姜黄素对人肾癌ACHN细胞放射的增敏作用及其机制 被引量：21

1

作者 李刚 王子明 种铁 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期299-302,306,共5页

目的研究姜黄素对人肾癌ACHN细胞放射的增敏作用,并探讨其作用机制。方法以人肾癌ACHN细胞为研究对象,MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验检测姜黄素对ACHN细胞的放射增敏作用;流式细胞术检测ACHN细胞周... 目的研究姜黄素对人肾癌ACHN细胞放射的增敏作用,并探讨其作用机制。方法以人肾癌ACHN细胞为研究对象,MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验检测姜黄素对ACHN细胞的放射增敏作用;流式细胞术检测ACHN细胞周期分布;RT-PCR检测ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65和DNA-PKcs mRNA的表达。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞生长具有明显的抑制作用,且呈现剂量和时间效应。10μmol/L姜黄素可降低放射后人肾癌ACHN细胞的细胞存活分数(P<0.05),有放射增敏作用,放射增敏比SERDq为2.36。药物+放射组ACHN细胞周期阻滞在放射敏感时相G2/M期。与放射组相比,药物+放射组Bcl-2、NF-κBP65和DNA-PKcs mRNA水平明显降低(P<0.05)。结论姜黄素对人肾癌ACHN细胞具有放射增敏作用,其作用机制可能与其抑制ACHN细胞NF-κB表达,下调Bcl-2/Bax比例,抑制DNA损伤修复,改变ACHN细胞周期分布有关。 展开更多

关键词 姜黄素 肾细胞癌 凋亡 放射增敏 achn细胞

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肾癌ACHN细胞exosome对自身细胞增殖和凋亡的影响 被引量：4

2

作者 杨林 吴小候 +5 位作者 罗春丽 何云锋 张尧 陈雄 张龙 陈力学 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1498-1502,共5页

目的探讨肾癌ACHN细胞来源的exosome对肾癌ACHN细胞自身增殖和凋亡的影响及机制。方法用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法分离纯化肾癌ACHN细胞分泌的exosome;采用CCK-8法评价exosome对肾癌ACHN细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染... 目的探讨肾癌ACHN细胞来源的exosome对肾癌ACHN细胞自身增殖和凋亡的影响及机制。方法用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法分离纯化肾癌ACHN细胞分泌的exosome;采用CCK-8法评价exosome对肾癌ACHN细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡的变化;RT-PCR和Western blotting检测CyclinD1、caspase-3 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测p-Akt、p-ERK1/2的变化。结果成功使用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法分离纯化肾癌ACHN细胞分泌的exosome。exosome可促进肾癌ACHN细胞增殖,抑制其凋亡;在此过程中,CyclinD1 mRNA和蛋白的表达均上调,而caspase-3 mRNA表达无明显变化,caspase-3蛋白表达下调;同时p-Akt和p-ERK1/2的表达也上调。结论 exosome可促进肾癌ACHN细胞生长和增殖,抑制细胞凋亡。筛除肾癌微环境中的exosome或抑制其功能,可能成为肾癌治疗的有效新方法。 展开更多

关键词 EXOSOME 肾癌 增殖 凋亡 achn细胞

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海参多糖对肾癌ACHN细胞自噬的影响 被引量：4

3

作者 李天 周东梅 +4 位作者 刘一帆 江先汉 谢清灵 黄奕桥 殷羽飞 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2019年第5期758-762,共5页

目的:研究海参多糖对肾癌细胞自噬的影响。方法:将肾癌ACHN细胞分为海参多糖(50、100、200 mg/L)组和对照组,采用MTT法检测细胞活力,结晶紫染色观察细胞形态和细胞数量,Western blot法检测细胞增殖标志物(Ki-67、PCNA)、凋亡标志物(Clea... 目的:研究海参多糖对肾癌细胞自噬的影响。方法:将肾癌ACHN细胞分为海参多糖(50、100、200 mg/L)组和对照组,采用MTT法检测细胞活力,结晶紫染色观察细胞形态和细胞数量,Western blot法检测细胞增殖标志物(Ki-67、PCNA)、凋亡标志物(Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9)、自噬相关蛋白(Beclin1、P62、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ)、AKT/mTOR通路相关蛋白(PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、mTOR)的表达,FITC-V和PI染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,海参多糖组细胞活力、球体内细胞数、Ki-67及PCNA表达降低,细胞凋亡率增加,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Beclin1表达增加,P62表达减少,PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、mTOR表达量减少(P<0.05);且随着海参多糖质量浓度的增加,上述作用逐渐增强。结论:海参多糖通过抑制AKT/mTOR信号通路进而抑制肾癌细胞增殖,并诱导肾癌细胞发生自噬。 展开更多

关键词 海参多糖 肾癌 自噬 AKT MTOR achn细胞

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苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用及其机制 被引量：4

4

作者 种铁 付德来 +4 位作者 牛建强 李和程 张鹏 甘为民 王子明 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期740-744,共5页

目的观察苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌ACHN细胞株24、48、72、96 h,采用MTT法观察苦参碱对ACHN的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱对A... 目的观察苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌ACHN细胞株24、48、72、96 h,采用MTT法观察苦参碱对ACHN的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱对ACHN细胞凋亡的影响;免疫细胞化学技术检测苦参碱对ACHN细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果不同浓度的苦参碱对ACHN细胞株均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;苦参碱能明显诱导ACHN细胞株凋亡;苦参碱作用后,ACHN细胞株Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2蛋白表达有下降趋势,但无统计学差异。结论苦参碱对体外培养的人肾癌ACHN细胞株有显著的增殖抑制作用,其机制可能与调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值、诱导细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 苦参碱 肾癌 achn细胞株

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ITGB2在肾细胞癌组织中的表达及其对ACHN细胞恶性生物学行为的影响 被引量：2

5

作者 王琦 樊博 +3 位作者 刘彬 马永良 任宗涛 张爱莉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期442-448,共7页

目的:探讨肾细胞癌(RCC)组织及RCC细胞(ACHN细胞)中整合素β2(ITGB2)的表达及其对ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期的影响。方法:利用GEPIA数据库分析RCC和癌旁组织中ITGB2的表达情况。选取2016至2020年河北医科大学第四医院生... 目的:探讨肾细胞癌(RCC)组织及RCC细胞(ACHN细胞)中整合素β2(ITGB2)的表达及其对ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期的影响。方法:利用GEPIA数据库分析RCC和癌旁组织中ITGB2的表达情况。选取2016至2020年河北医科大学第四医院生物标本库留存的66例RCC患者的组织标本,采用免疫组化SP法、qPCR法检测66例RCC组织及癌旁组织中ITGB2的表达水平,分析其与临床各参数之间的关系。构建敲低ITGB2的shRNA并转染ACHN细胞进行功能实验,检测敲低ITGB2对ACHN细胞的恶性生物学行为的影响,并用流式细胞术检测其对细胞周期的影响。WB法检测敲低ITGB2对ACHN细胞ITGB2蛋白表达的影响。结果:RCC组织中ITGB2的相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.01),并与临床分期有关(P<0.05)。向ACHN细胞中转染shITGB2能够敲低ITGB2的基因和蛋白表达(均P<0.01)。敲低ITGB2可明显抑制ACHN细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05),但对细胞周期无明显影响(P>0.05)。结论:ITGB2在RCC组织及细胞中高表达,且与RCC的临床分期有关联,敲低ITGB2可抑制ACHN细胞的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 整合素β2 肾细胞癌 achn细胞 增殖 迁移 侵袭 细胞周期

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苦参碱对人ACHN肾癌裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用 被引量：4

6

作者 付德来 种铁 +4 位作者 王子明 李和程 张鹏 甘为民 汪磊 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2011年第1期10-13,共4页

目的探讨苦参碱对人ACHN肾癌裸鼠皮下模型的生长抑制作用。方法皮下包埋法建立人ACHN肾癌裸鼠皮下移植瘤模型,按照随机原则将裸鼠分为50、75、100mg/kg苦参碱组和生理盐水组,各组均采用腹腔注射给药,5次/周,连续3周。每天测量肿瘤最长... 目的探讨苦参碱对人ACHN肾癌裸鼠皮下模型的生长抑制作用。方法皮下包埋法建立人ACHN肾癌裸鼠皮下移植瘤模型,按照随机原则将裸鼠分为50、75、100mg/kg苦参碱组和生理盐水组,各组均采用腹腔注射给药,5次/周,连续3周。每天测量肿瘤最长径和最短经,计算肿瘤体积,比较各组肿瘤生长抑制率;光镜及电镜观察苦参碱作用后肿瘤细胞形态改变。结果 35只裸鼠成瘤27只,观察满3周后,50、75、100mg/kg苦参碱组的肿瘤生长抑制率分别为19.51%、38.73%、46.08%,光镜下见苦参碱给药组不同程度的细胞坏死,且坏死范围随苦参碱浓度的增大而增大;电镜观察发现苦参碱作用后出现典型的细胞凋亡和坏死形态表现。结论苦参碱对人ACHN肾癌具有明显的生长抑制作用,这为临床应用苦参碱治疗肾癌提供了实验基础。 展开更多

关键词 苦参碱 肾细胞癌 achn肾癌细胞系 裸鼠 肿瘤体积

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人ACHN肾癌裸鼠荷瘤模型建立及相关特性研究 被引量：4

7

作者 王江 陈安民 +2 位作者 郭风劲 祝文涛 丁然 《肿瘤学杂志》 CAS 2008年第6期466-469,共4页

[目的]探讨建立肾癌ACHN细胞系裸鼠皮下移植瘤及转移瘤模型的适宜条件。[方法]MTT法观察细胞生长情况。将裸鼠分组,分别用2.0×106/100μl(A组)、3.0×106/100μl(B组)和4.0×106/100μl(C组)的细胞接种浓度,注入裸鼠后项... [目的]探讨建立肾癌ACHN细胞系裸鼠皮下移植瘤及转移瘤模型的适宜条件。[方法]MTT法观察细胞生长情况。将裸鼠分组,分别用2.0×106/100μl(A组)、3.0×106/100μl(B组)和4.0×106/100μl(C组)的细胞接种浓度,注入裸鼠后项中间皮下;用4.0×106/100μl的细胞接种浓度,分别接种于裸鼠后项中间(C组)、背部(D组)和前肢腋窝皮下(E组);分别用第20代(F组),第30代(G组)和第10代(C组)的肿瘤细胞4.0×106/100μl,注入裸鼠后项中间,观察各组成瘤情况。尾静脉注射瘤细胞1.0×106/ml建立转移模型。[结果]第4天细胞进入对数生长期。A组成瘤率为33.3%、B组和C组的成瘤率均为100%,但C组的成瘤速度明显高于B组;C组、D组和E组的成瘤率均为100%,注射肿瘤细胞后第10天,C组、D组和E组的肿瘤生长平均相对体积,各组间尚无明显差异;注射后第30天,C组的肿瘤生长平均相对体积显著高于D组和E组(P<0.05);G组的成瘤率为83.3%,F组的成瘤率为100%,与C组相比,无显著性差异(P>0.05)。尾静脉注射组全部出现转移灶。[结论]使用ACHN细胞株,控制好浓度、接种部位以及传代次数后能获得较理想的裸鼠肾癌皮下移植瘤模型;使用传统尾静脉注射法可以建立裸鼠转移模型。 展开更多

关键词 achn细胞 肿瘤转移 模型 动物 小鼠 裸 肾肿瘤

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姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究 被引量：4

8

作者 李刚 种铁 王子明 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2010年第1期10-13,共4页

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞... 目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P<0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P<0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。 展开更多

关键词 姜黄素 肾细胞癌achn细胞株 凋亡 核转录因子-ΚB

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15-氧代绣线菊内酯对转移性肾癌细胞系ACHN恶性表型的抑制作用 被引量：1

9

作者 易晓明 唐朝朋 +6 位作者 许松 何昊玮 王龙信 张征宇 徐振宇 葛京平 周文泉 《江苏医药》 CAS 2015年第11期1241-1244,共4页

目的探讨15-氧代绣线菊内酯对转移性肾癌细胞的体外抗肿瘤效应及其机制。方法采用不同浓度15-氧代绣线菊内酯处理ACHN细胞株,MTT比色法、划痕损伤实验、膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色以及流式细胞术分别观察A... 目的探讨15-氧代绣线菊内酯对转移性肾癌细胞的体外抗肿瘤效应及其机制。方法采用不同浓度15-氧代绣线菊内酯处理ACHN细胞株,MTT比色法、划痕损伤实验、膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色以及流式细胞术分别观察ACHN细胞株增殖、迁移、细胞凋亡的变化,RT-PCR和/或Western blot检测Wnt信号通路靶基因表达。结果 15-氧代绣线菊内酯能明显抑制肾癌ACHN细胞株的增殖,其半数抑制浓度为0.987μmol/L。15-氧代绣线菊内酯呈浓度依赖性降低细胞迁移距离(P<0.05)、诱导细胞凋亡发生(P<0.05)、减少G0/G1期细胞、增加G2/M期细胞(P<0.05)。15-氧代绣线菊内酯能够显著抑制Axin2、LEF1、NKD1、Cyclin D1和生存素等Wnt靶基因以及Cdc25和Cdc2等细胞周期相关基因的表达。结论 15-氧代绣线菊内酯能在体外细胞水平显著抑制转移性肾癌ACHN细胞的增殖和迁移作用,诱导细胞凋亡,使细胞停滞于G2/M期;其对肾癌恶性表型的影响是通过抑制Wnt信号通路来实现的,可能是一种潜在的治疗转移性肾癌的药物。 展开更多

关键词 肾癌 15-氧代绣线菊内酯 achn细胞株

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CPI203抑制肾癌ACHN细胞增殖及其机制 被引量：1

10

作者 梁琼仙 胡波 +1 位作者 张海红 谭晓军 《分子影像学杂志》 2019年第2期253-257,共5页

目的研究CPI203杀伤人肾癌ACHN细胞的能力及潜在机制。方法不同浓度(0、0.1、0.5、1、5μmol/L)CPI203药物作用于ACHN细胞24、48 h后,采用CCK8试剂盒检测CPI203抑制ACHN细胞增殖效果;采用流式细胞术分析CPI203对ACHN细胞凋亡及细胞周期... 目的研究CPI203杀伤人肾癌ACHN细胞的能力及潜在机制。方法不同浓度(0、0.1、0.5、1、5μmol/L)CPI203药物作用于ACHN细胞24、48 h后,采用CCK8试剂盒检测CPI203抑制ACHN细胞增殖效果;采用流式细胞术分析CPI203对ACHN细胞凋亡及细胞周期的影响;划痕实验观察CPI203影响ACHN细胞迁移及侵袭能力;克隆形成实验检测CPI203抑制ACHN细胞克隆集落形成能力;荧光定量PCR法及免疫印迹法分别分析CPI203作用于ACHN细胞后, MYC、 NOXA、 AKT、 ERK、CyclinD1和GSK3β的表达量变化情况。结果 CPI203明显抑制肾癌细胞株ACHN细胞增殖,并呈时间及浓度依赖性(P<0.05);CPI203药物可促进ACHN细胞凋亡并抑制细胞生长周期(P<0.05);CPI203呈浓度依赖性地降低ACHN细胞的克隆形成能力及迁移能力(P<0.05);CPI203降低肾癌ACHN细胞中MYC、NOXA、AKT、ERK、CyclinD1和GSK3β表达量减少(P<0.05)。结论CPI203可抑制ACHN细胞增殖,促进肾癌细胞凋亡并抑制其生长周期进展,明显抑制癌细胞迁移及克隆形成能力,其作用机制与CPI203影响肾癌ACHN细胞中MYC、NOXA、AKT、ERK、CyclinD1和GSK3β表达量有关。 展开更多

关键词 肾癌 CPI203 achn细胞 细胞凋亡 细胞周期 细胞增殖

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Cyclin D_1基因沉默诱发肾癌ACHN细胞增殖受抑的研究

11

作者 王江 郭风劲 +2 位作者 陈安民 袁林 杨彩虹 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期141-146,共6页

目的证实Cyclin D1基因作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性及发卡环RNA(shRNA)表达载体介导该基因沉默的有效性。方法设计合成Cyclin D1-shRNA模板片段,与Pgenesil-1-U6载体连接,构建shRNA真核表达载体;将Pgenesil-Cyclin D1-shRNA转入ACH... 目的证实Cyclin D1基因作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性及发卡环RNA(shRNA)表达载体介导该基因沉默的有效性。方法设计合成Cyclin D1-shRNA模板片段,与Pgenesil-1-U6载体连接,构建shRNA真核表达载体;将Pgenesil-Cyclin D1-shRNA转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western blot分析Cyclin D1基因mRNA及蛋白表达;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞凋亡率;Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭。结果Pgene-sil-Cyclin D1-shRNA构建成功。Cyclin D1-shRNA实验组Cyclin D1mRNA抑制效果显著(0.10±0.04),明显高于Pgenesil-NC阴性对照组(0.92±0.03)及ACHN空白对照组(0.94±0.04)(均P<0.05)。同样,实验组Cyclin D1蛋白表达明显下调。流式细胞术分析提示,Cyclin D1-shRNA组细胞早期及晚期凋亡细胞均较Pgenesil-NC组和ACHN组显著增高。生长曲线显示Cyclin D1-shRNA组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell实验同样发现该组细胞侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论Cyclin D1可作为肾癌ACHN细胞生物学行为的评判标准。经载体介导shRNA干扰的高效性为肾癌基因治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 肾achn细胞 RNA干扰 细胞周期蛋白D1 增殖

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表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒抑制人肾癌ACHN细胞Ki67基因表达及增殖研究

12

作者 史震 郑骏年 +4 位作者 毛立军 郑宏祥 温儒民 李望 刘俊杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期790-793,799,共5页

目的:研究表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒(ZD55-Ki67)对肾癌ACHN细胞Ki67基因表达及增殖抑制作用。方法:ZD55-Ki67、溶瘤腺病毒ZD55、表达Ki67-siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad-Ki67感染人肾癌ACHN细胞。Western印迹法检测E1A表达;逆转录-聚合酶... 目的:研究表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒(ZD55-Ki67)对肾癌ACHN细胞Ki67基因表达及增殖抑制作用。方法:ZD55-Ki67、溶瘤腺病毒ZD55、表达Ki67-siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad-Ki67感染人肾癌ACHN细胞。Western印迹法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹、免疫组织细胞化学法检测Ki67表达;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;MTT法检测细胞存活;结晶紫染色法检测细胞毒作用。结果:感染ZD55-Ki67、ZD55的ACHN细胞表达E1A;抑制Ki67表达作用依次为ZD55-Ki67>Ad-Ki67>ZD55。ZD55-Ki67、ZD55、Ad-Ki67感染的ACHN细胞凋亡率(%)分别为(56.3±3.1)、(25.3±2.5)、(37.0±3.0),均显著高于对照组(5.5±2.1)(P<0.01),每种病毒之间均有显著差异(P<0.01);存活率(%)分别为(40.9±2.2)、(71.3±6.6)、(86.8±3.1),每种病毒之间均有显著差异(P<0.01);对ACHN细胞的细胞毒作用ZD55-Ki67>ZD55>Ad-Ki67。结论:表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒具有显著的抑制肾癌ACHN细胞Ki67基因表达、诱导凋亡、杀伤肾癌细胞作用。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 KI67基因 RNA干扰 肾癌achn细胞

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shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

13

作者 王江 陈安民 +3 位作者 郭风劲 祝文涛 袁林 陈剑峰 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第10期721-727,共7页

背景与目的:肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(cyclinE1)的过表达与预后密切相关。为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cyclinE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用。方法:针对cyclinE1基因设计并... 背景与目的:肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(cyclinE1)的过表达与预后密切相关。为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cyclinE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用。方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclinE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.88±0.04)及未转染组(0.90±0.03)(P<0.05)。经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.15±4.00)%(P<0.05)。生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:肾癌cyclinE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据。 展开更多

关键词 肾achn细胞 RNA干扰 细胞周期蛋白E1 细胞增殖 凋亡

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肾细胞癌组织中GPX4的表达及其对ACHN细胞增殖、迁移和侵袭的影响

14

作者 韩静雅 段亚涛 +1 位作者 张晓宇 任宗涛 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第22期4105-4109,共5页

目的:探讨肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织及ACHN细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达及其对ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:采用免疫组化法、qRT-PCR法检测RCC组织及正常肾组织中GPX4... 目的:探讨肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织及ACHN细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达及其对ACHN细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:采用免疫组化法、qRT-PCR法检测RCC组织及正常肾组织中GPX4的表达水平;构建敲低GPX4的shRNA质粒并转染ACHN细胞进行功能实验,检测敲低GPX4对ACHN细胞恶性生物学行为的影响,Western blot法检测敲低GPX4对ACHN细胞GPX4蛋白表达的影响。结果:RCC组织中GPX4蛋白和mRNA的表达量明显高于正常肾组织(P<0.01),向ACHN细胞中转染shGPX4能够敲低GPX4的基因和蛋白表达(P<0.05),敲低GPX4可明显抑制ACHN细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05)。结论:GPX4在RCC组织及ACHN细胞中高表达,敲低GPX4可抑制ACHN细胞的恶性生物学行为,提示GPX4可能作为一种癌基因在肾癌中发挥作用。 展开更多

关键词 肾癌 GPX4 achn细胞 增殖 迁移 侵袭

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血管生成抑制剂TNP-470抑制ACHN肾癌生长的实验研究

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作者 黄海鹏 曾进 梅伟 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期478-480,共3页

目的　用ACHN肾癌细胞株建立肾癌动物模型 ,观察血管生成抑制剂TNP 4 70的抗肿瘤生长和转移效应。方法　将ACHN肾癌细胞株 2 0× 10 6/ 0 2ml接种于BALB/c裸鼠背部皮下 ,将 16只裸鼠随机分为对照组和用药组 ,自第 3天起分别给予溶... 目的　用ACHN肾癌细胞株建立肾癌动物模型 ,观察血管生成抑制剂TNP 4 70的抗肿瘤生长和转移效应。方法　将ACHN肾癌细胞株 2 0× 10 6/ 0 2ml接种于BALB/c裸鼠背部皮下 ,将 16只裸鼠随机分为对照组和用药组 ,自第 3天起分别给予溶剂 (3%无水乙醇 +97%生理盐水 ) 0 2ml和TNP 4 70 (4 0mg/kg) ,隔日给药。第 31天断颈处死小鼠 ,测定两组皮下瘤重、体积、微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)及肺转移率。 结果　两组皮下瘤重分别为 (6 30 15± 12 3 6 5 )mg和 (2 70 0 0± 6 2 35 )mg (P <0 0 1) ,皮下瘤体积分别为 (316 16± 6 0 2 8)mm3 和(12 6 5 0± 4 5 12 )mm3 (P <0 0 1)。MVD计数 (4 0 0倍视野 )分别为 12 0 0± 3 78和 5 6 5± 2 31(P <0 0 1)。两组肺转移率分别为 6 2 5 %和 0 % (P <0 0 5 )。结论　血管生成抑制剂TNP 4 70通过抑制肿瘤血管生成而发挥抗瘤效应。 展开更多

关键词 血管生成抑制剂 TNP-470 achn 肾癌 癌生长 肾肿瘤 微血管密度

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肾癌ACHN细胞HIF-1α基因siRNA真核表达质粒的构建与筛选

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作者 马亚东 王子明 种铁 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2012年第4期337-341,共5页

目的采用RNA干扰方法,构建及筛选对肾透明细胞癌ACHN细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因有干扰沉默作用的真核表达质粒。方法 CoCl2缺氧诱导培养ACHN细胞高表达HIF-1α,设计并化学合成4条针对HIF-1α基因的小干扰RNA(siRNA)序列,构建相... 目的采用RNA干扰方法,构建及筛选对肾透明细胞癌ACHN细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因有干扰沉默作用的真核表达质粒。方法 CoCl2缺氧诱导培养ACHN细胞高表达HIF-1α,设计并化学合成4条针对HIF-1α基因的小干扰RNA(siRNA)序列,构建相应真核表达质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2/3/4,经测序分析,质粒构建成功后,分别转染ACHN细胞后培养24h,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率,采用荧光实时定量PCR(real time-PCR)和免疫印记杂交法(Western blot)分别检测HIF-1α的mRNA与蛋白表达水平。结果质粒构建后经测序显示与设计完全一致;荧光显微镜下观察到ACHN细胞表达绿色荧光蛋白,证实重组质粒已转入细胞,转染效率约为78%;实时定量PCR与Western blot结果显示,siRNA-1/2组HIF-1α的mRNA与蛋白表达较对照组均明显下降(P<0.05),质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2明显干扰抑制ACHN细胞HIF-1α基因表达,其中以质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1效果最佳。结论本实验成功构建靶向HIF-1α基因的真核表达质粒,并筛选出能有效抑制ACHN细胞HIF-1α基因表达的质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2,这为肾癌的基因治疗提供了新的方法和手段。 展开更多

关键词 肾透明细胞癌 achn细胞 缺氧诱导因子-1Α 质粒 小干扰RNA

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UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶的表达、纯化及与ACHN-975复合物的X-射线衍射分析

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作者 李丹阳 樊帅 +1 位作者 金媛媛 杨兆勇 《中国医药生物技术》 2019年第5期406-411,共6页

目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系... 目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系统对超嗜热菌(Aquifex aeolicus)来源的 AaLpxC 进行异源表达,采用 Zn^2+-NTA 亲和层析、Q-HP 强阴离子交换色谱和 Superose 12 分子排阻色谱对重组蛋白进行分离纯化,对 AaLpxC 进行结构生物学研究,采用蒸汽扩散-悬滴法进行结晶条件筛选以及优化。结果获得纯度在 90%以上的超嗜热菌来源的 AaLpxC,经过结晶条件的优化获得分辨率为 1.21 А(1 А= 1 × 10^-10 m)的 AaLpxC 与 ACHN-975 的复合物晶体的衍射数据,其晶胞参数为 a = 65.569 А,b = 65.569 А,c = 131.595 А,α= 90.000°,β= 90.000°,γ= 120.000°。结论 ACHN-975 与 AaLpxC 复合物晶体结构的获得有望对 ACHN-975 小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。 展开更多

关键词 LpxC achn-975 蛋白纯化 结晶 X-射线衍射

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血管新生抑制剂TNP-470对鼠ACHN肾细胞癌增殖与凋亡的影响

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作者 李晓东 曾进 +1 位作者 黄海鹏 梅伟 《临床泌尿外科杂志》 2003年第8期490-491,共2页

目的 :探讨血管新生抑制剂TNP 4 70对ACHN肾细胞癌增殖与凋亡状态的影响。方法 :采用TNP 4 70 (4 0mg·kg-1·0 .2ml-1)皮下注射治疗ACHN肾细胞癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况 ,进行细胞增殖与细胞凋亡的研究。结果 :TNP 4 70治... 目的 :探讨血管新生抑制剂TNP 4 70对ACHN肾细胞癌增殖与凋亡状态的影响。方法 :采用TNP 4 70 (4 0mg·kg-1·0 .2ml-1)皮下注射治疗ACHN肾细胞癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况 ,进行细胞增殖与细胞凋亡的研究。结果 :TNP 4 70治疗组与对照组相比 ,ACHN肾癌生长明显减慢 ,肿瘤细胞凋亡指数明显增加 (P <0 .0 1) ,增殖指数无显著变化 (P >0 .0 5 )。肿瘤体积与凋亡指数间存在负相关 (r =- 0 .85 4 0 ,P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70对ACHN肾癌有显著的抑制肿瘤生长作用 。 展开更多

关键词 血管新生抑制剂 TNP-470 achn 肾细胞癌 增殖 凋亡 影响

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白藜芦醇对肾细胞癌ACHN细胞增殖与凋亡的影响 被引量：5

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作者 邓廷志 李富林 +2 位作者 陈烈钳 黄栋强 陈景宇 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第9期865-868,共4页

目的探讨白藜芦醇对肾细胞癌ACHN细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法对数生长期ACHN细胞随机分为对照组(100μmol/L培养液)、25μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+25μmol/L白藜芦醇)、50μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+50μm... 目的探讨白藜芦醇对肾细胞癌ACHN细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法对数生长期ACHN细胞随机分为对照组(100μmol/L培养液)、25μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+25μmol/L白藜芦醇)、50μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+50μmol/L白藜芦醇)、100μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+100μmol/L白藜芦醇)、200μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+200μmol/L白藜芦醇)。培养12、24、48h,采用CCK-8法检测细胞增殖活力;培养24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用荧光探针法检测ACHN细胞氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin,DCF)荧光强度,采用Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphom-2,Bcl-2)、caspase-3蛋白表达。结果对照组及25、50、100、200μmol/L白藜芦醇组培养12h(0.71±0.01、0.63±0.01、0.56±0.03、0.48±0.02、0.39±0.02)、24h(1.19±0.04、1.00±0.02、0.79±0.03、0.63±0.03、0.41±0.06)、48h(1.62±0.02、1.15±0.03、0.79±0.04、0.62±0.04、0.41±0.08)细胞增殖活力吸光度值依次降低(P<0.05),培养24h细胞凋亡率[(7.73±0.87)%、(12.64±1.13)%、(29.43±1.25)%、(37.73±1.24)%、(48.56±1.78)%]依次升高(P<0.05);培养24h,对照组及25、50、100、200μmol/L白藜芦醇组细胞DCF荧光强度[(5.40±0.70)、(14.97±1.33)、(17.03±0.80)、(19.67±1.16)、(31.50±2.28)u/(s·mg)]及caspase-3相对表达量(0.24±0.02、0.58±0.02、1.19±0.05、1.41±0.05、1.74±0.06)依次升高,Bcl-2相对表达量(1.67±0.10、1.11±0.16、0.94±0.11、0.67±0.09、0.53±0.02)依次降低(P<0.05)。结论白藜芦醇可诱导肾细胞癌ACHN细胞内活性氧累积,上调caspase-3表达,下调Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 肾细胞癌 白藜芦醇 achn细胞 增殖 凋亡

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