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南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化 被引量:11
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作者 高炳淼 潘坤 +3 位作者 田建平 唐天乐 魏娜 张俊清 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期251-255,共5页
[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合... [目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。 展开更多
关键词 益智 aflp-pcr 体系优化 引物筛选
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基于ISSR和AFLP标记开发甜菜SSR引物 被引量:14
2
作者 牛泽如 杨文柱 +3 位作者 庞磊 田自华 邵金旺 史树德 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第21期147-151,共5页
基于AFLP和ISSR标记原理,采用基因组步移技术,建立了一种新的分离甜菜基因组微卫星引物的方法。具体步骤为:(1)构建基因组DNA限制性内切酶文库,ISSR引物扩增文库中两端含微卫星序列的片段并进行克隆测序,根据测序结果设计微卫星序列间... 基于AFLP和ISSR标记原理,采用基因组步移技术,建立了一种新的分离甜菜基因组微卫星引物的方法。具体步骤为:(1)构建基因组DNA限制性内切酶文库,ISSR引物扩增文库中两端含微卫星序列的片段并进行克隆测序,根据测序结果设计微卫星序列间的引物IP1和IP2;(2)巢式PCR进行基因组步移,扩增IP2引物下游序列并测序,进而设计微卫星引物IP3,引物IP2和IP3即为SSR标记引物。对获得的SSR引物进行PCR验证,结果表明,SSR引物产率为16%,研究获得的SSR引物具有较高的多态性,对于后续的遗传多样性检测和遗传连锁图构建具有重要意义。 展开更多
关键词 甜菜 微卫星引物 ISSR-PCR ALFP-PCR
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AFLP分子标记及其在作物遗传育种中的应用与前景 被引量:12
3
作者 罗培高 任正隆 +1 位作者 张怀渝 傅体华 《四川农业大学学报》 CSCD 2001年第4期406-410,共5页
AFLP是一种基于PCR技术的新的分子标记 ,也是一种可靠而又理想的遗传标记方法。本文简述AFLP的发展、原理、方法与特点 。
关键词 AFLP PCR 遗传 育种 分子标记 作物
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茶树冷诱导基因的AFLP筛选及其表达分析 被引量:11
4
作者 陈林波 李叶云 +2 位作者 房超 朱政 江昌俊 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-7,共7页
以中小叶茶树良种舒茶早和云南大叶种73-11为材料,于4℃低温处理4 d后,采用AFLP技术筛选出冷诱导下茶树差异表达基因并进行分析.结果显示,实验共获得41个差异片段(TDFs),其中舒茶早产生19条差异条带,73-11产生38条差异条带,两品种共有条... 以中小叶茶树良种舒茶早和云南大叶种73-11为材料,于4℃低温处理4 d后,采用AFLP技术筛选出冷诱导下茶树差异表达基因并进行分析.结果显示,实验共获得41个差异片段(TDFs),其中舒茶早产生19条差异条带,73-11产生38条差异条带,两品种共有条带16条.所获得的差异片段按功能可划分为4类,即信号传导蛋白、转录因子、基础代谢相关蛋白、抗逆蛋白质,此外还有一些假设蛋白质以及未知蛋白.利用qRT-PCR对Kh1、Kh3和Kh11差异片段进行验证,结果显示这3个片段均被低温诱导,表达量上升.研究表明,茶树在低温胁迫下的逆境反应非常复杂,涉及多种代谢过程中的众多基因,而且大叶种比中小叶种对低温反应更为敏感. 展开更多
关键词 茶树 冷诱导 CDNA-AFLP QRT-PCR
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利用cDNA-AFLP技术分析小麦成株抗条锈性差异基因表达特征 被引量:15
5
作者 张岗 董艳玲 +6 位作者 夏宁 张毅 王晓杰 屈志鹏 李依民 黄丽丽 康振生 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期401-409,共9页
采用cDNA-AFLP技术,对成株抗条锈小麦品种兴资9104在成株期受条锈菌生理小种CY32侵染后5d内9个时间点的基因表达谱进行了分析。共筛选64对引物,产生32320个转录本(TDF);用37对引物检测到2201个(6.81%)差异TDF,其中926个TDF诱导表达,127... 采用cDNA-AFLP技术,对成株抗条锈小麦品种兴资9104在成株期受条锈菌生理小种CY32侵染后5d内9个时间点的基因表达谱进行了分析。共筛选64对引物,产生32320个转录本(TDF);用37对引物检测到2201个(6.81%)差异TDF,其中926个TDF诱导表达,1275个下调表达。经大规模克隆、测序分析,最终获得330个差异TDF,聚类分析得到259个EST(unigenes),命名为aTaPST1至aTaPST259(GenBank登录号为FL645754~FL646011和FL646262)。经Blastx比对和功能分类分析,其中96条EST(37.07%)未找到同源性匹配,68条(26.25%)与未知功能蛋白同源性较高;其余95条ESTs主要涉及能量(11.20%)、基础代谢(4.63%)、转录调控(3.86%)、抗病与防御(3.86%)、蛋白质运输和储存(3.09%)、蛋白质合成和细胞生长(各2.32%)以及信号转导(1.54%)等。选取抗病与防御、转录调控及信号转导类等相关的6个差异基因,qRT-PCR分析结果显示其表达模式符合cDNA-AFLP表达谱。小麦成株抗条锈性分子机制涉及植物多方面生理生化反应,包括抗病与防御、转录调控、蛋白质代谢、信号转导、以及非生物胁迫等多种途径相关基因的协同控制。 展开更多
关键词 小麦 条锈菌 成株抗病性 基因表达 CDNA-AFLP QRT-PCR
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采用AFLP和ERIC-PCR技术研究规模化鸡场健康鸡群中产气荚膜梭菌的遗传多样性 被引量:8
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作者 倪学勤 郑晓丽 +2 位作者 曾东 Joshua Gong 宋振银 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期717-724,共8页
为了调查产气荚膜梭菌在健康鸡群中的流行现状,掌握我国部分地区规模化鸡场产气荚膜梭菌的遗传多样性,分析其流行特点与地区差异的关系,利用AFLP(amplified fragment length polymorphism)和ERIC-PCR(en-terobacterial repetitive inter... 为了调查产气荚膜梭菌在健康鸡群中的流行现状,掌握我国部分地区规模化鸡场产气荚膜梭菌的遗传多样性,分析其流行特点与地区差异的关系,利用AFLP(amplified fragment length polymorphism)和ERIC-PCR(en-terobacterial repetitive intergenic consensus PCR)方法对从四川省8个市10个规模化鸡场分离得到的34株A型产气荚膜梭菌进行基因型分析。结果表明,用AFLP技术将34株菌分为12个亚型,用ERIC-PCR方法分为8个亚型。分析亚型分布情况发现:不同鸡场产气荚膜梭菌的亚型差异明显;而同一鸡场的亚型较简单,以一种亚型为主,交叉有少数其他亚型;优势基因型分别为AFLP基因Ⅷ型或ERIC-PCR基因1型。该研究结果说明:四川省规模化鸡场健康鸡群中产气荚膜梭菌的遗传多样性较低,其流行特点与地区差异相关。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 健康鸡群 遗传多样性 AFLP ERIC-PCR
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PEX法提取植物组织DNA 被引量:5
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作者 雷海英 孙毅 +2 位作者 仪治本 段永红 王志军 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期178-180,共3页
介绍了一种简单而实用的DNA提取法,利用PEX试剂从高粱与转基因玉米的新鲜叶片中提取植物组织DNA。所得DNA经定量检测后,可满足AFLP分析及PCR-Southern杂交等要求。
关键词 DNA提取 PEX AFLP PCR-Southern杂交
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植物病原菌黄单胞菌的分类研究进展 被引量:8
8
作者 龙海 李一农 +1 位作者 李芳荣 徐浪 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期11-16,共6页
黄单胞菌是一类重要的植物病原细菌。由于其经济重要性,对该属细菌进行了大量的研究,方法包括DNA杂交、基于代表性序列的多聚酶链式反应技术和扩增片段长度多态性(AFLP)基因组指纹图谱技术等。本文主要介绍了黄单胞菌属的分类研究进展。
关键词 黄单胞菌 DNA杂交 重复序列多聚酶链式反应 扩增片段长度多态性 多位点序列分析
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深圳市中央空调冷却塔水军团菌AFLP分型研究 被引量:4
9
作者 袁梦 俞慕华 +1 位作者 温群文 段永翔 《中国热带医学》 CAS 2006年第9期1554-1556,共3页
目的 了解深圳市中央空调冷却塔水中军团菌的多态性,分析优势种群和菌型分布,为建立军团菌分子型别库提供资料。方法 运用The European Working Group for Legionella Infections(E.W.G.L.I)组织制定的扩增片断长度多态性分型(... 目的 了解深圳市中央空调冷却塔水中军团菌的多态性,分析优势种群和菌型分布,为建立军团菌分子型别库提供资料。方法 运用The European Working Group for Legionella Infections(E.W.G.L.I)组织制定的扩增片断长度多态性分型(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)方法,对深圳市中央空调冷却塔水中军团菌进行分子分型。结果 按照血清分型方法,将冷却塔水中军团菌分为Lp1、Lp2-14以及非嗜肺型,运用AFLP技术对50株军团菌菌株分型,结果将22株Lpl血清型分为7种AFLP型,分别记为AFLP1—7,以AFLP2型与AFLP5型为主要型别;20株Lp2-14血清型分为7种AFLP型,分别记为AFLPⅠ—AFLPⅦ,以AFLPⅠ、Ⅱ为主要型别;9株非嗜肺军团菌血清型分为5种AFLP图谱。结论 AFLP分型技术能初步分析深圳市军团菌优势种群,为对军团菌监测及致病性军团菌型别的分析提供基本资料。 展开更多
关键词 军团菌 AFLP分型 PCR 血清分型
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蜡梅AFLP-银染体系的建立与优化 被引量:4
10
作者 周明芹 杨琴军 陈龙清 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期394-398,共5页
为了建立蜡梅AFLP-银染的优化体系,采用EcoRⅠ和MseⅠ 2种限制性内切酶酶切组合,对该2种酶的用量、酶切时间、预扩增与选择扩增中的Mg^2+浓度、Taq DNA聚合酶的用量、引物的浓度以及预扩增产物的稀释倍数等因素进行了多水平的筛选,同... 为了建立蜡梅AFLP-银染的优化体系,采用EcoRⅠ和MseⅠ 2种限制性内切酶酶切组合,对该2种酶的用量、酶切时间、预扩增与选择扩增中的Mg^2+浓度、Taq DNA聚合酶的用量、引物的浓度以及预扩增产物的稀释倍数等因素进行了多水平的筛选,同时探讨了温度及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的电流强度等因素对胶图的影响。结果表明:用5 U限制性内切酶酶切4 h便能在40μL的反应体系中完全切割500 ng的总DNA,酶切连接产物稀释10倍后在含有1.5 mmol/L Mg^2+1、U Taq、预扩增引物E+A和M+C分别为40 ng的20μL反应体系中进行预扩增,将预扩增产物稀释30倍后在含有1.5 mmol/L Mg^2+、0.6 U Taq、选择扩增引物E+3为30 ng、M+3为60 ng的20μL的体系中进行选择性扩增,能够得到质量比较好的AFLP胶图。此外,在进行PAGE电泳和硝酸银染色,将电泳的温度控制在50℃左右,电流控制在45~60 mA左右能提高胶图的质量。利用这种优化的反应体系,成功地评价了40个蜡梅基因型的遗传多样性,6对选择扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是:E-AAC/M-CCC,E-ATC/M-CCC,E-AGA/M-CAG,E-AAA/M-CAC,E-ATA/M-CCA,E-ATT/M-CCA。 展开更多
关键词 AFLP 蜡梅 PCR条件 反应体系 银染
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热胁迫下丹参转录组cDNA-AFLP分析 被引量:8
11
作者 李东 吴先军 陈新 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期2083-2091,共9页
目的探索热胁迫影响丹参生长和次生代谢的分子机制。方法采用cDNA-AFLP技术对丹参热胁迫下叶片基因表达进行转录组分析。采用EcoR I和Mse I对叶片cDNA进行双酶切,256对引物组合进行选择性扩增,对差异片段进行测序、功能分析和定量RT-PC... 目的探索热胁迫影响丹参生长和次生代谢的分子机制。方法采用cDNA-AFLP技术对丹参热胁迫下叶片基因表达进行转录组分析。采用EcoR I和Mse I对叶片cDNA进行双酶切,256对引物组合进行选择性扩增,对差异片段进行测序、功能分析和定量RT-PCR。结果共分离出196个差异表达转录衍生片段(transcription derived fragments,TDFs),其中增强与诱导表达的TDFs 122条,抑制表达的74条;从NCBI中鉴定出147个同源TDFs,另有49个TDFs为新发现序列。结论热胁迫影响转录组的信号转导、转录调控、逆境响应蛋白、物质代谢等多个方面,为进一步研究丹参有效成分的代谢调控奠定了基础。 展开更多
关键词 丹参 热胁迫 CDNA-AFLP 转录组 RT-PCR
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中华稻蝗AFLP反应体系的建立与优化 被引量:5
12
作者 郑先云 宣涛 +2 位作者 龙文敏 郭亚平 马恩波 《动物分类学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期856-860,共5页
以中华稻蝗为研究材料,提取到高质量的总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验条件,确定了AFLP银染技术方法,从而建立了中华稻蝗AFLP分子标记研究体系,得到了清晰的AFLP指纹图谱,为探讨稻蝗种间遗传学关系提供了新的技术手段。
关键词 AFLP 分子标记 PCR 中华稻蝗
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番木瓜半胱氨酸蛋白酶基因CpCP的分离及表达分析 被引量:6
13
作者 申艳红 陈晓静 +3 位作者 蔡雪玲 叶一江 耿姣姣 杨菲颖 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1789-1797,共9页
采用cDNA-AFLP技术分离了一个与番木瓜果实成熟衰老相关的差异片段,经生物信息学分析证实该片段属于半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease,CP)基因。将差异片段序列在NCBI中的番木瓜基因组序列中搜索,获得了半胱氨酸蛋白酶基因DNA序列。设... 采用cDNA-AFLP技术分离了一个与番木瓜果实成熟衰老相关的差异片段,经生物信息学分析证实该片段属于半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease,CP)基因。将差异片段序列在NCBI中的番木瓜基因组序列中搜索,获得了半胱氨酸蛋白酶基因DNA序列。设计开放型阅读框上、下游引物,以木瓜果肉RNA逆转录的cDNA为模板扩增该基因全长cDNA序列,命名为CpCP(登录号:JN689334)。该基因属于C1肽酶家族中的C1A亚家族,编码471个氨基酸,含有家族特有的催化三联体:Cys166-His302-Asn322。Real-time PCR结果显示CpCP在果实中大量表达,是根、茎、叶、花中表达量的几十倍;CpCP受乙烯处理诱导,受1-MCP处理抑制,表达模式与番木瓜果实成熟衰老进程一致,说明CpCP参与了番木瓜果实成熟衰老进程。 展开更多
关键词 番木瓜 半胱氨酸蛋白酶 基因克隆 CDNA-AFLP 荧光定量PCR
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耧斗菜属AFLP体系的建立和优化 被引量:2
14
作者 朱蕊蕊 高亦珂 张启翔 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第B08期38-40,共3页
通过对AFLP反应体系的主要的四个影响因素:Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物进行四水平筛选试验,利用三种耧斗菜Aquilegia parviflora、A.viridiflora、A.vulgaris优化了耧斗菜属的AFLP反应体系,采用64对引物组合对三种耧斗菜进行了PCR扩增和... 通过对AFLP反应体系的主要的四个影响因素:Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物进行四水平筛选试验,利用三种耧斗菜Aquilegia parviflora、A.viridiflora、A.vulgaris优化了耧斗菜属的AFLP反应体系,采用64对引物组合对三种耧斗菜进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺电泳检测。其中9对引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性。初步建立了耧斗菜的AFLP反应体系,得到质量比较好的AFLP胶图。从而为AFLP分子标记技术应用于耧斗菜属的研究奠定坚实基础。 展开更多
关键词 AFLP反应体系 耧斗菜 PCR 聚丙烯酰胺凝胶电泳
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DNA分子标记技术在环境污染物检测中的应用 被引量:3
15
作者 解莉婧 刘宛 +2 位作者 李淑芹 李培军 陈静 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期842-846,共5页
DNA分子标记是DNA分子碱基序列变异的直接反映,利用分子标记物对污染物造成的生物体DNA损伤的检测和定量分析研究是可行的方法。文章主要综述了DNA加合物技术、随机扩增DNA多态性技术(RAPD)、扩增片段长度多态性技术(AFLP)、单细胞凝胶... DNA分子标记是DNA分子碱基序列变异的直接反映,利用分子标记物对污染物造成的生物体DNA损伤的检测和定量分析研究是可行的方法。文章主要综述了DNA加合物技术、随机扩增DNA多态性技术(RAPD)、扩增片段长度多态性技术(AFLP)、单细胞凝胶电泳技术(SCGE)及反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的原理及其在环境污染物检测中的应用。该方法具有快速、简便、特异性强的特点,在环境污染物早期诊断和评价方面具有重要意义,已广泛应用于遗传毒理学研究。 展开更多
关键词 分子标记物 DNA加合物 RAPD技术 AFLP技术 单细胞凝胶电泳 RT-PCR
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特异茶树品种“紫娟”叶色转变的基因表达差异分析 被引量:18
16
作者 陈林波 夏丽飞 +4 位作者 孙云南 梁名志 张正竹 李叶云 宛晓春 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期59-65,共7页
利用cDNA-AFLP技术研究了特异茶树品种"紫娟"幼嫩叶片和成熟叶片的基因表达差异。从256对引物组合中获得59个差异表达带,其中在幼嫩叶片中获得26个上调片段,成熟叶片中获得33个上调片段。通过GenBank BLASTX比对分析,所获得... 利用cDNA-AFLP技术研究了特异茶树品种"紫娟"幼嫩叶片和成熟叶片的基因表达差异。从256对引物组合中获得59个差异表达带,其中在幼嫩叶片中获得26个上调片段,成熟叶片中获得33个上调片段。通过GenBank BLASTX比对分析,所获得的片段包括转录因子、代谢相关蛋白、信号蛋白以及一些假设蛋白、未知蛋白和没有比对的基因片段。利用RT-PCR对片段ZM4、ZM7、ZM12进行表达特性分析表明,ZM4、ZM7、ZM12均在成熟叶片中上调表达。这些研究结果将为深入研究理解"紫娟"茶树叶色转变的机理,以及相关基因克隆打下基础。 展开更多
关键词 CDNA-AFLP 紫娟 差异表达基因 RT-PCR
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枣叶片DNA的提取以及AFLP反应体系的建立 被引量:19
17
作者 文亚峰 何钢 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期25-28,共4页
扩增片断长度多态性(AFLP)实验过程中,DNA提取质量和适合的PCR扩增反应体系是2个关键因素.利用CTAB法对枣树叶片DNA的提取方法进行探讨.结果表明:改良CTAB法抽提到了较高质量的枣基因组DNA,可用于AFLP实验分析;通过对酶切-连接体系和PC... 扩增片断长度多态性(AFLP)实验过程中,DNA提取质量和适合的PCR扩增反应体系是2个关键因素.利用CTAB法对枣树叶片DNA的提取方法进行探讨.结果表明:改良CTAB法抽提到了较高质量的枣基因组DNA,可用于AFLP实验分析;通过对酶切-连接体系和PCR扩增体系中的关键因素实验分析,建立了适合枣AFLP荧光反应体系,并得到清晰的DNA指纹图谱. 展开更多
关键词 经济林栽培 AFLP DNA提取 PCR反应体系
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杨树幼茎特异表达基因及PsnLAC基因的克隆 被引量:3
18
作者 吴丽丽 高福玲 +3 位作者 王雷 郑威 杨传平 姜廷波 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期5-7,23,共4页
利用cDNA-AFLP技术对小黑杨茎、叶基因的差异表达进行分析。结果表明,64对引物组合在茎和叶中共扩增出4 192条带,其中差异条带2 275条。通过对茎中特异表达基因的克隆和测序,获得了4条cDNA序列。经Blast-x比对分析表明,它们分别是类伸... 利用cDNA-AFLP技术对小黑杨茎、叶基因的差异表达进行分析。结果表明,64对引物组合在茎和叶中共扩增出4 192条带,其中差异条带2 275条。通过对茎中特异表达基因的克隆和测序,获得了4条cDNA序列。经Blast-x比对分析表明,它们分别是类伸展蛋白、漆酶、过氧化物酶和细胞壁相关水解酶。进行RT-PCR分析发现,4个基因在茎中的表达水平明显高于叶和根。其中,以漆酶的基因片段为基础进行生物信息学分析和设计引物,用RT-PCR技术克隆到了1 413 bp包含开放阅读编码框的cDNA片段,其开放阅读编码框长度为1 020bp,编码339个氨基酸残基,与来自其他植物漆酶的氨基酸序列具有较高的同源性。 展开更多
关键词 小黑杨 RT-PCR CDNA-AFLP 漆酶
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高丹草杂种和亲本叶片基因差异表达研究 被引量:3
19
作者 董婧 逯晓萍 +6 位作者 米福贵 王树彦 何丽君 韩平安 薛春雷 丛梦露 李俊伟 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期738-747,共10页
以4份高粱不育系和5种类型苏丹草为亲本,按照NCⅡ设计配制成20个杂交组合,分析各组合及亲本的表型值和中亲及超亲优势并筛选出8个优势强的组合为试材,利用cDNA-AFLP技术,分析杂种与亲本苗期叶片基因差异表达类型与主要产量性状的杂种表... 以4份高粱不育系和5种类型苏丹草为亲本,按照NCⅡ设计配制成20个杂交组合,分析各组合及亲本的表型值和中亲及超亲优势并筛选出8个优势强的组合为试材,利用cDNA-AFLP技术,分析杂种与亲本苗期叶片基因差异表达类型与主要产量性状的杂种表现及杂种优势的关系。研究表明:(1)12对引物共扩增出315条TDFs,杂种与亲本间基因表达类型有:单亲表达一致一型(P1F1型)和二型(P2F1型)、杂种特异表达类型(F1型)、单亲表达沉默一型(P1型)和二型(P2型)、双亲共沉默类型(P1P2型)和杂种亲本表达一致型(P1F1P2型)7种。(2)在差异展示类型与产量构成因素的相关分析中,有效分蘖数与P1F1型(0.726**)呈极显著正相关,单株鲜重与P1P2型(0.659*)、叶长与P2型(0.647*)呈显著正相关,成株期叶片数与F1型(-0.81**)呈极显著负相关。在与中亲优势相关分析中发现,单株鲜重与P1(0.695*)、P2(0.637*)呈显著正相关,单株鲜重与P1F1P2型(0.743**)呈极显著正相关,叶宽与P1P2型(-0.619*)呈显著负相关。在与超亲优势进行相关分析后发现,穗长与P2F1型(0.732**)呈极显著正相关,叶宽与P2F1型(-0.731**)以及P1P2型(-0.731**)呈极显著负相关。(3)差异展示类型P1F1、P2F1、P1和P2是显性效应类型,共占总检测的91.4%。差异展示类型F1和P1P2表现超显性,共占总检测的4.8%,说明各个性状的杂种表现主要受到的是(超)显性效应影响。(4)对8个与高丹草杂种优势相关的TDFs进行回收及BLAST分析均得到同源核苷酸,并且找到7个同源蛋白,这些蛋白质在控制植物生长发育方面具有重要作用。(5)将克隆测序获得差异片段的核苷酸序列,采用半定量RT-PCR进行了验证。本研究为进一步揭示高丹草杂种优势的分子机制和提高高丹草强优势组合的筛选效率以及种质资源的创建提供依据。 展开更多
关键词 高丹草 CDNA-AFLP 半定量RT-PCR 杂种优势
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运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指纹图谱 被引量:3
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作者 史胜青 张守攻 +2 位作者 李春秀 汪阳东 齐力旺 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第1期79-82,共4页
在植物基因克隆以及构建cDNA文库时,都需要合成高质量的双链cDNA,并要达到一定的数量。然而研究者经常受到试验样品量的限制。特别是比较稀少的植物材料,例如植物的根尖、茎尖或花的雌、雄蕊等,难以获得足够的RNA,以致影响cDNA的合成量... 在植物基因克隆以及构建cDNA文库时,都需要合成高质量的双链cDNA,并要达到一定的数量。然而研究者经常受到试验样品量的限制。特别是比较稀少的植物材料,例如植物的根尖、茎尖或花的雌、雄蕊等,难以获得足够的RNA,以致影响cDNA的合成量,无法开展下游的实验。以PCR为基础合成第二链cD-NA的Smart技术(LD-PCR),能够以50ng的总RNA为反转录模板合成高质量的双链cDNA。但研究者对第二链采用PCR方法是否有些基因信息丢失或丰度上发生很大的变化存有疑虑。针对以上存在的问题,通过置换合成和长距离PCR(LD-PCR)两种方法合成3个月的梭梭幼苗茎尖双链cDNA,EcoRI和MseI限制性内切酶双酶切后,用16对选择性扩增引物对两种cDNA进行cDNA-AFLP的指纹图谱分析。结果表明,置换合成和LD-PCR两种方法合成的cDNA指纹图谱中,分别有条带约495条和470条。其中,相同的条带共计433条,不同的条带分别有62条和37条,分别为各自合成方法总指纹数的12.5%和7.87%,相同的指纹信息达87%以上。这说明两种方法合成的cDNA存在着较大的差异,合成方法对cDNA合成质量的影响较大,为研究人员选用何种cDNA合成方法提供了借鉴。 展开更多
关键词 梭梭(Haloxylon Ammodendron) 置换合成法 LD-PCR法 CDNA-AFLP
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