目的:分析铁死亡相关基因长链酯酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、转铁蛋白受体(transferrin receptor, TFRC)及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在间皮瘤组织中的表...目的:分析铁死亡相关基因长链酯酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、转铁蛋白受体(transferrin receptor, TFRC)及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在间皮瘤组织中的表达水平、相关性及意义,观察YAP活化对间皮瘤细胞系211H侵袭转移能力及铁死亡敏感性的影响。方法:应用组织芯片技术和免疫组化法观察ACSL4、TFRC及YAP在30例间皮瘤组织和10例正常组织中的表达,分析蛋白水平及分布的相关性。GEPIA数据库分析基因ACSL4、TFRC和YAP在间皮瘤组织中的m RNA水平相关性。应用逆转录病毒载体于211H细胞中过表达活化型YAP S127A (serine-127突变为alanine),利用实时荧光定量PCR检测ACSL4及TFRC表达;利用划痕实验和transwell侵袭实验检测211H细胞迁移及侵袭能力;利用erastin刺激及SYTOX Green染色检测铁死亡敏感性。结果:间皮瘤组织中YAP细胞核表达、ACSL4及TFRC阳性表达率显著高于正常组织,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001,P<0.0001)。经Spearman秩相关检验,ACSL4及TFRC蛋白在间皮瘤中的表达呈正相关(Spearman r=0.61,P=0.0003);YAP在细胞核中的表达与ACSL4表达呈正相关(Spearman r=0.4872,P=0.0063)。GEPIA数据库分析发现,YAP与ACSL4、ACSL4与TFRC在间皮瘤中的m RNA表达水平均呈正相关(Spearman r=0.33, P=0.0019;Spearman r=0.52,P=0.0000)。表达活化型YAP的211H细胞,ACSL4与TFRC m RNA水平与对照细胞相比均上调;迁移侵袭能力增强;铁死亡敏感性增强。结论:YAP、ACSL4及TFRC在间皮瘤组织中表达具有正相关性;YAP活化促进间皮瘤细胞侵袭转移能力,同时通过ACSL4及TFRC提高细胞对铁死亡诱导的敏感性。YAP、ACSL4及TFRC有望成为预测间皮瘤铁死亡敏感性的潜在生物学标志物。展开更多
文摘目的探究糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)血瘀证大鼠肾损害与肾脏铁死亡的潜在机制。方法将50只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、DKD组、DKD血瘀证组。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法复制DKD大鼠模型,采用尾静脉注射右旋糖酐的方法复制DKD血瘀证模型。实验过程中观察大鼠血瘀证表现及检测24 h尿蛋白、血清肌酐、血尿素氮、血液流变学指标,采用苏木精-伊红染色、Masson染色、PAS染色观察肾脏的组织形态,采用透射电子显微镜观察铁死亡典型细胞的线粒体变化;采用免疫组织化学法、Western blot法检测肾组织铁死亡相关蛋白[长链酯酰辅酶A合成酶4(Acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]及肾脏纤维化指标[纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅳ型胶原蛋白(typeⅣcollagen,Col-Ⅳ)]的表达水平。结果与对照组比较,DKD组大鼠肾脏病理变化加重,线粒体损伤明显,24 h尿蛋白含量,血清肌酐、血尿素氮水平及全血黏度、血浆黏度明显升高(P<0.05),肾脏ACSL4、FN和Col-Ⅳ及其mRNA表达水平明显升高(P<0.05),GPX4蛋白及其mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。DKD血瘀证大鼠出现唇色黯淡、眼球黯红、耳廓紫红、舌下脉络紫黯等血瘀证表现,24 h尿蛋白和血清肌酐、血尿素氮水平明显高于DKD组,光学显微镜下可见肾脏出现明显的系膜基质增生、肾小球萎缩、肾间质胶原沉积和纤维化,电子显微镜下可见肾组织细胞线粒体损伤明显,嵴基本断裂,ACSL4、FN、Col-Ⅳ及其mRNA表达水平较DKD组明显上升(P<0.05),GPX4蛋白及其mRNA表达水平较DKD组明显下降(P<0.05)。结论DKD血瘀证大鼠肾脏损害更加严重,其机制可能与GPX4、ACSL4介导的铁死亡有关。
