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癌睾丸抗原ACRBP与肝癌免疫浸润的初探
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作者 曾曌月 赵振凯 +6 位作者 蒋佳男 李枫 农蔚霞 葛盈盈 谢小薰 张庆梅 罗彬 《医学研究杂志》 2025年第1期79-86,共8页
目的 探究癌-睾丸抗原顶体素结合蛋白(acrosin binding protein,ACRBP)在肝癌中的表达及其与免疫浸润的相关性。方法 首先利用UALCAN(university of alabama at birmingham cancer data analysis portal,UALCAN)和HPA(human protein atl... 目的 探究癌-睾丸抗原顶体素结合蛋白(acrosin binding protein,ACRBP)在肝癌中的表达及其与免疫浸润的相关性。方法 首先利用UALCAN(university of alabama at birmingham cancer data analysis portal,UALCAN)和HPA(human protein atlas,HPA)数据库分析肝癌和正常肝组织中ACRBP的mRNA和蛋白的表达情况。基于TCGA数据,采用TIMER(tumor immune estimation resource,TIMER)数据库、CIBERSOFT(cell-type identification by estimating relative subsets of rna transcripts,CIBERSORT)工具和TISIDB(an integrated repository portal for tumor-immune system interactions,TISIDB)数据库分析肝癌中ACRBP的表达与免疫细胞浸润及免疫调节基因的相关性。此外,还分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),与ACRBP表达下调的肝癌细胞共培养,通过ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫分子的分泌,流式细胞术检测PBMC的凋亡情况。结果 生物信息学分析显示,在肝癌组织中,ACRBP mRNA及蛋白表达均显著高于正常肝组织;ACRBP的mRNA表达与调节性T细胞(Treg细胞)浸润、免疫抑制分子和趋化因子等多种免疫调节基因呈正相关;与正常肝组织比较,ACRBP高表达的肝癌组织中浆细胞,γδT细胞,自然杀伤细胞(NK细胞)和M2型巨噬细胞浸润比例明显减少。在体外试验中,下调肝癌细胞中ACRBP的表达,发现PBMC分泌α肿瘤坏死因子、γ干扰素和白细胞介素2增加,PBMC的凋亡率有所增多。结论 肝癌中ACRBP的表达与免疫细胞浸润相关,ACRBP参与免疫细胞调节而影响肿瘤微环境,为将来开发以ACRBP为靶标的免疫治疗提供了理论基础。 展开更多
关键词 肝癌 acrbp 癌睾丸抗原 免疫浸润
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肝癌细胞miR-326介导的ACRBP转录抑制的研究
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作者 包晴 李冰莹 +4 位作者 刘俊棋 柳永清 梁晓乐 谢小薰 葛盈盈 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第4期605-611,共7页
目的:探究miR-326在人肝癌细胞株HepG2中对ACRBP表达的潜在调控作用。方法:运用TargetScan、miRanda和miRDB三个在线基因预测工具预测miR-326与ACRBP 3’UTR之间的保守结合位点;双荧光素酶报告系统分析ACRBP3’UTR保守结合位点突变后对m... 目的:探究miR-326在人肝癌细胞株HepG2中对ACRBP表达的潜在调控作用。方法:运用TargetScan、miRanda和miRDB三个在线基因预测工具预测miR-326与ACRBP 3’UTR之间的保守结合位点;双荧光素酶报告系统分析ACRBP3’UTR保守结合位点突变后对miR-326与ACRBP结合能力的影响;通过慢病毒转染的方法获得稳定高表达miR-326的HepG2肝癌细胞株;利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blotting检测miR-326上调对ACRBP mRNA和蛋白表达的影响。结果:在人肝癌细胞株HepG2中,miR-326可结合于ACRBP mRNA 3’UTR的保守位点,并抑制该基因mRNA翻译,从而抑制ACRBP的表达。结论:miR-326在HepG2中负向调控ACRBP的表达。 展开更多
关键词 miR-326 acrbp 肝癌
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猪ACRBP基因真核表达载体的构建及生殖系统表达验证
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作者 梁耀娣 陈云 +2 位作者 赵坤 潘学情 张守全 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期176-181,共6页
本实验旨在获得带有增强型绿色荧光蛋白及表达猪ACRBP基因的pIRES2-EGFP-ACRBP真核表达载体和CHO细胞株,并且检测猪睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、精子、精清、性成熟母猪卵巢和输卵管中ACRBP蛋白的表达情况。本实验通过基因克隆的方... 本实验旨在获得带有增强型绿色荧光蛋白及表达猪ACRBP基因的pIRES2-EGFP-ACRBP真核表达载体和CHO细胞株,并且检测猪睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、精子、精清、性成熟母猪卵巢和输卵管中ACRBP蛋白的表达情况。本实验通过基因克隆的方法获得猪源ACRBP基因,并构建了pIRES2-EGFPACRBP真核表达载体,经过双酶切、测序鉴定后,转染CHO细胞,通过绿色荧光观察、RT-PCR和Westernblot检验ACRBP表达载体在CHO癌细胞株中的表达情况。结果显示:ACRBP蛋白在睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、卵巢、输卵管、精子中有条带,而在猪的精清中没有条带,转入CHO细胞后可观察到带荧光的阳性质粒,通过RT-PCR和Western-blot检测到ACRBP在CHO中得到了表达。 展开更多
关键词 acrbp 酶切 真核表达载体 转染 WESTERN-BLOT
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顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达 被引量:1
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作者 罗彬 云翔 +6 位作者 林永达 肖绍文 闫光华 何少健 贺菽嘉 陈芳 谢小薰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1072-1074,共3页
目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通... 目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株。RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepG2细胞中ACRBP的表达情况。结果:pEG-FP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确;ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达。结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP。 展开更多
关键词 acrbp 基因克隆 转染
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