目的:通过对C3H10T1/2细胞分化为成熟棕色脂肪细胞的培养、诱导分化及鉴定,深入探讨棕色脂肪细胞的生物学特性,为人类棕色脂肪细胞的相关研究提供实验参考与理论依据。方法:C3H10T1/2细胞经细胞接种、培养及诱导分化处理,利用光学显微...目的:通过对C3H10T1/2细胞分化为成熟棕色脂肪细胞的培养、诱导分化及鉴定,深入探讨棕色脂肪细胞的生物学特性,为人类棕色脂肪细胞的相关研究提供实验参考与理论依据。方法:C3H10T1/2细胞经细胞接种、培养及诱导分化处理,利用光学显微镜观察细胞形态变化,并通过油红O染色、免疫荧光法、线粒体探针法以及线粒体电镜技术对分化细胞进行鉴定分析。结果:未分化的C3H10T1/2细胞形态多样,具有突触伸展特征;分化后的细胞逐渐变为圆形或椭圆形,形成环形脂滴;未分化组细胞形态无明显变化。油红O染色显示,未分化组细胞基本无染色,而分化组中约90%的细胞红染,脂滴分布于细胞核周围,吸光度值显著升高(P<0.05)。分化组解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)、过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)辅激活因子1α(PPARγco-activator-1α,PGC-1α)、PPARγ和转录因子PRDM16的相对荧光强度和蛋白表达量显著高于未分化组(P<0.05),且线粒体活性增强。结论:本研究成功诱导C3H10T1/2细胞分化为成熟棕色脂肪细胞,结合细胞形态观察、关键蛋白表达检测及线粒体功能分析进行综合评估,证实了细胞的有效分化及成熟棕色脂肪细胞的功能特性。展开更多
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种不可治愈的血液系统恶性肿瘤,尽管新型蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂及CD38单抗等药物的应用显著延长了患者的生存时间,但复发耐药仍难以避免。细胞免疫治疗,特别是嵌合抗原受体(chimeric antigen...多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种不可治愈的血液系统恶性肿瘤,尽管新型蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂及CD38单抗等药物的应用显著延长了患者的生存时间,但复发耐药仍难以避免。细胞免疫治疗,特别是嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞疗法的快速发展,极大程度的改变了复发/难治性(relapsed/refractory,R/R)MM患者的治疗现状。FDA目前已批准了2款靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)的CAR-T细胞产品,使其用于既往接受过4线及以上治疗的R/R MM患者。随着临床研究的不断深入,靶向GPRC5D(G protein-coupled receptor C class Group 5 member D,G蛋白偶联受体C类第5组成员D)的CAR-T细胞治疗也显示出其独特的优势。除了应用于难治复发的患者,多项临床试验支持CAR-T在MM中治疗线数的前移。本文就CAR-T细胞治疗在MM中开展的关键性临床研究展开综述,旨在为临床应用提供参考。展开更多
目的探讨肺腺癌细胞恶性T细胞扩增序列1(MCTS1)介导骨髓源性抑制细胞(MDSCs)趋化的作用机制。方法利用生物信息学(http://timer.cistrome.org/#tab-8258-2)分析癌症基因组图谱(TCGA)中肺腺癌组织(n=515)MCTS1的表达水平与MDSCs浸润之间...目的探讨肺腺癌细胞恶性T细胞扩增序列1(MCTS1)介导骨髓源性抑制细胞(MDSCs)趋化的作用机制。方法利用生物信息学(http://timer.cistrome.org/#tab-8258-2)分析癌症基因组图谱(TCGA)中肺腺癌组织(n=515)MCTS1的表达水平与MDSCs浸润之间的相关性;利用IL-6+粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共同诱导人外周血单个核细胞(PBMCs)中MDSCs的生成,流式细胞术检测MDSCs生成比例,CD33磁珠分选MDSCs;收集肺腺癌SPC-A1细胞野生型以及MCTS1敲减和过表达SPC-A1细胞的无血清细胞上清液,利用Transwell小室进行MDSCs的趋化试验并计算趋化指数;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记CD8^(+)T细胞与发生趋化的MDSCs细胞共培养,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的增殖水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定MDSCs相关趋化因子的mRNA水平;流式多因子芯片技术检测细胞上清液中C-X-C基序趋化因子配体1(CXCL1)的含量;Western blot检测janus激酶2(JAK2)的表达水平以及信号转导子和转录激活子1(STAT1)的活化水平。结果肺腺癌组织MCTS1与MDSCs浸润程度呈正相关(Spearmanρ=0.226,P<0.001);与空白对照组比较,IL-6和GM-CSF共同诱导PBMCs后可显著增加MDSCs的比例(4.95±1.03 vs 0.97±0.24,t=6.54,P<0.01);MCTS1过表达的SPC-A1细胞上清液对MDSCs的趋化指数较对照组显著升高(4.88±0.99 vs 2.94±0.27,q=6.29,P<0.01),而经MCTS1敲减的细胞上清液可使MDSCs的趋化指数显著降低(1.50±0.17 vs 2.94±0.27,q=4.69,P<0.05);MCTS1过表达的SPC-A1细胞中CXCL1 mRNA(2.79±0.16 vs 1.00±0.08,q=28.94,P<0.001)和上清液中蛋白质水平(78.20±6.16 vs 37.50±3.31,q=16.83,P<0.001)均显著升高,而敲减MCTS1则可抑制CXCL1 mRNA(0.53±0.03 vs 1.00±0.08,q=7.64,P<0.01)和蛋白质水平(17.33±1.96 vs 37.50±3.31,q=8.34,P<0.01);此外,与对照组比较,MCTS1过表达组JAK2蛋白的表达水平(2.11±0.15 vs 1.00±0.05,q=19.48,P<0.001)和STAT1的活化水平(2.10±0.19 vs 1.00±0.10,q=15.02,P<0.001)显著升高,而MCTS1敲减组JAK2蛋白水平(0.56±0.06 vs 1.00±0.05,q=7.61,P<0.01)和STAT1的活化水平均显著降低(0.46±0.07 vs 1.00±0.05,q=7.45,P<0.01)。结论肺腺癌细胞MCTS1通过JAK2-STAT1信号通路调控CXCL1的表达,并介导MDSCs的趋化。展开更多
文摘目的:通过对C3H10T1/2细胞分化为成熟棕色脂肪细胞的培养、诱导分化及鉴定,深入探讨棕色脂肪细胞的生物学特性,为人类棕色脂肪细胞的相关研究提供实验参考与理论依据。方法:C3H10T1/2细胞经细胞接种、培养及诱导分化处理,利用光学显微镜观察细胞形态变化,并通过油红O染色、免疫荧光法、线粒体探针法以及线粒体电镜技术对分化细胞进行鉴定分析。结果:未分化的C3H10T1/2细胞形态多样,具有突触伸展特征;分化后的细胞逐渐变为圆形或椭圆形,形成环形脂滴;未分化组细胞形态无明显变化。油红O染色显示,未分化组细胞基本无染色,而分化组中约90%的细胞红染,脂滴分布于细胞核周围,吸光度值显著升高(P<0.05)。分化组解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)、过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)辅激活因子1α(PPARγco-activator-1α,PGC-1α)、PPARγ和转录因子PRDM16的相对荧光强度和蛋白表达量显著高于未分化组(P<0.05),且线粒体活性增强。结论:本研究成功诱导C3H10T1/2细胞分化为成熟棕色脂肪细胞,结合细胞形态观察、关键蛋白表达检测及线粒体功能分析进行综合评估,证实了细胞的有效分化及成熟棕色脂肪细胞的功能特性。
文摘多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种不可治愈的血液系统恶性肿瘤,尽管新型蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂及CD38单抗等药物的应用显著延长了患者的生存时间,但复发耐药仍难以避免。细胞免疫治疗,特别是嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞疗法的快速发展,极大程度的改变了复发/难治性(relapsed/refractory,R/R)MM患者的治疗现状。FDA目前已批准了2款靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)的CAR-T细胞产品,使其用于既往接受过4线及以上治疗的R/R MM患者。随着临床研究的不断深入,靶向GPRC5D(G protein-coupled receptor C class Group 5 member D,G蛋白偶联受体C类第5组成员D)的CAR-T细胞治疗也显示出其独特的优势。除了应用于难治复发的患者,多项临床试验支持CAR-T在MM中治疗线数的前移。本文就CAR-T细胞治疗在MM中开展的关键性临床研究展开综述,旨在为临床应用提供参考。
文摘目的探讨肺腺癌细胞恶性T细胞扩增序列1(MCTS1)介导骨髓源性抑制细胞(MDSCs)趋化的作用机制。方法利用生物信息学(http://timer.cistrome.org/#tab-8258-2)分析癌症基因组图谱(TCGA)中肺腺癌组织(n=515)MCTS1的表达水平与MDSCs浸润之间的相关性;利用IL-6+粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共同诱导人外周血单个核细胞(PBMCs)中MDSCs的生成,流式细胞术检测MDSCs生成比例,CD33磁珠分选MDSCs;收集肺腺癌SPC-A1细胞野生型以及MCTS1敲减和过表达SPC-A1细胞的无血清细胞上清液,利用Transwell小室进行MDSCs的趋化试验并计算趋化指数;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记CD8^(+)T细胞与发生趋化的MDSCs细胞共培养,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞的增殖水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定MDSCs相关趋化因子的mRNA水平;流式多因子芯片技术检测细胞上清液中C-X-C基序趋化因子配体1(CXCL1)的含量;Western blot检测janus激酶2(JAK2)的表达水平以及信号转导子和转录激活子1(STAT1)的活化水平。结果肺腺癌组织MCTS1与MDSCs浸润程度呈正相关(Spearmanρ=0.226,P<0.001);与空白对照组比较,IL-6和GM-CSF共同诱导PBMCs后可显著增加MDSCs的比例(4.95±1.03 vs 0.97±0.24,t=6.54,P<0.01);MCTS1过表达的SPC-A1细胞上清液对MDSCs的趋化指数较对照组显著升高(4.88±0.99 vs 2.94±0.27,q=6.29,P<0.01),而经MCTS1敲减的细胞上清液可使MDSCs的趋化指数显著降低(1.50±0.17 vs 2.94±0.27,q=4.69,P<0.05);MCTS1过表达的SPC-A1细胞中CXCL1 mRNA(2.79±0.16 vs 1.00±0.08,q=28.94,P<0.001)和上清液中蛋白质水平(78.20±6.16 vs 37.50±3.31,q=16.83,P<0.001)均显著升高,而敲减MCTS1则可抑制CXCL1 mRNA(0.53±0.03 vs 1.00±0.08,q=7.64,P<0.01)和蛋白质水平(17.33±1.96 vs 37.50±3.31,q=8.34,P<0.01);此外,与对照组比较,MCTS1过表达组JAK2蛋白的表达水平(2.11±0.15 vs 1.00±0.05,q=19.48,P<0.001)和STAT1的活化水平(2.10±0.19 vs 1.00±0.10,q=15.02,P<0.001)显著升高,而MCTS1敲减组JAK2蛋白水平(0.56±0.06 vs 1.00±0.05,q=7.61,P<0.01)和STAT1的活化水平均显著降低(0.46±0.07 vs 1.00±0.05,q=7.45,P<0.01)。结论肺腺癌细胞MCTS1通过JAK2-STAT1信号通路调控CXCL1的表达,并介导MDSCs的趋化。
