一种高效鉴定阳性转化子的方法是开展桉树高效遗传转化与基因编辑的前提。ALB3基因是一种常用的研究基因编辑的目标基因,RUBY是一种可见光下裸... 【目的】桉树用途广泛且遗传背景复杂,基因工程研究可加快桉树遗传改良与基因功能研究。建立一种高效鉴定阳性转化子的方法是开展桉树高效遗传转化与基因编辑的前提。ALB3基因是一种常用的研究基因编辑的目标基因,RUBY是一种可见光下裸眼可视的新型便捷报告基因。【方法】利用聚合酶链式反应扩增尾巨桉ALB3基因gRNA片段,用BsaI酶切得到线性化的PHEE401E载体,用重组酶组装得到重组质粒pHEE401E-35S-RUBY-ALB3,构建含重组质粒的工程菌。经农杆菌浸染法转化尾巨桉,检测报告基因RUBY在尾巨桉愈伤组织中的表达及目标基因编辑情况。【结果】重组质粒pHEE401E-35S-RUBY-ALB3构建成功,并对经农杆菌侵染后具有红色表型的尾巨桉愈伤组织基因组进行PCR扩增及测序比对分析,RUBY报告基因已经成功转入进细胞并表达,尾巨桉ALB3基因在两个Targe之间成功进行了编辑。【结论】利用同源重组的方法构建的带有RUBY筛选标记基因的HEE401E-35S-RUBY-ALB3表达载体成功导入愈伤组织细胞,靶标基因编辑成功。本研究为尾巨桉基因高效编辑体系建立提供了一定的参考。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 尾巨桉 alb3基因 RUBY
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部