目的分析血清肝纤维化4因子指数(fibrosis 4 index,FIB-4)、壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase-3-like protein 1,CHI3L1)、高尔基蛋白73(Golgi protein 73,GP73)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)联合检测在乙型肝炎肝硬化中的临床预测价值...目的分析血清肝纤维化4因子指数(fibrosis 4 index,FIB-4)、壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase-3-like protein 1,CHI3L1)、高尔基蛋白73(Golgi protein 73,GP73)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)联合检测在乙型肝炎肝硬化中的临床预测价值。方法选取2022年5月—2024年5月甘肃省兰州市第二人民医院接收并确诊的171例乙型肝炎患者作为研究对象,根据是否发生肝硬化将其分为肝硬化组与对照组。肝硬化组包含81例已发生肝硬化的患者,而对照组则由90例未发生肝硬化的患者组成。比较两组FIB-4、CHI3L1、GP73、AFP水平,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristics,ROC)曲线分析上述指标的诊断价值。结果两组的年龄、身体质量指数、性别、饮酒史、吸烟史、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组的FIB-4、CHI3L1、GP73、AFP水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。FIB-4、CHI3L1和GP73的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.930、0.956和0.910,显示出较高的预测准确性。相比之下,AFP的AUC为0.698,预测效能相对较低。FIB-4、CHI3L1和GP73的敏感性分别高达85.2%、90.1%和88.9%,而AFP仅为39.5%。特异性分别为95.6%、92.2%和93.3%,而AFP的特异性为91.1%。当这四个指标联合应用时,其预测效能显著提升,AUC达到0.988,敏感性高达97.5%,特异性为83.3%。结论血清FIB-4、CHI3L1、GP73、AFP联合检测在乙型肝炎肝硬化鉴别诊断中具有显著的价值,该联合检测方案值得在临床实践中应用。展开更多
目的构建高尔基蛋白73(GP73)的重组真核表达载体,获得高纯度的GP73重组蛋白并进行功能分析。方法根据GP73基因序列,利用Primer Premier 6.0设计引物,扩增获得GP73基因;构建GP73-pCMV02重组真核表达载体,将其转染至HEK293细胞,提取GP73...目的构建高尔基蛋白73(GP73)的重组真核表达载体,获得高纯度的GP73重组蛋白并进行功能分析。方法根据GP73基因序列,利用Primer Premier 6.0设计引物,扩增获得GP73基因;构建GP73-pCMV02重组真核表达载体,将其转染至HEK293细胞,提取GP73重组蛋白,并用Ni excel亲和层析柱纯化;采用G-250法对其蛋白浓度进行鉴定。结果GP73重组蛋白长度与预期一致,约为1100 bp;测序比对分析结果显示GP73基因成功插入pCMV02载体;SDS-PAGE结果显示在66 kD处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致。ELISA检测与抗体有较好反应性,抗原效价1/500;4℃保存10 d活性变幅小于10%,热加速10 d与4℃试剂对肝癌血清检测变幅小于10%。结论成功利用真核系统表达GP73重组蛋白,效价为1/500,稳定性良好。展开更多
蛋白质-蛋白质相互作用在细胞的生化功能中扮演极为重要的角色,深入解析蛋白质相互作用关系是理解细胞生命活动的关键。本研究以高尔基体蛋白73(golgi protein 73,GP73)为研究对象,利用经典的免疫共沉淀联合质谱技术系统挖掘了GP73的相...蛋白质-蛋白质相互作用在细胞的生化功能中扮演极为重要的角色,深入解析蛋白质相互作用关系是理解细胞生命活动的关键。本研究以高尔基体蛋白73(golgi protein 73,GP73)为研究对象,利用经典的免疫共沉淀联合质谱技术系统挖掘了GP73的相互作用蛋白质,力求进一步解析GP73的分子功能。选取肝癌细胞系HepG2,利用慢病毒感染技术构建过表达GP73-3Flag的稳定细胞系,免疫共沉淀联合质谱检测鉴定出78个高置信的GP73相互作用蛋白质,生物信息学分析提示,GP73与近40个细胞核蛋白质存在相互作用,并参与RNA运输、剪接和翻译等生物学过程,进一步的免疫荧光和细胞核蛋白质分离实验证实,GP73在多种肿瘤细胞中的细胞核定位,在78个相互作用蛋白质的基础上进一步筛选出与mRNA剪接相关的蛋白质相互作用网络,并通过免疫共沉淀验证了GP73与HNRNPH3、SMN1、RBM14、NCBP1等7种蛋白质存在相互作用。Minigene剪接实验提示,过表达GP73抑制细胞对pre-mRNA的剪接效率。本研究拓展了对GP73蛋白功能的认识和理解,有助于解释其在细胞生物学中的重要角色及其与疾病的潜在关联。展开更多
文摘目的分析血清肝纤维化4因子指数(fibrosis 4 index,FIB-4)、壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase-3-like protein 1,CHI3L1)、高尔基蛋白73(Golgi protein 73,GP73)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)联合检测在乙型肝炎肝硬化中的临床预测价值。方法选取2022年5月—2024年5月甘肃省兰州市第二人民医院接收并确诊的171例乙型肝炎患者作为研究对象,根据是否发生肝硬化将其分为肝硬化组与对照组。肝硬化组包含81例已发生肝硬化的患者,而对照组则由90例未发生肝硬化的患者组成。比较两组FIB-4、CHI3L1、GP73、AFP水平,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristics,ROC)曲线分析上述指标的诊断价值。结果两组的年龄、身体质量指数、性别、饮酒史、吸烟史、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组的FIB-4、CHI3L1、GP73、AFP水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。FIB-4、CHI3L1和GP73的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.930、0.956和0.910,显示出较高的预测准确性。相比之下,AFP的AUC为0.698,预测效能相对较低。FIB-4、CHI3L1和GP73的敏感性分别高达85.2%、90.1%和88.9%,而AFP仅为39.5%。特异性分别为95.6%、92.2%和93.3%,而AFP的特异性为91.1%。当这四个指标联合应用时,其预测效能显著提升,AUC达到0.988,敏感性高达97.5%,特异性为83.3%。结论血清FIB-4、CHI3L1、GP73、AFP联合检测在乙型肝炎肝硬化鉴别诊断中具有显著的价值,该联合检测方案值得在临床实践中应用。
文摘蛋白质-蛋白质相互作用在细胞的生化功能中扮演极为重要的角色,深入解析蛋白质相互作用关系是理解细胞生命活动的关键。本研究以高尔基体蛋白73(golgi protein 73,GP73)为研究对象,利用经典的免疫共沉淀联合质谱技术系统挖掘了GP73的相互作用蛋白质,力求进一步解析GP73的分子功能。选取肝癌细胞系HepG2,利用慢病毒感染技术构建过表达GP73-3Flag的稳定细胞系,免疫共沉淀联合质谱检测鉴定出78个高置信的GP73相互作用蛋白质,生物信息学分析提示,GP73与近40个细胞核蛋白质存在相互作用,并参与RNA运输、剪接和翻译等生物学过程,进一步的免疫荧光和细胞核蛋白质分离实验证实,GP73在多种肿瘤细胞中的细胞核定位,在78个相互作用蛋白质的基础上进一步筛选出与mRNA剪接相关的蛋白质相互作用网络,并通过免疫共沉淀验证了GP73与HNRNPH3、SMN1、RBM14、NCBP1等7种蛋白质存在相互作用。Minigene剪接实验提示,过表达GP73抑制细胞对pre-mRNA的剪接效率。本研究拓展了对GP73蛋白功能的认识和理解,有助于解释其在细胞生物学中的重要角色及其与疾病的潜在关联。
