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拟南芥AFP4的克隆、原核表达和纯化及其与ABI5的互作
1
作者 邓子兵 邱梁堃 马建忠 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2072-2080,共9页
拟南芥ABI5相互作用蛋白AFP4(ABI five binding protein 4)是植物中的一个小分子蛋白,其表达特性与ABI5相似,受ABA诱导。以拟南芥Arabidopsis thaliana L.(Heyn)cv.Columbia为材料,通过PCR扩增了AFP4基因的完整编码序列。扩增片段插入... 拟南芥ABI5相互作用蛋白AFP4(ABI five binding protein 4)是植物中的一个小分子蛋白,其表达特性与ABI5相似,受ABA诱导。以拟南芥Arabidopsis thaliana L.(Heyn)cv.Columbia为材料,通过PCR扩增了AFP4基因的完整编码序列。扩增片段插入到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点之间和酵母双杂交载体pGBKT7的多克隆位点Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点之间。将ABI5基因的编码序列插入到酵母双杂交载体pGADT7的多克隆位点Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点之间。重组质粒测序结果表明,所克隆的AFP4和ABI5编码区序列分别与NCBI数据库收录的AFP4基因(Gen Bank登录号NM_111081.2)和ABI5基因(Gen Bank登录号NM_129185.3)完全一致。重组原核表达载体含有AFP4片段的重组融合蛋白的理论分子量为53.4 ku。将重组质粒转化至大肠埃希菌表达菌株BL21 Star(DE3)中诱导表达,并经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化、SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。将含有AFP4和ABI5的酵母双杂交重组质粒共同转化酿酒酵母AH109中进行酵母双杂交。结果表明,重组融合蛋白在大肠埃希菌E.coli BL21 Star(DE3)中表达的适宜条件为:IPTG浓度为0.4 mmol·L^(-1)、25℃下诱导表达6 h。在上述条件下,重组融合蛋白占细胞破碎后上清液总蛋白的41.6%。经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,AFP4融合蛋白在SDS-PAGE分析时呈现单一条带。该条带经过抗6xHis标签肽的抗体分析,呈阳性。该条带经酵母双杂交分析结果表明,AFP4和ABI5在酵母细胞中可以相互作用。 展开更多
关键词 拟南芥 afp4 原核表达 WESTERNBLOT 酵母双杂交 ABI5
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联合检测血清AFP、HE4、CA125和SMRP对卵巢癌患者术后化疗效果的检测价值 被引量：3
2
作者 袁敏 《河南外科学杂志》 2019年第1期77-78,共2页
目的探讨联合检测血清AFP、HE4、CA125和SMRP浓度对评估卵巢癌患者术后化疗效果的价值。方法选取2016-01—2017-12间在息县人民医院接受术后化疗的40例卵巢癌患者,分别于术前、术后1周、化疗4周期后,清晨空腹采取静脉血5 mL,检测血清AFP... 目的探讨联合检测血清AFP、HE4、CA125和SMRP浓度对评估卵巢癌患者术后化疗效果的价值。方法选取2016-01—2017-12间在息县人民医院接受术后化疗的40例卵巢癌患者,分别于术前、术后1周、化疗4周期后,清晨空腹采取静脉血5 mL,检测血清AFP、HE4、CA125和SMRP浓度。观察各时间点的检测结果。随访1～2 a,比较复发者与未复发者的上述指标浓度。结果术后1周和化疗4周期后,患者的AFP、HE4、CA125和SMRP浓度均显著低于术前;化疗4周期后的上述指标浓度均显著低于术后1周。差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1～2 a,死亡8例,复发21例,11例健康生存。复发者的上述指标浓度均高于未复发者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测血清AFP、HE4、CA125和SMRP浓度,可作为评估卵巢癌患者术后化疗的效果及预测复发风险的指标。 展开更多
关键词 卵巢癌 AFP、HE4、CA125、SMRP 联合检测
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