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小尾寒羊AA-NAT基因克隆及其与繁殖性能的关系
1
作者 孙晓笛 储明星 +4 位作者 王永娟 黄冬维 王金玉 狄冉 方丽 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期739-745,共7页
根据牛AA-NAT基因DNA序列和绵羊该基因mRNA序列,设计5对引物(P1～P5),每对引物分别扩增随机选取的8只小尾寒羊,PCR产物克隆测序,序列拼接获得小尾寒羊AA-NAT的DNA序列,总长为2 138 bp。序列比对发现P3的扩增产物中存在C617T的沉默突变... 根据牛AA-NAT基因DNA序列和绵羊该基因mRNA序列,设计5对引物(P1～P5),每对引物分别扩增随机选取的8只小尾寒羊,PCR产物克隆测序,序列拼接获得小尾寒羊AA-NAT的DNA序列,总长为2 138 bp。序列比对发现P3的扩增产物中存在C617T的沉默突变。根据获得的小尾寒羊AA-NAT基因的DNA序列设计引物P6,利用PCR-RFLP技术分别在常年发情绵羊品种(小尾寒羊、白杜泊)和季节性发情绵羊品种(滩羊、萨福克和特克塞尔)中检测该位点的多态性。结果发现引物P6扩增片段在滩羊、萨福克和特克塞尔中均检测到CC、CT和TT 3种基因型,在小尾寒羊和白杜泊中只检测到CC和CT 2种基因型;该突变位点不同基因型分布在常年发情绵羊品种和季节性发情绵羊品种间存在显著差异(P<0.05);小尾寒羊CC和CT基因型频率分别为0.24和0.76,CC型母羊平均产羔数比CT型多0.48只(P<0.01)。本研究结果初步表明,AA-NAT基因617位点与绵羊的常年发情可能存在一定关联,C等位基因可能是提高绵羊产羔数的一个潜在有效的标记。 展开更多
关键词 小尾寒羊 aa-nat基因 常年发情 产羔数 PCR-RFLP
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绵羊AA-NAT基因mRNA表达与常年发情相关性研究 被引量：5
2
作者 卢璐璐 孙晓笛 +6 位作者 储明星 王永娟 黄冬维 王金玉 狄冉 潘章源 刘秋月 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期542-548,共7页
为了探讨AA-NAT基因表达与绵羊常年发情之间的关联性,本研究以常年发情小尾寒羊和季节性发情滩羊各9只为研究对象,利用real-time PCR技术检测AA-NAT基因在这2种绵羊不同发情阶段下丘脑、垂体、松果体、卵巢、子宫体和肾上腺6种组织中的m... 为了探讨AA-NAT基因表达与绵羊常年发情之间的关联性,本研究以常年发情小尾寒羊和季节性发情滩羊各9只为研究对象,利用real-time PCR技术检测AA-NAT基因在这2种绵羊不同发情阶段下丘脑、垂体、松果体、卵巢、子宫体和肾上腺6种组织中的mRNA表达情况。结果显示,AA-NAT基因在不同情期的两个绵羊品种的6个组织中表达有明显差异,在发情期绵羊的卵巢、子宫体、松果体中高水平表达。春秋季发情期小尾寒羊与秋季发情期滩羊相比,其卵巢和子宫体中AA-NAT基因表达量极显著偏低(P<0.01),而松果体中表达量极显著偏高(P<0.01)。本研究结果初步表明,卵巢、子宫体和松果体中AA-NAT基因表达上调可能与小尾寒羊常年发情相关。 展开更多
关键词 绵羊 常年发情 aa-nat基因 REAL-TIME PCR 基因表达
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藏黄牛褪黑激素合成酶AA-NAT基因cDNA克隆及序列的比较分析 被引量：3
3
作者 陈朝坚 雷申 +2 位作者 文勇立 张凯 马力 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第2期220-225,共6页
哺乳动物季节性繁殖主要受褪黑激素调控,而褪黑激素的分泌受其2个合成酶HIOMT和AA-NAT调控.分布于青藏高原的藏黄牛和牦牛是典型的季节性繁殖动物,普通黄牛繁殖则季节性不明显.比较分析它们三者的AA-NAT序列,从而进一步研究它们繁殖的... 哺乳动物季节性繁殖主要受褪黑激素调控,而褪黑激素的分泌受其2个合成酶HIOMT和AA-NAT调控.分布于青藏高原的藏黄牛和牦牛是典型的季节性繁殖动物,普通黄牛繁殖则季节性不明显.比较分析它们三者的AA-NAT序列,从而进一步研究它们繁殖的季节性.采用RT-PCR技术,从2个公藏黄牛个体的松果体组织总RNA中分别克隆到AA-NAT基因的表达序列,并对其进行生物信息学分析.结果表明:藏黄牛AA-NAT基因的表达序列全长为624bp,开放阅读框(ORF)为621 bp,编码207个氨基酸,预测其表达蛋白分子量为52.3005kDa,等电点为5.06,不具有信号肽,有两个具有较高可能性的跨膜区,存在4个O连接糖基化位点,而不存在N连接糖基化位点,有3个潜在的Ser和3个Thr磷酸化位点.藏黄牛该基因表达序列核苷酸及编码氨基酸与亲缘关系较远的牦牛一致,而与亲缘关系较近的普通黄牛却有一定差异,这可能与繁殖的季节性有关. 展开更多
关键词 藏黄牛 RT-PCR aa-nat 克隆 序列分析
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乐至黑山羊褪黑素合成酶AA-NAT基因cDNA克隆及序列分析 被引量：2
4
作者 杨大前 字向东 +4 位作者 王永 杨春先 邓一科 卢建远 付锡三 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第4期575-581,共7页
研究旨在分析乐至黑山羊的AA-NAT基因与其它属种的差异.根据GenBank中绵羊AA-NAT基因序列(U29663.1)设计一对引物,以乐至黑山羊松果体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对乐至黑山羊AA-NAT cDNA进行克隆测序和序列分析.研究表明:乐至黑山羊AA-... 研究旨在分析乐至黑山羊的AA-NAT基因与其它属种的差异.根据GenBank中绵羊AA-NAT基因序列(U29663.1)设计一对引物,以乐至黑山羊松果体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对乐至黑山羊AA-NAT cDNA进行克隆测序和序列分析.研究表明:乐至黑山羊AA-NAT基因cDNA编码区全长为624bp,编码207个氨基酸.乐至黑山羊AA-NAT基因与绵羊的同源性最高(97.6%),其次是普通牛(95.51%)、人(83.33%)、黑猩猩(83.17%)、狗(81.41%)、猕猴(81.25%)和家鼠(80.77%).利用NJ法以该序列和推导的氨基酸序列构建的物种间分子系统进化树分析,结果表明乐至黑山羊先与绵羊聚为一类,再与普通牛聚为一类,而后与狗聚为一类,最后与鼠、人和猴聚为一类. 展开更多
关键词 乐至黑山羊 aa-nat 分子克隆 序列分析
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五羟色胺-N-乙酰转移酶基因真核表达载体的构建表达及活性检测 被引量：1
5
作者 廖华 曹永英 +2 位作者 徐达传 邱小忠 余磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期656-659,共4页
目的构建pTARGETTM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞,检测目的基因的表达并初步探讨AANAT转基因细胞的生物活性。方法提取大鼠松果体组织mRNA,RT-PCR技术扩增五羟色胺-N-乙酰转移酶基因(AANAT)cDNA,酶切连接pTARGETTM载体,脂质体法导... 目的构建pTARGETTM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞,检测目的基因的表达并初步探讨AANAT转基因细胞的生物活性。方法提取大鼠松果体组织mRNA,RT-PCR技术扩增五羟色胺-N-乙酰转移酶基因(AANAT)cDNA,酶切连接pTARGETTM载体,脂质体法导入L6成肌细胞。倒置显微镜观察转化细胞体外存活、RT-PCR及Western blotting技术检测pTARGETTM-AANAT的基因表达产物及转化细胞的功能表达。结果酶切分析、DNA测序及凝胶电泳检测结果证实,pTARGETTM-AANAT真核表达载体构建成功。RT-PCR及Western blotting检测表明,转化后的L6细胞表达AANAT mRNA,细胞具备AANAT蛋白的表达能力。结论成功构建pTARGETTM-AANAT的真核表达载体,转化的L6细胞株能表达AANAT蛋白活性。 展开更多
关键词 五羟色胺-N-乙酰转移酶 L6细胞 pTARGET^TM载体 RT-PCR
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