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木薯MeABF1 基因的克隆及功能
1
作者
孙志元
赵惠萍
韦运谢
《福建农业学报》
北大核心
2025年第11期1110-1116,共7页
【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)转录因子ABF1并诱导其原核表达和分析抗病功能,为进一步研究ABF1抗病功能提供参考依据。【方法】从木薯‘华南124’(‘South China124’,‘SC124’)中扩增MeABF1基因编码区序列(coding seque...
【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)转录因子ABF1并诱导其原核表达和分析抗病功能,为进一步研究ABF1抗病功能提供参考依据。【方法】从木薯‘华南124’(‘South China124’,‘SC124’)中扩增MeABF1基因编码区序列(coding sequence,CDS),并构建MeABF1-pET32a融合表达载体,转化至DE3感受态细胞中进行蛋白诱导,通过SDS-PAGE以及Western blotting确定MeABF1蛋白的表达情况,使用MeABF1蛋白喷施木薯叶片后测定木薯叶片活性氧(reactive oxygen species,ROS)爆发、病程相关(pathogenesis-related,PR)基因表达及对地毯草黄单胞菌木薯萎蔫致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.manihotis,Xam)的抗病性测定。【结果】MeABF1基因CDS序列长度为1491 bp。在37℃、1 mmol·L^(−1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)条件下诱导并取样,IPTG诱导1 h后即能检测到MeABF1-Myc融合蛋白,其条带强度随诱导时间延长而递增。ABF1蛋白能够诱导木薯叶片ROS爆发且最高爆发值是对照组的3倍,蛋白处理后PR基因的表达量提高,MePR1和MePR2表达水平分别是对照组的3.5倍和1.75倍,蛋白连续2 d喷施后侵染Xam测定木薯叶片6 dpi(days post inoculation)细菌数、病斑面积以及木薯叶片表型与对照组相比均表现出抗病特征。【结论】在37℃下,1 mmol·L^(−1) IPTG能诱导MeABF1-pET32a融合蛋白正确表达,MeABF1蛋白可通过诱导ROS爆发和PR基因的表达,抑制细菌性枯萎病菌在木薯中的侵染。
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关键词
木薯
abf1
基因
蛋白
免疫反应
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职称材料
拟南芥ABF1及ABI5在不同处理下的表达模式分析
被引量：
1
2
作者
陈欣
薛才
朱培源
《中国食品工业》
2024年第14期124-126,共3页
本文以7d龄哥伦比亚野生型拟南芥为研究对象,探究在不同NaCl、山梨醇、ABA、蔗糖处理下ABF1及ABI5的表达模式。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ABF1及ABI5的mRNA含量随NaCl浓度的增高逐渐降低,100mM及150mM NaCl处理下,ABF1的mRNA含量降...
本文以7d龄哥伦比亚野生型拟南芥为研究对象,探究在不同NaCl、山梨醇、ABA、蔗糖处理下ABF1及ABI5的表达模式。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ABF1及ABI5的mRNA含量随NaCl浓度的增高逐渐降低,100mM及150mM NaCl处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组的0.11和0.08倍,而ABI5的mRNA含量分别降至对照组的0.01和0.02倍;50mM的山梨醇处理下,ABF1及ABI5的mRNA含量增至对照组的3.7和1.32倍,100mM和150mM的山梨醇处理下,ABF1的mRNA含量分别增至3.32和1.72倍,ABI5的mRNA含量分别增至2.87和1.42倍;在50mM的蔗糖处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组的0.91倍,此时ABI5的mRNA含量增至1.32倍,100mM和150mM的蔗糖处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组0.57和0.15倍,ABI5的mRNA含量降至0.67和0.38倍。在10、30及50μM ABA处理下,ABF1的mRNA含量分别增至对照组的5.32、4.14及4.6倍,ABI5的mRNA含量分别增至8.53、7.2及11.5倍;在4℃和16℃处理下,ABF1的mRNA含量为对照组的0.86和3.02倍,而ABI5的mRNA含量为2.92和1.75倍。这些结果均表明ABF1及ABI5响应高盐、低温和ABA等过程。
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关键词
abf1
ABI5
拟南芥
非生物胁迫
基因表达
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职称材料
儿童孤独症相关基因NRXN1β启动子功能分析
3
作者
刘静茹
孟莎莎
周卫辉
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期801-810,共10页
Neurexins是神经特异性突触蛋白,Neurexin1β结构的异常与孤独症密切相关。为分析孤独症相关基因NRXN1β最小启动子和调节基因转录的功能元件,本文构建了含NRXN1β基因上游调控区不同区域的荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞后,利用...
Neurexins是神经特异性突触蛋白,Neurexin1β结构的异常与孤独症密切相关。为分析孤独症相关基因NRXN1β最小启动子和调节基因转录的功能元件,本文构建了含NRXN1β基因上游调控区不同区域的荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞后,利用检测双荧光素酶报告基因的转录活性以确定NRXN1β基因最小启动子区,进而筛选出相应的显著增强或抑制报告基因活性的功能区;同时,为鉴定顺式作用元件,利用基因定点突变技术对基因功能区内和临近DNA序列进行连续的碱基突变;最后,采用转录因子预测工具对启动子功能区内的转录调控元件进行分析。结果首次发现NRXN1β最小启动子区位于?88^+156 bp,?88~?73 bp和+156^+149 bp可增强启动子活性,+229^+419 bp可抑制启动子活性,且?84~?63 bp为能够显著性增强启动子活性的顺式作用元件,该区域可能存在DBP(Albumin D-site-binding protein,DBP)和ABF1(Autonomously replicating sequence-binding factor 1,ABF1)两个转录因子结合位点。
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关键词
NRXN1β
启动子
DBP
abf1
转录因子
暂未订购
题名
木薯MeABF1 基因的克隆及功能
1
作者
孙志元
赵惠萍
韦运谢
机构
海南大学热带农林学院/海南省耐盐作物生物技术重点实验室
出处
《福建农业学报》
北大核心
2025年第11期1110-1116,共7页
基金
国家自然科学基金项目(32372563)
海南省教育厅项目(Hnky2024-10)
海南大学协同创新中心科研项目(XTCX2022NYC13)。
文摘
【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)转录因子ABF1并诱导其原核表达和分析抗病功能,为进一步研究ABF1抗病功能提供参考依据。【方法】从木薯‘华南124’(‘South China124’,‘SC124’)中扩增MeABF1基因编码区序列(coding sequence,CDS),并构建MeABF1-pET32a融合表达载体,转化至DE3感受态细胞中进行蛋白诱导,通过SDS-PAGE以及Western blotting确定MeABF1蛋白的表达情况,使用MeABF1蛋白喷施木薯叶片后测定木薯叶片活性氧(reactive oxygen species,ROS)爆发、病程相关(pathogenesis-related,PR)基因表达及对地毯草黄单胞菌木薯萎蔫致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.manihotis,Xam)的抗病性测定。【结果】MeABF1基因CDS序列长度为1491 bp。在37℃、1 mmol·L^(−1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)条件下诱导并取样,IPTG诱导1 h后即能检测到MeABF1-Myc融合蛋白,其条带强度随诱导时间延长而递增。ABF1蛋白能够诱导木薯叶片ROS爆发且最高爆发值是对照组的3倍,蛋白处理后PR基因的表达量提高,MePR1和MePR2表达水平分别是对照组的3.5倍和1.75倍,蛋白连续2 d喷施后侵染Xam测定木薯叶片6 dpi(days post inoculation)细菌数、病斑面积以及木薯叶片表型与对照组相比均表现出抗病特征。【结论】在37℃下,1 mmol·L^(−1) IPTG能诱导MeABF1-pET32a融合蛋白正确表达,MeABF1蛋白可通过诱导ROS爆发和PR基因的表达,抑制细菌性枯萎病菌在木薯中的侵染。
关键词
木薯
abf1
基因
蛋白
免疫反应
Keywords
Cassava
abf1
gene
protein
immunity reaction
分类号
S533 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
拟南芥ABF1及ABI5在不同处理下的表达模式分析
被引量：
1
2
作者
陈欣
薛才
朱培源
机构
兰州理工大学生命科学与工程学院
出处
《中国食品工业》
2024年第14期124-126,共3页
文摘
本文以7d龄哥伦比亚野生型拟南芥为研究对象,探究在不同NaCl、山梨醇、ABA、蔗糖处理下ABF1及ABI5的表达模式。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ABF1及ABI5的mRNA含量随NaCl浓度的增高逐渐降低,100mM及150mM NaCl处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组的0.11和0.08倍,而ABI5的mRNA含量分别降至对照组的0.01和0.02倍;50mM的山梨醇处理下,ABF1及ABI5的mRNA含量增至对照组的3.7和1.32倍,100mM和150mM的山梨醇处理下,ABF1的mRNA含量分别增至3.32和1.72倍,ABI5的mRNA含量分别增至2.87和1.42倍;在50mM的蔗糖处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组的0.91倍,此时ABI5的mRNA含量增至1.32倍,100mM和150mM的蔗糖处理下,ABF1的mRNA含量降至对照组0.57和0.15倍,ABI5的mRNA含量降至0.67和0.38倍。在10、30及50μM ABA处理下,ABF1的mRNA含量分别增至对照组的5.32、4.14及4.6倍,ABI5的mRNA含量分别增至8.53、7.2及11.5倍;在4℃和16℃处理下,ABF1的mRNA含量为对照组的0.86和3.02倍,而ABI5的mRNA含量为2.92和1.75倍。这些结果均表明ABF1及ABI5响应高盐、低温和ABA等过程。
关键词
abf1
ABI5
拟南芥
非生物胁迫
基因表达
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
儿童孤独症相关基因NRXN1β启动子功能分析
3
作者
刘静茹
孟莎莎
周卫辉
机构
重庆医科大学附属儿童医院
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期801-810,共10页
基金
国家重点基础研究发展计划项目(973计划)(编号:2012CB517903)资助
文摘
Neurexins是神经特异性突触蛋白,Neurexin1β结构的异常与孤独症密切相关。为分析孤独症相关基因NRXN1β最小启动子和调节基因转录的功能元件,本文构建了含NRXN1β基因上游调控区不同区域的荧光素酶报告基因质粒,转染HEK293细胞后,利用检测双荧光素酶报告基因的转录活性以确定NRXN1β基因最小启动子区,进而筛选出相应的显著增强或抑制报告基因活性的功能区;同时,为鉴定顺式作用元件,利用基因定点突变技术对基因功能区内和临近DNA序列进行连续的碱基突变;最后,采用转录因子预测工具对启动子功能区内的转录调控元件进行分析。结果首次发现NRXN1β最小启动子区位于?88^+156 bp,?88~?73 bp和+156^+149 bp可增强启动子活性,+229^+419 bp可抑制启动子活性,且?84~?63 bp为能够显著性增强启动子活性的顺式作用元件,该区域可能存在DBP(Albumin D-site-binding protein,DBP)和ABF1(Autonomously replicating sequence-binding factor 1,ABF1)两个转录因子结合位点。
关键词
NRXN1β
启动子
DBP
abf1
转录因子
Keywords
NRXN1β
promoter
ABF 1
DBP
transcription factor
分类号
R749.94 [医药卫生—神经病学与精神病学]
暂未订购
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
木薯MeABF1 基因的克隆及功能
孙志元
赵惠萍
韦运谢
《福建农业学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
拟南芥ABF1及ABI5在不同处理下的表达模式分析
陈欣
薛才
朱培源
《中国食品工业》
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
儿童孤独症相关基因NRXN1β启动子功能分析
刘静茹
孟莎莎
周卫辉
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
暂未订购
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