目的:探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法:利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况,并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证,再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象,通过CRISP...目的:探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法:利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况,并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证,再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象,通过CRISPR-Cas9技术构建ANXA5敲除株,通过CCK-8及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测敲除ANXA5对B16F10铁死亡效应的影响,进一步通过RNA-seq寻找ANXA5调节铁死亡可能的靶分子并验证,最后在不同的黑色素瘤细胞中检测内源性ANXA5表达水平,并确认ANXA5对铁死亡敏感性的调节作用。结果:ANXA5在黑色素瘤组织中异常高表达,敲除或敲低ANXA5能促进黑色素瘤细胞对铁死亡的敏感性。酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)作为铁死亡关键调节分子,与ANXA5表达呈负相关性,过表达ANXA5能降低ACSL4水平,表现出对铁死亡的抵抗性。结论:在黑色素瘤细胞中,敲低ANXA5能够上调ACSL4水平,增强黑色瘤细胞对铁死亡的敏感性,提示ANXA5有望成为黑色素瘤铁死亡治疗的潜在靶点。展开更多
目的建立快速检测CYP3A5基因型的新方法及其临床应用。方法针对CYP3A5不同基因型特异性位点设计引物,采用等位基因特异性PCR方法(Allele specific PCR,AS-PCR)进行扩增,通过琼脂糖凝胶电泳分辨不同基因型,并检测临床标本100例,与一代测...目的建立快速检测CYP3A5基因型的新方法及其临床应用。方法针对CYP3A5不同基因型特异性位点设计引物,采用等位基因特异性PCR方法(Allele specific PCR,AS-PCR)进行扩增,通过琼脂糖凝胶电泳分辨不同基因型,并检测临床标本100例,与一代测序法比对两个方法的一致率。结果新方法检测100例临床标本中,CYP3A5基因型*1/*1型15例;*1/*3型26例;*3/*3型59例,结果与一代测序法一致,一致率100%。结论通过AS-PCR检测CYP3A5基因型,操作简便,结果易于判断,可应用于临床。展开更多
目的:急性脑梗死病情进展迅速,常导致神经不可逆损伤,预后较差,需寻找相关预后标志物以了解预后情况。本研究旨在分析细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)3A5基因多态性联合血清微RNA-543(microRNA-543,miR-543)预测急性脑梗死患者预后...目的:急性脑梗死病情进展迅速,常导致神经不可逆损伤,预后较差,需寻找相关预后标志物以了解预后情况。本研究旨在分析细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)3A5基因多态性联合血清微RNA-543(microRNA-543,miR-543)预测急性脑梗死患者预后不良的价值。方法:选取2021年5月至2024年1月在郑州市第七人民医院诊断为急性脑梗死的176例患者作为研究对象,依据患者出院90 d后的门诊改良Rankin量表评分结果,将评分≤2的患者纳入预后良好组(n=92),评分>2的纳入预后不良组(n=84)。采用实时荧光定量PCR法检测治疗前血清miR-543水平,采用PCR法检测治疗前CYP3A5基因型,采用多因素Logistic回归分析影响急性脑梗死患者预后不良的因素,采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析CYP3A5基因rs776746位点GG基因型联合血清miR-543水平对急性脑梗死患者预后不良的预测价值。结果:CYP3A5基因rs776746位点上检出AA型、GA型、GG型3种基因型。预后不良组发病至溶栓时间长于预后良好组,血清miR-543水平、携带CYP3A5基因rs776746位点GG基因型及G等位基因、入院时美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分≥15和高血压患者比例均显著高于预后良好组(均P<0.001)。携带CYP3A5基因rs776746位点GG基因型和高miR-543水平是急性脑梗死患者预后不良的危险因素(均P<0.05)。CYP3A5基因rs776746位点GG基因型和血清miR-543水平单独及联合预测急性脑梗死患者预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.702、0.833、0.932,敏感度分别为52.38%、75.68%、92.86%,特异度分别为88.04%、78.33%、93.48%。结论:携带CYP3A5基因rs776746位点GG基因型和高miR-543水平均与急性脑梗死患者预后不良有关,二者联合可显著提高预测效能。展开更多
基金National Natural Science Foundation of China(No.81600249,82470055)Natural Science Foundation of Hunan Province(No.2022JJ30823)+1 种基金General Funding Project of Hunan Provincial Health Commission(No.202103010961,W20243119)Changsha Natural Science Foundation,China(No.kq2202392,kq2502197)。
文摘目的:探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法:利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况,并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证,再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象,通过CRISPR-Cas9技术构建ANXA5敲除株,通过CCK-8及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测敲除ANXA5对B16F10铁死亡效应的影响,进一步通过RNA-seq寻找ANXA5调节铁死亡可能的靶分子并验证,最后在不同的黑色素瘤细胞中检测内源性ANXA5表达水平,并确认ANXA5对铁死亡敏感性的调节作用。结果:ANXA5在黑色素瘤组织中异常高表达,敲除或敲低ANXA5能促进黑色素瘤细胞对铁死亡的敏感性。酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)作为铁死亡关键调节分子,与ANXA5表达呈负相关性,过表达ANXA5能降低ACSL4水平,表现出对铁死亡的抵抗性。结论:在黑色素瘤细胞中,敲低ANXA5能够上调ACSL4水平,增强黑色瘤细胞对铁死亡的敏感性,提示ANXA5有望成为黑色素瘤铁死亡治疗的潜在靶点。
文摘目的建立快速检测CYP3A5基因型的新方法及其临床应用。方法针对CYP3A5不同基因型特异性位点设计引物,采用等位基因特异性PCR方法(Allele specific PCR,AS-PCR)进行扩增,通过琼脂糖凝胶电泳分辨不同基因型,并检测临床标本100例,与一代测序法比对两个方法的一致率。结果新方法检测100例临床标本中,CYP3A5基因型*1/*1型15例;*1/*3型26例;*3/*3型59例,结果与一代测序法一致,一致率100%。结论通过AS-PCR检测CYP3A5基因型,操作简便,结果易于判断,可应用于临床。
文摘目的:急性脑梗死病情进展迅速,常导致神经不可逆损伤,预后较差,需寻找相关预后标志物以了解预后情况。本研究旨在分析细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)3A5基因多态性联合血清微RNA-543(microRNA-543,miR-543)预测急性脑梗死患者预后不良的价值。方法:选取2021年5月至2024年1月在郑州市第七人民医院诊断为急性脑梗死的176例患者作为研究对象,依据患者出院90 d后的门诊改良Rankin量表评分结果,将评分≤2的患者纳入预后良好组(n=92),评分>2的纳入预后不良组(n=84)。采用实时荧光定量PCR法检测治疗前血清miR-543水平,采用PCR法检测治疗前CYP3A5基因型,采用多因素Logistic回归分析影响急性脑梗死患者预后不良的因素,采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析CYP3A5基因rs776746位点GG基因型联合血清miR-543水平对急性脑梗死患者预后不良的预测价值。结果:CYP3A5基因rs776746位点上检出AA型、GA型、GG型3种基因型。预后不良组发病至溶栓时间长于预后良好组,血清miR-543水平、携带CYP3A5基因rs776746位点GG基因型及G等位基因、入院时美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分≥15和高血压患者比例均显著高于预后良好组(均P<0.001)。携带CYP3A5基因rs776746位点GG基因型和高miR-543水平是急性脑梗死患者预后不良的危险因素(均P<0.05)。CYP3A5基因rs776746位点GG基因型和血清miR-543水平单独及联合预测急性脑梗死患者预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.702、0.833、0.932,敏感度分别为52.38%、75.68%、92.86%,特异度分别为88.04%、78.33%、93.48%。结论:携带CYP3A5基因rs776746位点GG基因型和高miR-543水平均与急性脑梗死患者预后不良有关,二者联合可显著提高预测效能。
