期刊文献+
共找到11篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
传染性法氏囊病病毒浙江分离株(ZJ2000)基因组A节段全长cDNA的克隆和序列分析 被引量:8
1
作者 李建荣 于涟 +2 位作者 黄耀伟 宋厚辉 郑筱祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期10-14,共5页
以传染性法氏囊病病毒 (IBDV )浙江分离株 (ZJ2 0 0 0 )基因组 RNA为模板 ,采用 L ong- accurate RT- PCR(L A-PCR)一步法扩增并克隆了 IBDV ZJ2 0 0 0株基因组 A节段全长 c DNA。序列测定结果表明 ,克隆的 A节段全长共32 5 9个核苷酸 ... 以传染性法氏囊病病毒 (IBDV )浙江分离株 (ZJ2 0 0 0 )基因组 RNA为模板 ,采用 L ong- accurate RT- PCR(L A-PCR)一步法扩增并克隆了 IBDV ZJ2 0 0 0株基因组 A节段全长 c DNA。序列测定结果表明 ,克隆的 A节段全长共32 5 9个核苷酸 ,包括 5′、3′端的非编码区 (NCRs)和 2个部分重叠的开放阅读框 (ORF1和 ORF2 ) ,与参比的血清 型毒株核苷酸序列的同源性高达 95 .2 %~ 99.2 %。二级结构预测表明 ,在 5′- NCRs和 3′- NCRs存在 1个大型的茎环发夹结构。 ORF2编码 14 5个氨基酸的 VP5 ,与参比毒株的同源性高达 98.6 %~ 10 0 %。 ORF1编码 10 12个氨基酸的VP2 / VP4 / VP3,在氨基酸水平上 VP2、VP3、VP4与参比毒株的同源性分别达 94 .9%~ 98.8%、96 .1%~ 98.5 %、97.1%~ 99.2 %。ZJ2 0 0 0共有 14~ 38个氨基酸的替代 ,其中特有氨基酸 6个 ,变异大多数集中在 VP2高变区 ,突变率达 2 .9%~ 11%。第 2个小亲水区内 2 80位氨基酸由 S替代了 N、2 90位 M替代了 L。这 2个突变可能与 IBDV的抗原性有关。VP2 - VP4剪切位点附近 5 11和 5 4 0位氨基酸的变异可能使 ZJ2 0 0 0株的毒力增强。分子系统进化树分析表明 ,ZJ2 0 0 0与欧洲 Cu- 1株、P2株、CEF94株和中国 Harbin株的关系最近 ,而与欧洲、香港、? 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 基因组a节段全长cDNA 克隆 序列分析 浙江分离株
在线阅读 下载PDF
三株传染性法氏囊病病毒A节段全长基因组结构和编码蛋白的序列分析 被引量:6
2
作者 于涟 黄耀伟 +2 位作者 李建荣 宋坤华 叶伟成 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期573-581,共9页
用长距离RT PCR方法分别克隆了浙江地区传染性法氏囊病病毒 (IBDV)细胞致弱株HZ2、弱毒疫苗株JD1和野毒株ZJ2 0 0 0的A节段基因组全长 ,三毒株的A节段均长 32 59bp ,都包含两个相互重叠的开放阅读框架和两端的 5′ ,3′ 非编码区 (NCR... 用长距离RT PCR方法分别克隆了浙江地区传染性法氏囊病病毒 (IBDV)细胞致弱株HZ2、弱毒疫苗株JD1和野毒株ZJ2 0 0 0的A节段基因组全长 ,三毒株的A节段均长 32 59bp ,都包含两个相互重叠的开放阅读框架和两端的 5′ ,3′ 非编码区 (NCR)。它们在核苷酸和推导的四种病毒蛋白VP2、VP3、VP4、VP5的氨基酸水平上高度同源 ,并具有位于VP2高变区的特征性氨基酸H2 53、N2 79、T2 84、R330 ,这些氨基酸是弱毒株和几个强毒株的标志。野毒株ZJ2 0 0 0的高强毒力可能与VP2高变区和VP2 VP4剪切位点附近的几个突变有关。序列比较进一步支持VP2并非是决定IBDV毒力的唯一因素。不同毒力表型毒株的两端NCR序列高度保守提示NCR可能与IBDV毒力并不直接相关。另外 ,根据VP5在十种不同表型毒株中高度保守 。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒a节段全长 非编码区 VP5 VP2 毒力 基因组结构 编码蛋白
在线阅读 下载PDF
LA-PCR快速克隆传染性法氏囊病病毒基因组A节段全长cDNA方法的建立 被引量:4
3
作者 李建荣 宋厚辉 +4 位作者 于涟 黄耀伟 谢荣辉 周继勇 郑筱祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期438-441,共4页
从浙江省某鸡场暴发疑似传染性法氏囊病 (IBD)的法氏囊病料中分离到 1株致死率高达 70 %的强毒株 (IBDV-ZJ2 0 0 0 )。通过筛选 ,采用效果最理想的蛋白酶 K法从法氏囊中提取病毒基因组 RNA,经 L i Cl纯化后 ,优化各种反应参数和条件 ,... 从浙江省某鸡场暴发疑似传染性法氏囊病 (IBD)的法氏囊病料中分离到 1株致死率高达 70 %的强毒株 (IBDV-ZJ2 0 0 0 )。通过筛选 ,采用效果最理想的蛋白酶 K法从法氏囊中提取病毒基因组 RNA,经 L i Cl纯化后 ,优化各种反应参数和条件 ,建立了 L ong- accurate PCR(L A- PCR)一步直接扩增 IBDV A节段全长 c DNA的方法 ,得到一约 3.2 6 kb的片段。L A- PCR法能快速从病鸡法氏囊和细胞适应毒中扩增 A节段全长 c DNA,为研究各 IBDV毒株 A节段的结构和功能打下了基础。 展开更多
关键词 家畜病毒学 LA-PCR快速克隆 传染性法氏囊病 病毒 基因组 a节段 CDNA
在线阅读 下载PDF
传染性法氏囊病病毒疫苗株B87基因组A节段的克隆和序列分析 被引量:1
4
作者 刘锴 王兴龙 +3 位作者 王学理 任林柱 闫广谋 段小宇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第9期646-651,共6页
目的 获得传染性法氏囊病病毒疫苗株B87 A节段全长cDNA,并对其进行序列分析.方法 使用蛋白酶K、酚/氯仿抽提法提取病毒基因组,用LiCl分级沉淀方法纯化病毒基因组dsRNA,通过RT-PCR一步扩增获得A节段的全长cDNA.将其克隆至pGEM-T载体上,测... 目的 获得传染性法氏囊病病毒疫苗株B87 A节段全长cDNA,并对其进行序列分析.方法 使用蛋白酶K、酚/氯仿抽提法提取病毒基因组,用LiCl分级沉淀方法纯化病毒基因组dsRNA,通过RT-PCR一步扩增获得A节段的全长cDNA.将其克隆至pGEM-T载体上,测序,并用DNAStar软件进行序列分析.结果 测序结果表明,克隆的B87株A节段全长为3 260 bp,与Gt株的同源性最高为99.5%,与其他毒株的核苷酸同源性介于95.2%~99.4%之间,与Ⅱ型毒株OH仅为84.0%.结论 通过对20株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测A片段上7个独特的氨基酸位点可能与毒力相关. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 全长CDNA a节段 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
传染性法氏囊病病毒Gt株基因组A节段的克隆和序列分析 被引量:1
5
作者 张厚双 包晓玮 +4 位作者 王笑梅 高宏雷 付朝阳 彭志伟 鞠玉琳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期130-133,138,共5页
利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV_Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,使其成为弱毒株IBDV_Gt。从细胞适应毒中提取病毒dsRNA ,通过反转录 ,使用Long_accuratePCR(LA_PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV_Gt... 利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV_Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,使其成为弱毒株IBDV_Gt。从细胞适应毒中提取病毒dsRNA ,通过反转录 ,使用Long_accuratePCR(LA_PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV_Gt基因组A节段全长cDNA的方法 ,得到一约 3 30kb的片段。测序结果证明已获得 32 5 5bp的A节段全长 ,对vvIBDV_Gx株和IBDV_Gt株的全部核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析 ,结果表明IBDV_Gt株与国内外数株IBDV弱毒株的同源性在 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 a节段 克隆和序列分析
在线阅读 下载PDF
传染性法氏囊病病毒中国超强毒株Harbin-1基因组A节段全长cDNA的连接 被引量:1
6
作者 黄广明 姜丽琼 +1 位作者 孙安赛 袁克湖 《动物医学进展》 CSCD 2002年第3期51-52,共2页
本研究利用单酶切位点 Sal消化传染性法氏囊病病毒中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段的上段和下段克隆 p GEM-T-P1 2和p GEM-T-P3 4,经过去磷酸化以后 ,再用连接酶将上下段连接起来。酶切和测序鉴定结果表明 ,我们得到了全长的 IBDV基... 本研究利用单酶切位点 Sal消化传染性法氏囊病病毒中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段的上段和下段克隆 p GEM-T-P1 2和p GEM-T-P3 4,经过去磷酸化以后 ,再用连接酶将上下段连接起来。酶切和测序鉴定结果表明 ,我们得到了全长的 IBDV基因组 A节段编码区c DNA克隆。本研究结果为以后的工作奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 中国超强毒株 Harbin-1基因组 a节段 全长CDNA 连接
在线阅读 下载PDF
传染性法氏囊病病毒浙江分离株(TL2004)A节段cDNA的克隆及序列分析
7
作者 郑江涛 魏永伟 +1 位作者 刘岩 于涟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期658-662,667,共6页
用Long accurate RT-PCR(LA-PCR)的方法一步法克隆了IBDV TL2004基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明:克隆的A节段全长3260个核苷酸,包括5′、3′的非编码区(NCRs)和2个重叠的开放阅读框(ORF1和ORF2),与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒... 用Long accurate RT-PCR(LA-PCR)的方法一步法克隆了IBDV TL2004基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明:克隆的A节段全长3260个核苷酸,包括5′、3′的非编码区(NCRs)和2个重叠的开放阅读框(ORF1和ORF2),与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒株核苷酸序列的同源性高达95.2%~99.2%。二级结构分析表明,在5′-NCRs和3′-NCRs各存在一个大型的颈环发夹结构。ORF1编码1 012个氨基酸的VP2-VP3-VP4,在氨基酸水平上VP2、VP3、VP4与参比Ⅰ型毒株的同源性分别达96.7%~99.6%、94.2%~99.2%、96.7%~99.6%。PRF2编码145个氨基酸的VP5,与参比Ⅰ型毒株的同源性高达95.9%~99.3%。TL2004在第2个小亲水区内279位氨基酸由S替代了N、290位M替代了L,这2个突变可能是IBDV抗原漂变的原因。分子系统进化树分析表明,TL2004与欧洲Cu21株和中国JD1、Harbin株的关系较近,而与欧洲、香港、日本的超强毒株和美国的变异株相对较远。 展开更多
关键词 IBDV 基因组a节段全长cDNA 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
传染性法氏囊病病毒DNA疫苗的免疫原性研究 被引量:6
8
作者 于涟 李建荣 +2 位作者 黄耀伟 孟松树 宋厚辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期995-1001,共7页
将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DN... 将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DNA疫苗以 2 0 0 μg的剂量经腿肌和皮下结合途径首免 14日龄SPF鸡 ,2 8日龄以相同的剂量二免 ,二免后 14d攻击IBDV标准强毒BC6 / 85株。结果表明 ,含A节段或多聚蛋白基因的表达载体均能诱导较高水平的中和抗体并能提供对强毒的免疫保护 ,多聚蛋白基因构建成的DNA疫苗与弱毒苗B87的免疫效果相当 ;编码VP2基因的DNA疫苗仅能诱导很低水平的中和抗体 ,几乎不能提供免疫保护 ;以 pCI为表达载体的免疫效果优于pcDNA3;源于ZJ2 0 0 0株基因构建成的DNA疫苗诱导的免疫反应优于JD1株 ,提示DNA疫苗的免疫效果与VP2蛋白的构象、表达载体的调控元件和毒株差异等因素有关。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 DNA疫苗 免疫原性 a节段全长cDNA 多聚蛋白 VP2
在线阅读 下载PDF
鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆与原核表达 被引量:3
9
作者 宋铁彬 白江 +2 位作者 马博 王连江 陈福勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第11期29-30,共2页
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP3基因 克隆与原核表达 RNA病毒 IBDV a节段 基因组 VP2
在线阅读 下载PDF
鸡传染性法氏囊病病毒J1C7株全基因组的克隆与分子系统进化树分析
10
作者 高冬妮 金丽颖 +3 位作者 安琦 申燕 平文祥 葛菁萍 《中国农学通报》 CSCD 2013年第32期58-65,共8页
为了获得鸡传染性法氏囊病病毒J1C7株的全基因组cDNA,确定其分子进化关系。以IBDV J1C7株细胞培养液为材料,用蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法提取IBDV基因组dsRNA,利用特异性引物将基因组A、B节段分两段进行RT-PCR并通过融合PCR方法将具有... 为了获得鸡传染性法氏囊病病毒J1C7株的全基因组cDNA,确定其分子进化关系。以IBDV J1C7株细胞培养液为材料,用蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法提取IBDV基因组dsRNA,利用特异性引物将基因组A、B节段分两段进行RT-PCR并通过融合PCR方法将具有部分重叠序列的A、B节段的上、下游基因组进行拼接,从而构建出完整的A、B节段基因组,利用pMD-18T载体快速克隆PCR产物。结果表明:获得了3260 bp的A节段全长(Genbank登录号EF646854)和2827 bp的B节段全长(Genbank登录号EF646853)。氨基酸同源性比对结果表明:J1C7株与弱毒疫苗株CEF94(芬兰)、P2(德国)、JD1(中国)、HZ2(中国)的亲缘关系最近(蛋白同源性为VP5:99.3%;VP2:99.3%~100%;VP4:97.9%~99.2%;VP3:96.4%~98.1%;VP1:99.2%~99.9%)。BDV J1C7株属于弱毒疫苗株,且与欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系,在进化树上归为一簇。本研究为构建IBDV的感染性cDNA,了解IBDV基因组的结构与功能打下了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 a节段 B 融合PCR
在线阅读 下载PDF
A型流感病毒的分子生物学研究进展
11
作者 贺英 曹旺斌 《中国家禽》 北大核心 2008年第1期32-36,共5页
流感病毒的基因组由8个-ssRNA节段组成,每个-ssRNA即vRNA的5’端有13个保守的核苷酸序列:-GGAACAAAGAUGAppp5’,具有转录启动子的活性;3’端有12个保守的核苷酸序列:3’HO—UCGUUUUCGUCC-。甲型流感病毒8个vRNA节段编码10种蛋白质... 流感病毒的基因组由8个-ssRNA节段组成,每个-ssRNA即vRNA的5’端有13个保守的核苷酸序列:-GGAACAAAGAUGAppp5’,具有转录启动子的活性;3’端有12个保守的核苷酸序列:3’HO—UCGUUUUCGUCC-。甲型流感病毒8个vRNA节段编码10种蛋白质(见表1)。 展开更多
关键词 A型流感病毒 分子生物学 核苷酸序列 甲型流感病毒 a节段 基因组 启动子 蛋白质
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部