目的探究溶质载体家族7成员5(solute carrier family 7 member 5,SLC7A5)促进转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞活化增殖的作用。方法人肺成纤维细胞用TGF-β1孵育24h,使用PCR-Array方法...目的探究溶质载体家族7成员5(solute carrier family 7 member 5,SLC7A5)促进转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞活化增殖的作用。方法人肺成纤维细胞用TGF-β1孵育24h,使用PCR-Array方法筛选靶基因。使用沉默慢病毒sh-SLC和重表达慢病毒r-SLC转染成纤维细胞,利用Western Blot实验和qRT-PCR实验观察目标基因SLC7A5和成纤维细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白(fibroblast specific protein,FSP)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COL-1)合成。qRT-PCR实验检测mTOR信号通路分子。CCK-8方法检测各组成纤维细胞增殖速度。流式细胞术检测各组细胞周期变化情况。结果与对照组PBS的细胞相比,TGF-β1实验组的HLFs中SLC7A5高表达,沉默SLC7A5基因降低SLC7A5、α-SMA、FSP和COL-1表达量以及mTOR和4EBP1的转录水平,抑制成纤维细胞增殖速度,G1期比例增加,S期降低,而回复实验表明重新表达SLC7A5基因的r-SLC能够逆转以上现象。结论SLC7A5可能通过mTOR信号通路促进TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化增殖,SLC7A5有望成为肺纤维化疾病中抑制成纤维细胞活化增殖的靶点。展开更多
目的:探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法:利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况,并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证,再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象,通过CRISP...目的:探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法:利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况,并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证,再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象,通过CRISPR-Cas9技术构建ANXA5敲除株,通过CCK-8及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测敲除ANXA5对B16F10铁死亡效应的影响,进一步通过RNA-seq寻找ANXA5调节铁死亡可能的靶分子并验证,最后在不同的黑色素瘤细胞中检测内源性ANXA5表达水平,并确认ANXA5对铁死亡敏感性的调节作用。结果:ANXA5在黑色素瘤组织中异常高表达,敲除或敲低ANXA5能促进黑色素瘤细胞对铁死亡的敏感性。酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)作为铁死亡关键调节分子,与ANXA5表达呈负相关性,过表达ANXA5能降低ACSL4水平,表现出对铁死亡的抵抗性。结论:在黑色素瘤细胞中,敲低ANXA5能够上调ACSL4水平,增强黑色瘤细胞对铁死亡的敏感性,提示ANXA5有望成为黑色素瘤铁死亡治疗的潜在靶点。展开更多
文摘目的探究溶质载体家族7成员5(solute carrier family 7 member 5,SLC7A5)促进转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞活化增殖的作用。方法人肺成纤维细胞用TGF-β1孵育24h,使用PCR-Array方法筛选靶基因。使用沉默慢病毒sh-SLC和重表达慢病毒r-SLC转染成纤维细胞,利用Western Blot实验和qRT-PCR实验观察目标基因SLC7A5和成纤维细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白(fibroblast specific protein,FSP)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COL-1)合成。qRT-PCR实验检测mTOR信号通路分子。CCK-8方法检测各组成纤维细胞增殖速度。流式细胞术检测各组细胞周期变化情况。结果与对照组PBS的细胞相比,TGF-β1实验组的HLFs中SLC7A5高表达,沉默SLC7A5基因降低SLC7A5、α-SMA、FSP和COL-1表达量以及mTOR和4EBP1的转录水平,抑制成纤维细胞增殖速度,G1期比例增加,S期降低,而回复实验表明重新表达SLC7A5基因的r-SLC能够逆转以上现象。结论SLC7A5可能通过mTOR信号通路促进TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化增殖,SLC7A5有望成为肺纤维化疾病中抑制成纤维细胞活化增殖的靶点。
基金National Natural Science Foundation of China(No.81600249,82470055)Natural Science Foundation of Hunan Province(No.2022JJ30823)+1 种基金General Funding Project of Hunan Provincial Health Commission(No.202103010961,W20243119)Changsha Natural Science Foundation,China(No.kq2202392,kq2502197)。
文摘目的:探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法:利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况,并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证,再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象,通过CRISPR-Cas9技术构建ANXA5敲除株,通过CCK-8及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测敲除ANXA5对B16F10铁死亡效应的影响,进一步通过RNA-seq寻找ANXA5调节铁死亡可能的靶分子并验证,最后在不同的黑色素瘤细胞中检测内源性ANXA5表达水平,并确认ANXA5对铁死亡敏感性的调节作用。结果:ANXA5在黑色素瘤组织中异常高表达,敲除或敲低ANXA5能促进黑色素瘤细胞对铁死亡的敏感性。酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)作为铁死亡关键调节分子,与ANXA5表达呈负相关性,过表达ANXA5能降低ACSL4水平,表现出对铁死亡的抵抗性。结论:在黑色素瘤细胞中,敲低ANXA5能够上调ACSL4水平,增强黑色瘤细胞对铁死亡的敏感性,提示ANXA5有望成为黑色素瘤铁死亡治疗的潜在靶点。
