目的研究布地奈德(BUD)对S100钙结合蛋白A4(S100A4)诱导的肥大细胞活化、炎性因子释放及受体表达的影响。方法8~10周龄野生型(WT)的C57BL/6健康雄性小鼠2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMCs)培养,将5 mL PBS注射至小鼠腹...目的研究布地奈德(BUD)对S100钙结合蛋白A4(S100A4)诱导的肥大细胞活化、炎性因子释放及受体表达的影响。方法8~10周龄野生型(WT)的C57BL/6健康雄性小鼠2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMCs)培养,将5 mL PBS注射至小鼠腹腔,取腹腔灌洗液以获取腹膜来源的肥大细胞(PMCs);采用S100A4蛋白与BUD处理小鼠BMMCs和PMCs,实验分为PBS组、S100A4组、BUD组及S100A4+BUD组;β-己糖胺酶(β-hex)释放实验检测细胞脱颗粒指标β-hex、ELISA测定细胞活化介质类胰蛋白酶、糜蛋白酶及白三烯B4的释放,流式细胞术编码微球芯片技术(CBA)法检测炎性因子(IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α)分泌水平以及Toll样受体4(TLR4)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。结果在BMMCs与PMCs中,与PBS组相比,S100A4组培养上清中β-hex、类胰蛋白酶、白三烯B4及相关炎性因子IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α的释放增加,细胞上TLR4和RAGE的表达上调(P<0.05);与S100A4组相比,S100A4+BUD组肥大细胞活化及炎性因子分泌明显被抑制,同时TLR4的表达下调(P<0.05),而RAGE的表达无显著变化(P>0.05)。结论BUD能够抑制S100A4介导的肥大细胞活化及炎性因子释放,并下调TLR4的表达,但不影响RAGE的表达,BUD可能通过TLR-4受体发挥其功能,为BUD在过敏性炎症中的应用提供新的理论依据。展开更多
目的:探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核-巨噬细胞THP-1后,S100钙结合蛋白A4(S100 calcium-binding protein A4,S100A4)通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激...目的:探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核-巨噬细胞THP-1后,S100钙结合蛋白A4(S100 calcium-binding protein A4,S100A4)通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用。方法:采用S100A4小干扰RNA(S100A4 small interfering RNA,si-S100A4)转染或PI3K抑制剂LY294002预处理THP-1巨噬细胞,并经BCG感染,设置不同处理组和对照组,通过Western blot方法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白和自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)、自噬相关蛋白7(autophagy-related protein 7,Atg7)和beclin-1]的表达,mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒方法检测自噬流,透射电子显微镜观察细胞中自噬体和自噬溶酶体数量变化。结果:与未感染组相比,BCG感染组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05)。与BCG感染组相比,si-S100A4+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著升高(P<0.05),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著降低(P<0.01);LY294003+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01)。与si-S100A4+BCG组相比,si-S100A4+LY294002+BCG组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.01),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01),胞内菌载量显著减少(P<0.01)。结论:干扰S100A4经由PI3K/AKT/mTOR信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬具有抑制作用。展开更多
利托那韦(ritonavir,RTV)作为抗病毒药物广泛应用于临床,但其肝毒性机制尚未完全阐明。本研究旨在探讨孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)激活促进RTV肝毒性的分子机制。本实验获得郑州大学生命科学伦理审查委员会批准(批准号:ZZUIRB20...利托那韦(ritonavir,RTV)作为抗病毒药物广泛应用于临床,但其肝毒性机制尚未完全阐明。本研究旨在探讨孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)激活促进RTV肝毒性的分子机制。本实验获得郑州大学生命科学伦理审查委员会批准(批准号:ZZUIRB2022-142)。构建Pxr基因敲除小鼠,给予PXR激动剂和RTV处理,检测肝功能指标、代谢酶、内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激和细胞凋亡相关基因的表达及RTV主要活性代谢产物,并在细胞水平进行验证。结果显示,PXR激活加剧RTV所致小鼠肝损伤,伴随相关代谢酶上调、RTV活性代谢产物积累、ER应激、细胞死亡及组织损伤相关分子表达上调;在HepG2细胞中,过表达PXR联合利福平使RTV肝细胞毒性增加,而敲低细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYP) 3A4后毒性得以逆转。机制上,PXR激活通过上调CYP3A4加速RTV代谢为毒性产物,后者触发ER应激,促进肝细胞毒性。本研究揭示了PXR-CYP3A4轴通过触发ER应激在RTV肝毒性中的核心作用,为靶向调控PXR以减轻药物性肝损伤提供新策略。展开更多
文摘目的研究布地奈德(BUD)对S100钙结合蛋白A4(S100A4)诱导的肥大细胞活化、炎性因子释放及受体表达的影响。方法8~10周龄野生型(WT)的C57BL/6健康雄性小鼠2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMCs)培养,将5 mL PBS注射至小鼠腹腔,取腹腔灌洗液以获取腹膜来源的肥大细胞(PMCs);采用S100A4蛋白与BUD处理小鼠BMMCs和PMCs,实验分为PBS组、S100A4组、BUD组及S100A4+BUD组;β-己糖胺酶(β-hex)释放实验检测细胞脱颗粒指标β-hex、ELISA测定细胞活化介质类胰蛋白酶、糜蛋白酶及白三烯B4的释放,流式细胞术编码微球芯片技术(CBA)法检测炎性因子(IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α)分泌水平以及Toll样受体4(TLR4)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。结果在BMMCs与PMCs中,与PBS组相比,S100A4组培养上清中β-hex、类胰蛋白酶、白三烯B4及相关炎性因子IL-5、IL-6、IL-13和TNF-α的释放增加,细胞上TLR4和RAGE的表达上调(P<0.05);与S100A4组相比,S100A4+BUD组肥大细胞活化及炎性因子分泌明显被抑制,同时TLR4的表达下调(P<0.05),而RAGE的表达无显著变化(P>0.05)。结论BUD能够抑制S100A4介导的肥大细胞活化及炎性因子释放,并下调TLR4的表达,但不影响RAGE的表达,BUD可能通过TLR-4受体发挥其功能,为BUD在过敏性炎症中的应用提供新的理论依据。
文摘目的:探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核-巨噬细胞THP-1后,S100钙结合蛋白A4(S100 calcium-binding protein A4,S100A4)通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用。方法:采用S100A4小干扰RNA(S100A4 small interfering RNA,si-S100A4)转染或PI3K抑制剂LY294002预处理THP-1巨噬细胞,并经BCG感染,设置不同处理组和对照组,通过Western blot方法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白和自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)、自噬相关蛋白7(autophagy-related protein 7,Atg7)和beclin-1]的表达,mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒方法检测自噬流,透射电子显微镜观察细胞中自噬体和自噬溶酶体数量变化。结果:与未感染组相比,BCG感染组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05)。与BCG感染组相比,si-S100A4+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著升高(P<0.05),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著降低(P<0.01);LY294003+BCG组上述磷酸化蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01)。与si-S100A4+BCG组相比,si-S100A4+LY294002+BCG组中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平显著降低(P<0.01),LC3-II、Atg7和beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.01),自噬体和自噬溶酶体数量显著增多(P<0.01),胞内菌载量显著减少(P<0.01)。结论:干扰S100A4经由PI3K/AKT/mTOR信号通路对BCG诱导的巨噬细胞自噬具有抑制作用。
