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用CRISPR/Cas 9技术构建ACSS3基因稳定敲除的肺癌细胞株
1
作者 黄倩倩 贾玉芳 +4 位作者 余华军 陈融融 陈丽丽 伍俊 张海涛 《基础医学与临床》 2025年第8期1016-1021,共6页
目的利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术研究酰基辅酶A合成酶短链家族成员3(ACSS3)基因对人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)增殖的影响。方法用Western blot检测ACSS3在肺癌细胞中的表达。设计sgRNA,构建CRISPR/Cas 9靶向敲除载体并转染NCI-H460细... 目的利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术研究酰基辅酶A合成酶短链家族成员3(ACSS3)基因对人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)增殖的影响。方法用Western blot检测ACSS3在肺癌细胞中的表达。设计sgRNA,构建CRISPR/Cas 9靶向敲除载体并转染NCI-H460细胞。用嘌呤霉素筛选出成功转染的细胞,用有限稀释法筛选出稳定敲除ACSS3的单克隆细胞株并扩大培养。Western blot验证敲除细胞株ACSS3的表达。MTT法和集落形成实验检测敲除ACSS3基因对NCI-H460细胞增殖的影响。结果与人正常肺上皮细胞BEAS-2B细胞相比,NCI-H460细胞中ACSS3的表达量显著升高(P<0.05)。Western blot检测敲除细胞株中ACSS3表达呈阴性。与空载体转染的对照组细胞相比,敲除ACSS3后,NCI-H460细胞的增殖活力和集落形成能力受到抑制(P<0.05)。结论成功获得稳定敲除ACSS3基因的NCI-H460细胞株,为后续研究ACSS3在肺癌中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 肺癌 CRISPR/Cas 9 acss3
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膀胱癌组织miRNA-218、ACSS3表达及其与患者临床病理特征、预后的关系
2
作者 杜凌云 王善龙 唐晓梅 《临床和实验医学杂志》 2025年第3期264-269,共6页
目的探讨膀胱癌组织微RNA(miRNA)-218、酰基辅酶A合成酶短链家族成员3(ACSS3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取2020年5月至2023年5月于榆林市中医医院泌尿外科行手术治疗的108例膀胱癌患者作为研究对象,将患者的癌组... 目的探讨膀胱癌组织微RNA(miRNA)-218、酰基辅酶A合成酶短链家族成员3(ACSS3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取2020年5月至2023年5月于榆林市中医医院泌尿外科行手术治疗的108例膀胱癌患者作为研究对象,将患者的癌组织标本纳入膀胱癌组,对应癌旁组织标本纳入癌旁组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miRNA-218,采用免疫组织化学法检测ACSS3,比较两组标本组织的miRNA-218表达水平以及ACSS3阳性率;比较不同临床病理特征膀胱癌患者癌组织miRNA-218表达水平、ACSS3阳性率。术后短期随访1年,观察记录膀胱癌患者预后生存情况,其中预后不良组36例、预后良好组72例。Logistic回归分析影响膀胱癌患者预后生存的因素,分析miRNA-218、ACSS3单独以及联合检测对膀胱癌患者预后的价值并绘制受试者工作特征(ROC)曲线;Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较不同miRNA-218表达水平、ACSS3阳性与阴性膀胱癌患者生存时间。结果膀胱癌患者癌组织中miRNA-218表达水平、ACSS3阳性率分别为2.64±0.41、24.07%,均低于癌旁组织(3.78±0.72、87.04%),差异均有统计学意义(P<0.05)。与TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤病理分级低级、无淋巴结转移的膀胱癌患者相比,miRNA-218表达水平以及ACSS3阳性率在Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤病理分级高级、有淋巴结转移的膀胱癌患者更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤病理分级高级、有淋巴结转移患者占比高于预后良好组,ACSS3阳性表达患者占比、miRNA-218表达水平低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤病理分级高级、有淋巴结转移、miRNA-218低表达、ACSS3阳性率低是膀胱癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-218、ACSS3联合检测预测膀胱癌患者预后的AUC值高于单项检测(P<0.05)。miRNA-218>2.890、ACSS3阳性患者生存时间长于miRNA-218≤2.890、ACSS3阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-218、ACSS3与膀胱癌患者临床病理特征和预后密切相关,且为影响膀胱癌患者预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 微RNA-218 酰基辅酶A合成酶短链家族成员3 临床病理特征 预后
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ACSS3基因在胶质瘤中的表达及临床意义 被引量：1
3
作者 高论 刘骏辉 +1 位作者 邓钢 陈谦学 《医学研究杂志》 2020年第12期36-40,共5页
目的研究ACSS3(Acyl-coA synthetase super-family 3)基因在胶质瘤中的表达情况及评估其对患者预后的影响。方法从TCGA(the cancer genome atlas)、CGGA(Chinese glioma genome atlas)、Rembrandt、Gravendeel数据库中下载胶质瘤的基因... 目的研究ACSS3(Acyl-coA synthetase super-family 3)基因在胶质瘤中的表达情况及评估其对患者预后的影响。方法从TCGA(the cancer genome atlas)、CGGA(Chinese glioma genome atlas)、Rembrandt、Gravendeel数据库中下载胶质瘤的基因表达数据和对应的临床表达数据;使用GraphPad prism 8.0软件做生存分析和临床特征的相关性分析。用Cancer GSEA在线网站分析ACSS3在胶质瘤和GBM(glioblastoma multiforme)中潜在的生物学功能。结果ACSS在GBM中的表达水平显著高于正常组织和较低级别胶质瘤(lower grade glioma,LGG)。另外,ACSS3的表达还和IDH(isocitrate dehydrogenase)和1p19q的状态相关。ACSS3在GBM和较低级别胶质瘤(LGG)中高表达明显地降低了患者的总生存时间。Cancer GSEA分析表明,ACSS在胶质瘤中可能参与了EMT(epithelial-mesenchymal transition)和新陈代谢,在GBM中可能参与了细胞侵袭、缺氧和血管生成等生物学功能。结论ACSS3是胶质瘤的新型预后标志物和治疗靶标。 展开更多
关键词 acss3 胶质瘤 生存分析 生物学标志物
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瘢痕疙瘩发病机制中的脂代谢相关基因:基于生物信息学分析和验证
4
作者 钟依秀 王琦 张江林 《皮肤性病诊疗学杂志》 2024年第5期313-318,共6页
目的基于生物信息学方法探讨瘢痕疙瘩发生发展的脂代谢相关基因。方法从GEO数据库获取瘢痕疙瘩相关数据集,从Genecards数据库下载脂代谢相关基因,进行交集分析筛选出共同基因;对差异基因进行GO、KEGG富集分析;使用实时荧光定量PCR(qRT-P... 目的基于生物信息学方法探讨瘢痕疙瘩发生发展的脂代谢相关基因。方法从GEO数据库获取瘢痕疙瘩相关数据集,从Genecards数据库下载脂代谢相关基因,进行交集分析筛选出共同基因;对差异基因进行GO、KEGG富集分析;使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组化验证显著差异基因。结果瘢痕疙瘩中脂代谢相关差异基因共有2个共同基因ACSS3和PRKD1,其中ACSS3差异最显著。差异基因的生物过程主要富集在甘油酯生物合成过程和脂肪酸衍生物代谢过程等。KEGG主要富集在甘油酯代谢过程和花生四烯酸代谢过程等。qRT-PCR和免疫组化显示ACSS3在瘢痕疙瘩组织中高表达。结论ACSS3可能通过影响脂代谢在瘢痕疙瘩发生发展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 脂代谢 acss3 生物信息学
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转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后
5
作者 冉鹂键 汪荣泉 +1 位作者 蒋涛 尚杨杨 《西部医学》 2023年第7期943-950,958,共9页
目的 转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌(CRC)前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞(sh-Ascl2/LS174T)的mRNA及miRNA差异表达数据(GSE69036... 目的 转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌(CRC)前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞(sh-Ascl2/LS174T)的mRNA及miRNA差异表达数据(GSE69036和GSE34926)分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P<0.01),Acss3的mRNA水平明显升高(P<0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P<0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织(P<0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P<0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期(DSS)、总体生存期(OS)、无进展生存期(PFS)无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论 Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后。 展开更多
关键词 Ascl2 Acss1/3 结直肠癌 生存预后
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