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EZH2靶向FAK/F⁃actin/ROS信号通路影响结直肠癌进展的机制研究
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作者 刁庆飞 张昊 +4 位作者 杨春白雪 樊建春 武雪亮 韩磊 路永刚 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第8期1110-1122,共13页
目的:探讨Zeste同源物增强子2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)/丝状肌动蛋白(filamentous actin,F⁃actin)/活性氧(reactive oxygen species,ROS)通路的调节作用,分析其对结直肠癌(colorecta... 目的:探讨Zeste同源物增强子2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)/丝状肌动蛋白(filamentous actin,F⁃actin)/活性氧(reactive oxygen species,ROS)通路的调节作用,分析其对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取河北北方学院附属第一医院行CRC手术切除的患者50例,收集癌组织和癌旁正常组织标本,应用免疫组化法检测EZH2的表达水平,结合临床资料,分析EZH2的表达与临床病理参数及预后生存之间的关系;建立皮下移植瘤CRC裸鼠模型,分为阴性对照(EZH2 NC)组、EZH2过表达(EZH2 mimic)组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组,培育14 d后观察肿瘤生长情况。体外培养人CRC细胞系SW480、SW620细胞,采用脂质体转染的方法,将SW480/SW620细胞分为4组:EZH2 NC组、EZH2 mimic组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组。通过Western blot实验检测各组细胞中FAK/F⁃actin/ROS通路相关蛋白的表达情况,应用免疫荧光染色观察F⁃actin表达和分布,采用划痕、Transwell、CCK⁃8实验检测细胞迁移、侵袭及细胞活力。ChIP⁃qPCR实验检测局部FAK、NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、NADPH氧化酶4(NADPH oxidaes 4,NOX4)在EZH2上的富集情况。结果:免疫组化检测结果显示,患者CRC组织较癌旁正常组织高表达EZH2(P<0.05);EZH2的表达水平与肿瘤的淋巴结转移及远处转移事件密切相关(P均<0.05);生存分析结果显示,低表达EZH2 CRC患者的5年总生存率显著高于EZH2高表达患者(P<0.05)。皮下移植瘤CRC裸鼠模型建立成功,EZH2 mimic组肿瘤体积明显大于EZH2 NC组(P<0.05),细胞松弛素D干预后,EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组肿瘤体积分别较EZH2 NC组、EZH2 mimic组明显减小(P均<0.05),但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。EZH2 mimic组EZH2、p⁃FAK、p⁃Paxillin、NOX2、NOX4和c⁃Jun氨基末端激酶(c⁃Jun N⁃terminal kinase,JNK)蛋白表达水平明显高于EZH2 NC组(P<0.05),而RUNX家族转录因子3(RUNX family transcription factor 3,RUNX3)蛋白表达水平稍低于EZH2 NC组(P<0.05),且F⁃actin分布数量、迁移能力和细胞活力增加(P<0.05)。EZH2、p⁃FAK和p⁃Paxillin蛋白表达水平较未干预组差异无统计学意义(P>0.05),NOX2、NOX4和p⁃JNK蛋白表达水平较未干预组则明显降低(P<0.05),RUNX3蛋白表达水平较未干预组明显增加(P<0.05),而干预的两组间差异无统计学意义(P>0.05);此外,细胞松弛素D干预后F⁃actin分布数量、迁移能力和细胞活力均显著降低,而干预的两组间差异无统计学意义(P>0.05)。ChIP⁃qPCR实验结果显示,使用EZH2抗体后,FAK、NOX2、NOX4所富集的启动子含量均显著升高(P<0.05)。结论:EZH2可通过上调FAK/F⁃actin/ROS通路活性进而促进CRC细胞的增殖、侵袭和转移。 展开更多
关键词 EZH2 FAK F⁃actin ROS 结直肠癌 增殖 侵袭 迁移
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ROS-scavenging Mn_(3)O_(4)nanozymes increase cotton alkaline tolerance by increasing the stability of actin filaments and reducing Na^(+)content
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作者 Guilan Sun Lingling Chen +8 位作者 Dan Wang Shuwei Zhai Hezhen Yuan Huixin Ma Jiangjiang Gu Zhouli Xie Zhanbiao Wang Zhaohu Li Honghong Wu 《The Crop Journal》 2025年第6期1842-1853,共12页
Alkaline stress in saline soil limits cotton production that may be improved by using emerging nanobiotechnology approaches.Here,we applied poly acrylic acid coated Mn3O4 nanoparticles(PMO)on cotton leaves which showe... Alkaline stress in saline soil limits cotton production that may be improved by using emerging nanobiotechnology approaches.Here,we applied poly acrylic acid coated Mn3O4 nanoparticles(PMO)on cotton leaves which showed higher chlorophyll content(up to 100.0%)and fresh weight(46.9%)and lower electrolyte leakage rate(up to 6.8%)and cell death rate(up to 84.8%)than controls.Further investigation showed that PMO can maintain reactive oxygen species(ROS)homeostasis,increase the stability of actin filament(AF),and reduce Na^(+)content.Confocal imaging and ROS content measurement showed that PMO foliar application effectively alleviated ROS over-accumulation(up to 16.4%decrease for H_(2)O_(2)and 45.3%decrease for O_(2)^(•-))in cotton leaves.Moreover,under alkaline stress,genes for AF depolymerization such as GhADF1/8 and GhADF6 and for AF polymerization such as GhADF5 were significantly down-regulated in PMO treated cotton lines relative to those in the control,consistent with the fluorescence intensities of AFs.Furthermore,our results showed that PMO mitigated Na^(+)toxicity under alkaline stress,as indicated by the reduced Na^(+)fluorescence intensity and Na^(+)content.Furthermore,relative to those of the control,PMO treatment increased seed yield and lint yield by 65.0%and 66.3%respectively.Together,our work demonstrates that ROS scavenging PMO alleviated alkaline stress by stabilizing actin filaments and reducing Na^(+)toxicity. 展开更多
关键词 Alkaline stress COTTON Nanoparticles Reactive oxygen species actin filament
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Role of active stress and actin alignment in cell division:A hydrodynamic perspective
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作者 Kunhao Dong Menglong Feng Rui Ma 《Chinese Physics B》 2025年第8期59-71,共13页
Cell division is a fundamental biological process in which a parent cell divides into two daughter cells.The cell cortex,a thin layer primarily composed of actin filaments and myosin motors beneath the plasma membrane... Cell division is a fundamental biological process in which a parent cell divides into two daughter cells.The cell cortex,a thin layer primarily composed of actin filaments and myosin motors beneath the plasma membrane,plays a critical role in ensuring proper cell division.In this study,we apply a hydrodynamic model to describe the actin cortex as an active nematic surface,incorporating orientational order arising from actin filament alignment and anisotropic active stress produced by myosin motors.By analyzing the linearized dynamics,we investigate how shape,flow,and stress regulators evolve over time when the surface deviates slightly from a sphere.Our findings reveal that the active alignment of actin filaments,often overlooked in previous studies,is crucial for successful division.Furthermore,we demonstrate that a cortical chiral flow naturally emerges as a consequence of this active alignment.Overall,our results provide a mechanistic explanation for key phenomena observed during cell division,offering new insights into the role of active stress and filament alignment in cortical dynamics. 展开更多
关键词 cell division actin cortex nematic surface chiral flow
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Osbpl2 deficiency inhibits Rho/ROCK2/p-ERM signaling and impairs actin cytoskeletal regulation in auditory cells
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作者 Cheng Zhang Qian Yang +6 位作者 Yajie Lu Qinjun Wei Rong Zhou Guangqian Xing Xin Cao Zhibin Chen Jun Yao 《Journal of Biomedical Research》 2025年第6期574-586,I0006-I0010,共18页
A mutation in oxysterol-binding protein-like 2(OSBPL2)has been identified as the genetic cause of autosomal dominant nonsyndromic hearing loss(DFNA67,Online Mendelian Inheritance in Man No.616340).However,the pathogen... A mutation in oxysterol-binding protein-like 2(OSBPL2)has been identified as the genetic cause of autosomal dominant nonsyndromic hearing loss(DFNA67,Online Mendelian Inheritance in Man No.616340).However,the pathogenesis of the OSBPL2 mutation in DFNA remains unclear.Our previous work showed that Osbpl2 deficiency impaired cell adhesion in auditory HEI-OC1 cells.In addition,loss of hair cells(HCs)and morphological abnormalities of HC stereocilia were detected in OSBPL2-knockout pigs,suggesting that OSBPL2 plays an important role in regulating the actin cytoskeleton in auditory cells.In the present study,we found that Osbpl2 deficiency inhibited the Rho/ROCK2 signaling pathway and downregulated phosphorylated ezrin-radixinmoesin(p-ERM),resulting in abnormal F-actin morphology in HEI-OC1 cells and stereociliary defects in mouse HCs.The present study demonstrates the underlying mechanism of OSBPL2 in regulating the actin cytoskeleton in HCs,contributing to a deeper understanding of the pathogenesis of OSBPL2 mutations in DFNA. 展开更多
关键词 OSBPL2 hearing loss actin cytoskeleton Rho/ROCK signaling p-ERM
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CT-1C末端多肽对昆明小鼠心肌肌小节α-Actin、α-Actinin及UCP_2表达的影响 被引量:1
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作者 陈淑芬 张卫 +3 位作者 魏桃枝 许闽广 董战玲 张惠 《海南医学院学报》 CAS 2014年第4期448-452,457,共6页
目的:观察心脏营养素-1(CT-1)慢性作用所诱导的小鼠重构心肌中,肌小节收缩性蛋白α-Actin、细胞骨架蛋白α-Actinin及线粒体解偶联蛋白-2(UCP2)的表达情况。方法:实验组昆明小鼠腹腔注射CT-1C末端肽(carboxy-terminal polypeptide of ca... 目的:观察心脏营养素-1(CT-1)慢性作用所诱导的小鼠重构心肌中,肌小节收缩性蛋白α-Actin、细胞骨架蛋白α-Actinin及线粒体解偶联蛋白-2(UCP2)的表达情况。方法:实验组昆明小鼠腹腔注射CT-1C末端肽(carboxy-terminal polypeptide of cardiotrophin-1,CT-1-CP)1、2、3、4周(每组10只,雌雄各半)后,对照组小鼠(10只,雌雄各半)腹腔注射生理盐水4周后,摘取小鼠心脏标本,石蜡包埋,切5μm厚切片,采用SABC检测肌小节结构蛋白α-Actin、α-Actinin与UCP2在小鼠心肌中的表达情况;同时采用Western blot检测小鼠心肌组织中3种蛋白质的相对表达量。结果:免疫组化结果显示,α-Actin的阳性颗粒主要集中于细胞核的周围,α-Actinin则趋于向肌节的横纹处汇聚,而UCP2则较均匀地散布于肌细胞浆中。结合Western blot相对灰度的比较分析,在对照组,α-Actin的表达水平略高于α-Actinin和UCP2,但3者之间并无明显的差异(WB:F=0.249,P>0.05)。注射CT-1-CP后,α-Actin的表达基本呈逐渐减弱的趋势,但对照组与4个注射组之间并无明显差异(χ2=7.386,P>0.05);与之相反,α-Actinin的表达则呈逐渐增强的趋势,阳性细胞数的百分比和阳性颗粒的染色强度都逐渐增多,而且各组间呈现出明显差异(χ2=21.977,P<0.01);UCP2的表达则在1周后增强,2周后达最高值,随后出现降低,4周后降至接近对照组的水平。结论:CT-1-CP的慢性作用可导致肌小节不同结构蛋白的比例发生改变,α-Actin的表达减少,α-Actinin的表达增多;而线粒体UCP2的表达达到一定峰值后即开始降低。 展开更多
关键词 CT一1c末端多肽(CT一1CP) α一肌动蛋白(d-actin) α一辅肌动蛋白(α-actinin) 线粒体解耦联蛋白-2(UCP )
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Plastins regulate ectoplasmic specialization via its actin bundling activity on microfilaments in the rat testis 被引量:3
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作者 Nan Li Chris KC Wong C Yan Cheng 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2016年第5期716-722,共7页
Plastins are a family of actin binding proteins (ABPs) known to cross-link actin microfilaments in mammalian cells, creating actin microfilament bundles necessary to confer cell polarity and cell shape. Plastins als... Plastins are a family of actin binding proteins (ABPs) known to cross-link actin microfilaments in mammalian cells, creating actin microfilament bundles necessary to confer cell polarity and cell shape. Plastins also support cell movement in response to changes in environment, involved in cell/tissue growth and development. They also confer plasticity to cells and tissues in response to infection or other pathological conditions (e.g., inflammation). In the testis, the cell-cell anchoring junction unique to the testis that is found at the Sertoli cell-cell interface at the blood-testis barrier (BTB) and at the Sertoli-spermatid (e.g., 8-19 spermatids in the rat testis) is the basal and the apical ectoplasmic specialization (ES), respectively. The ES is an F-actin-rich anchoring junction constituted most notably by actin microfilament bundles. A recent report using RNAi that specifically knocks down plastin 3 has yielded some insightful information regarding the mechanism by which plastin 3 regulates the status of actin microfilament bundles at the ES via its intrinsic actin filament bundling activity. Herein, we provide a brief review on the role of plastins in the testis in light of this report, which together with recent findings in the field, we propose a likely model by which plastins regulate ES function during the epithelial cycle of sDermatogenesis via their intrinsic activity on actin microfilament organization in the rat testis. 展开更多
关键词 actin binding proteins actin bundling proteins CYTOSKELETON F-actin fimbrins plastins seminiferous epithelial cycle SPERMATOGENESIS TESTIS
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肿瘤转移消失蛋白促进cortactin但抑制N-WASP介导的肌动蛋白聚合
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作者 林金秀 吴可贵 詹熙 《福建医科大学学报》 2004年第4期435-435,共1页
关键词 肿瘤转移抑制蛋白 CORTactin N-WASP actin聚合 细胞迁移
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CTP参数联合血清β-actin、MMP-9、S100β水平对急性缺血性卒中病情程度的预测价值
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作者 杨榕 江秉泽 何松彬 《医学影像学杂志》 2025年第11期23-28,共6页
目的探讨CT灌注成像(CTP)参数[局部脑血流量(rCBF)、局部脑血容积(rCBV)、最大达峰时间(T_(max))]联合血清β-肌动蛋白(β-actin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、S100钙结合蛋白β(S100β)对急性缺血性卒中病情程度的预测价值。方法选取12... 目的探讨CT灌注成像(CTP)参数[局部脑血流量(rCBF)、局部脑血容积(rCBV)、最大达峰时间(T_(max))]联合血清β-肌动蛋白(β-actin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、S100钙结合蛋白β(S100β)对急性缺血性卒中病情程度的预测价值。方法选取125例急性缺血性卒中患者,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估患者病情程度,并将其分为轻度组、中度组及重度组,均行CTP检查。比较三组的临床资料及血清β-actin、MMP-9、S100β水平和rCBF、rCBV、T_(max),并采用Logistic回归分析血清β-actin、MMP-9、S100β水平及rCBF、rCBV、T_(max)对患者病情程度的影响。采用ROC曲线分析血清β-actin、MMP-9、S100β水平及rCBF、rCBV、T_(max)对患者病情程度的预测价值。结果三组舒张压、再灌注治疗、血小板计数、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、尿酸以及血清β-actin、MMP-9、S100β水平和rCBF、rCBV、T_(max)比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析显示,血清β-actin、MMP-9、S100β水平升高以及rCBF、rCBV降低、T_(max)延长均为急性缺血性卒中患者病情加重的独立预测因素。ROC曲线分析显示,rCBF、rCBV、T_(max)单一检测的AUC均低于联合检测(P均<0.05),血清β-actin、MMP-9、S100β水平及rCBF、rCBV、T_(max)单一检测的AUC均低于联合检测(P均<0.05)。结论血清β-actin、MMP-9、S100β水平及rCBF、rCBV、T_(max)联合检测对急性缺血性卒中患者病情程度具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 CT灌注成像 Β-肌动蛋白 基质金属蛋白酶-9 S100钙结合蛋白B 急性缺血性卒中
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弱极低频磁场对Actin骨架组装效率的频率窗口效应初探 被引量:1
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作者 杜娟 吴霞 +6 位作者 齐红新 宋维涛 王志丹 饶凌月 张三军 陈树德 夏若虹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第8期758-769,共12页
前期研究发现,50Hz弱磁场辐照能明显降低细胞的微丝含量和组装效率,对actin骨架形态也有明显影响.电磁生物学效应是否与辐照场频率相关,一直受到研究者的关注.单体球状肌动蛋白(G—actin)是带电结构,电磁场频率会影响其振荡频... 前期研究发现,50Hz弱磁场辐照能明显降低细胞的微丝含量和组装效率,对actin骨架形态也有明显影响.电磁生物学效应是否与辐照场频率相关,一直受到研究者的关注.单体球状肌动蛋白(G—actin)是带电结构,电磁场频率会影响其振荡频率并对微丝聚合效率产生影响.本文从细胞骨架形态和蛋白质两层次,采用免疫荧光技术考察0.4mT,在35~140Hz范围内5个频率的极低频磁场(ELF-MF)对FL细胞中纤维状肌动蛋白(F-actin)含量的影响,并采用荧光共振能量转移技术(FRET)验证效应最明显的频率对离体G-actin组装效率的干扰程度.结果显示,相比假辐照组,细胞中F—actin含量在50Hz辐照组下降T(34.66±3.141%,110Hz次之,而另外3组(35、70和140Hz)无显著性差异.同时利用FRET方法验证,在50Hz磁场辐照下,离体环境中G.actin组装成F.actin的效率较假辐照组、35和70Hz组显著降低.经初步分析,G-actin在弱ELF—MF中受到以洛伦兹力和感生电场力的合力为主的相关电磁力干扰,致使组装效率下降,且由于工频磁场周期与微丝组装周期的特殊相干性,在50Hz频率附近可能存在一个外磁场干扰actin骨架组装的频率窗口. 展开更多
关键词 工频磁场 磁场频率 G-actin F—actin 洛伦兹力 感生电场力
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百合肌动蛋白基因lilyActin的克隆与表达分析 被引量:22
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作者 梁云 袁素霞 +4 位作者 冯慧颖 徐雷锋 袁迎迎 刘春 明军 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1318-1326,共9页
为了在百合功能基因表达研究中选择一个理想内参基因,依据岷江百合cDNA文库所获得的百合肌动蛋白(Actin)基因的EST序列,采用RACE技术进行该基因cDNA全长克隆,并利用实时荧光定量PCR分析其在不同组织中的表达模式,获得百合肌动蛋白基因c... 为了在百合功能基因表达研究中选择一个理想内参基因,依据岷江百合cDNA文库所获得的百合肌动蛋白(Actin)基因的EST序列,采用RACE技术进行该基因cDNA全长克隆,并利用实时荧光定量PCR分析其在不同组织中的表达模式,获得百合肌动蛋白基因cDNA全长序列(GenBank登录号:JX826390),命名为lilyActin。该基因cDNA全长1367bp,其中,5′非编码区91bp,3′非编码区233bp,开放读码框1134bp,编码377个氨基酸。序列比对发现,该基因与其它15种植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性均在80%以上,氨基酸序列的相似性达98%。进化分析显示,百合肌动蛋白与郁金香肌动蛋白的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在百合的花蕾、叶片和鳞片组织中恒定表达,表明相对于其他物种的内参基因,lilyActin更适宜作为百合属植物的内参基因。 展开更多
关键词 百合 actin基因 基因克隆 表达分析 内参基因
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紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加 被引量:24
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作者 吴丽文 尹飞 +2 位作者 彭镜 王卫东 甘娜 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2008年第4期513-516,共4页
目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(... 目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。 展开更多
关键词 血脑屏障 紧密连接蛋白 actin ZO-1 OCCLUDIN 通透性 细胞培养
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拟南芥、水稻和杨树ACTIN家族全基因组分析 被引量:19
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作者 郭景康 陈青云 +2 位作者 戢茜 张亮生 王健 《上海大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期426-431,共6页
鉴定了覆盖拟南芥、水稻和杨树3种模式植物全基因组的20个拟南芥、18个水稻、22个杨树ACTIN蛋白基因,对其染色体定位、基因结构、基因复制等进行了综合分析.并在系统进化分析基础上,将ACTIN基因家族分为12个亚家族,有助于揭示植物ACTIN... 鉴定了覆盖拟南芥、水稻和杨树3种模式植物全基因组的20个拟南芥、18个水稻、22个杨树ACTIN蛋白基因,对其染色体定位、基因结构、基因复制等进行了综合分析.并在系统进化分析基础上,将ACTIN基因家族分为12个亚家族,有助于揭示植物ACTIN基因家族的进化历史,为后续ACTIN基因家族的功能提供线索,对研究植物ACTIN基因家族功能和进化上的多样性提供理论基础. 展开更多
关键词 拟南芥 水稻 杨树 actin基因家族
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多浆旱生植物霸王Actin基因片段的克隆及序列分析 被引量:30
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作者 伍国强 席杰军 +1 位作者 包爱科 王锁民 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期101-104,共4页
根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以霸王叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明:该片段长598bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenB... 根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以霸王叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明:该片段长598bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的Actin基因序列的同源性均在82%以上,与其他肌动蛋白的氨基酸序列的同源性达91%以上。 展开更多
关键词 霸王 actin基因 克隆 序列分析
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盐生植物碱蓬Actin基因片段的克隆及序列分析 被引量:26
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作者 马清 周向睿 +1 位作者 伍国强 王锁民 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-3,共3页
目的:克隆盐生植物碱蓬(Suaeda glauca)Actin基因片段,为研究其它基因在碱蓬的表达和调控提供内参基因。方法:根据已知植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段,使用分子生物学软件进行序列分析... 目的:克隆盐生植物碱蓬(Suaeda glauca)Actin基因片段,为研究其它基因在碱蓬的表达和调控提供内参基因。方法:根据已知植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段,使用分子生物学软件进行序列分析。结果:获得一段大小为598bp的基因片段,编码198个氨基酸;该序列与其它Actin基因核苷酸序列的同源性均在80%以上,与氨基酸序列的同源性达93%以上。结论:克隆的基因为Actin基因片段,将其命名为SgACT,并登录在GenBank,登录号为EU429457。 展开更多
关键词 碱蓬 actin基因 克隆 序列分析
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香樟Actin基因的克隆及表达分析 被引量:9
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作者 李勇鹏 张力维 +2 位作者 姚瑶 黄蕊 杜丽 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期120-127,共8页
Actin作为一个看家基因,经常在实时定量PCR中被用作内参对不同样品中的m RNA进行定量,因此在基因表达分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法,根据Gen Bank中已经公布的其他植物的Actin基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR(Revers... Actin作为一个看家基因,经常在实时定量PCR中被用作内参对不同样品中的m RNA进行定量,因此在基因表达分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法,根据Gen Bank中已经公布的其他植物的Actin基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)技术从香樟中获得了4个c DNA片段。分子生物学分析软件分析结果显示,4个片段大小为均为998 bp,编码332个氨基酸;同源性分析表明,所获得的片段属于Actin亚家族,分别命名为Cc ACTa、Cc ACTb、Cc ACTc和Cc ACTd并提交Gen Bank(登录号:KM086736、KM086737、KM086738和KM086739)。实时定量PCR结果显示,Cc ACTc在根、茎、叶及低温处理的叶片中表达量相对稳定,可以作为候选内参基因。 展开更多
关键词 香樟 actin 基因克隆 表达分析 实时定量PCR
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香蕉果实SMART cDNA文库的构建及利用PCR方法筛选香蕉Actin2基因 被引量:16
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作者 徐碧玉 苏伟 +2 位作者 张建斌 刘菊华 金志强 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期375-380,共6页
利用SMART(switching mechanismat5’end of RNA transcript)技术,提取果实少量总RNA,经15-25轮LD-PCR扩增获得全长ds-cDNA,构建了海南主栽的食用香蕉巴西蕉(Musa AAA Group Cavendish)果实的cDNA文库。所构建的文库容量为5×106Pfu... 利用SMART(switching mechanismat5’end of RNA transcript)技术,提取果实少量总RNA,经15-25轮LD-PCR扩增获得全长ds-cDNA,构建了海南主栽的食用香蕉巴西蕉(Musa AAA Group Cavendish)果实的cDNA文库。所构建的文库容量为5×106Pfuml-1,重组率93%。利用此cDNA文库,采用96孔板PCR法筛选香蕉Actin2基因,测序结果显示,序列全长1723bp,编码区长1134bp,编码378个氨基酸,与蝴蝶兰Actin2基因序列同源率达83%,已递交GenBank,接受号692696。 展开更多
关键词 香蕉 果实 SMART CDNA文库 96孔板PCR actin2基因
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13种植物actin基因的密码子使用特性分析 被引量:8
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作者 赵洋 杨培迪 +2 位作者 刘振 成杨 杨阳 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期519-523,共5页
【目的】分析13种植物actin基因的密码子组成、密码子偏性及聚类关系,了解其密码子使用模式及影响密码子使用的因素,为深入研究分子进化及物种进化提供参考。【方法】运用Codon W 1.4.4软件分析13种植物的肌动蛋白基因(actin)密码子... 【目的】分析13种植物actin基因的密码子组成、密码子偏性及聚类关系,了解其密码子使用模式及影响密码子使用的因素,为深入研究分子进化及物种进化提供参考。【方法】运用Codon W 1.4.4软件分析13种植物的肌动蛋白基因(actin)密码子组成及使用参数,并对影响密码子偏性的因素进行研究。应用MEGA 4.1对13条基因的CDS序列进行聚类分析,采用SPSS 20.0进行密码子偏性的聚类分析。【结果】双子叶植物中actin基因的GC含量为45.0%~51.2%、GC3s含量为36.3%~53.8%,单子叶植物中GC含量为53.0%~58.3%、GC3s含量为60.9%~75.8%;actin基因在单子叶植物中偏爱G/C结尾的密码子,双子叶植物中偏爱A/T结尾的密码子。GC和GC3s与有效密码子数(ENC)呈极显著负相关(P〈0.01),相关系数均为-0.906。ENC绘图分析结果表明,actin基因密码子偏性同时受突变和选择压力影响,单子叶植物受选择压力影响的程度大于双子叶植物。基于actin基因密码子偏性的聚类将单子叶植物高粱、玉米聚为一类,水稻、大麦、竹聚为一类,8种双子叶植物聚为一类。【结论】actin基因密码子偏性与碱基组成密切相关,其密码子偏性在单、双子叶植物间存在差异,依据密码子偏性的聚类能在一定程度上反映物种间的亲缘关系。 展开更多
关键词 actin基因 密码子用法 密码子偏性
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中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR方法的建立和优化 被引量:8
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作者 侯林 姜丽娟 +4 位作者 孙文静 张瑞锋 王家庆 赵欣涛 安家璐 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2006年第4期466-469,共4页
根据GenBank中卤虫actin基因的保守区域序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ作为染料建立了实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR)方法.以Ct值为纵坐标,以稀释倍数的对数为横坐标,建立标准曲线,其相关系数达到... 根据GenBank中卤虫actin基因的保守区域序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ作为染料建立了实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR)方法.以Ct值为纵坐标,以稀释倍数的对数为横坐标,建立标准曲线,其相关系数达到了0.999.溶解曲线分析显示产物为单一的特异峰,Tm为83.6℃.结果表明:本实验建立的中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR法扩增效率高、特异性强、线性范围广、检测周期短,为actin基因作为内参基因进行卤虫早期胚胎发育基因表达的定量分析奠定了基础. 展开更多
关键词 中国卤虫 actin基因 实时荧光定量PCR
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海州香薷Actin基因片段克隆及表达分析 被引量:6
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作者 蔡深文 熊治廷 +2 位作者 刘晨 徐仲瑞 邓松强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期111-115,共5页
通过克隆海州香薷Actin基因片段并分析其组织表达,为研究海州香薷重金属抗性相关基因的表达调控奠定基础。根据Gen Bank中其他植物Actin基因保守序列设计兼并引物,以海州香薷根总RNA为模板,利用RT-PCR技术分离得到Actin基因片段。序列... 通过克隆海州香薷Actin基因片段并分析其组织表达,为研究海州香薷重金属抗性相关基因的表达调控奠定基础。根据Gen Bank中其他植物Actin基因保守序列设计兼并引物,以海州香薷根总RNA为模板,利用RT-PCR技术分离得到Actin基因片段。序列分析结果表明,海州香薷Actin基因片段长576 bp,编码192个氨基酸,与其他植物同源基因的氨基酸序列相似性为84%-97%,所克隆的序列为Actin基因的同源片段,将其命名为Eh ACT,在Gen Bank中提交序列,获得登录号AGT37260。半定量RT-PCR分析结果表明,Eh ACT在海州香薷的根、茎和叶中表达相对稳定,初步表明其可作为研究海州香薷基因表达的内参基因。 展开更多
关键词 海州香薷 actin基因 克隆 表达
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葡萄Actin基因家族的鉴定及进化和表达分析 被引量:8
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作者 崔力文 郑婷 +3 位作者 张克坤 张川 上官凌飞 房经贵 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期1-10,共10页
采用生物信息学方法从葡萄(Vitis vinifera Linn.)全基因组中鉴定Actin基因家族,并对各基因的染色体定位和结构特征,编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位、二级结构、三级结构和系统进化,以及不同组织的基因表达进行研究。结果表明:葡萄Ac... 采用生物信息学方法从葡萄(Vitis vinifera Linn.)全基因组中鉴定Actin基因家族,并对各基因的染色体定位和结构特征,编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位、二级结构、三级结构和系统进化,以及不同组织的基因表达进行研究。结果表明:葡萄Actin基因家族16个基因分布在12条染色体上。16个基因的结构特征及其编码蛋白质的理化性质差异较大。16个基因的长度及其内含子总长度的变化范围较大,编码序列(CDS)和外显子总长度的变化范围较小。除登录号GSVIVG01008254001和GSVIVG01014035001的基因外,其他14个基因的GC含量均低于其CDS的GC含量。除登录号GSVIVG01008254001的基因外,其他15个基因编码的蛋白质的理论相对分子质量为12 534.54~82 612.33,理论等电点为p I 4.92~p I 9.13。16个基因编码蛋白质的消光系数为14 105~73 645,脂肪族氨基酸指数为65.54~92.06,其中9个为稳定蛋白,7个为不稳定蛋白。除登录号GSVIVG01014035001的基因外,其他15个基因编码的蛋白质均为亲水性蛋白。登录号GSVIVG01016517001的基因编码的蛋白质定位于细胞质和细胞核,其他15个基因编码的蛋白质定位于细胞质。二级结构和三级结构显示:葡萄Actin基因家族16个基因编码的蛋白质均由α螺旋、无规则卷曲和延伸链构成,且总体以无规则卷曲为主。系统进化分析和不同组织的基因表达分析结果显示:与拟南芥[Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.]相似,葡萄Actin基因家族16个基因编码的蛋白质分为3个亚家族,ClassⅡ亚家族(营养型)包括登录号GSVIVG01003099001和GSVIVG01026580001的基因编码的蛋白质,这2个基因在所有组织中的表达均较高;ClassⅢ亚家族(生殖型)包括登录号GSVIVG01033494001、GSVIVG01024980001和GSVIVG01016550001的基因编码的蛋白质,这3个基因在花粉、雄蕊和花中的表达均较高;ClassⅠ亚家族包括其他11个基因编码的蛋白质,这11个基因在各组织中的表达总体上较低。研究结果显示:葡萄Actin基因家族的表达具有组织特异性。 展开更多
关键词 葡萄 actin基因家族 系统进化 基因表达
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