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热休克70-kDa蛋白A6(HSPA6)的研究进展 被引量:1
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作者 沈诗怡 宋炳辉 傅俊江 《西南医科大学学报》 2021年第5期460-468,共9页
热休克蛋白A6(heat shock 70-kDa protein 6,HSPA6)属于HSP70家族,在哺乳动物谱系中部分保守的可诱导的70-kD蛋白。HSPA6基因位于人类染色体1q23.3上,包含两个重要结构领域:N末端的核苷酸结合域(NBD)和C末端的底物结合域(SBD)。目前研... 热休克蛋白A6(heat shock 70-kDa protein 6,HSPA6)属于HSP70家族,在哺乳动物谱系中部分保守的可诱导的70-kD蛋白。HSPA6基因位于人类染色体1q23.3上,包含两个重要结构领域:N末端的核苷酸结合域(NBD)和C末端的底物结合域(SBD)。目前研究发现HSPA6对肿瘤的发生、发展既有抑制作用,也有促进作用,在非肿瘤疾病的罹患中也扮演着多种重要角色。HSPA6已日渐成为研究的热点,但其作用机制仍未明确。本文对HSPA6蛋白的结构、表达、功能及其在肿瘤中的研究进展、可能的作用机制及未来展望作一概述。 展开更多
关键词 热休克 70-kda蛋白A6 结构域 肿瘤 抗肿瘤活性 机制
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蟾蜍令灵对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中P70S6K表达的影响
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作者 陈砚凝 刘尧 +2 位作者 王小玲 李芳 刘月平 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期1763-1767,共5页
背景食管癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一,近年研究发现,核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)与其发生密切相关。笔者前期的研究表明,蟾蜍令灵(Bufalin)有明显的抗肿瘤作用。目的探讨Bufalin对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中P70S6K表达的影响。方... 背景食管癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一,近年研究发现,核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)与其发生密切相关。笔者前期的研究表明,蟾蜍令灵(Bufalin)有明显的抗肿瘤作用。目的探讨Bufalin对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中P70S6K表达的影响。方法 Nu/Nu健康裸鼠36只,雌雄各半,采用随机数字表法分为4组,每组9只,即对照组(0.9%氯化钠溶液)、Bufalin低剂量(0.5 mg/kg,BL)组、Bufalin中剂量(1.0 mg/kg,BM)组、Bufalin高剂量(1.5 mg/kg,BH)组。观察经Bufalin治疗后裸鼠肿瘤生长情况;反转录PCR(RT-PCR)法检测裸鼠原位移植瘤中P70S6K mRNA的表达,Western blotting及免疫组化法检测裸鼠原位移植瘤中P70S6K和p-P70S6K相对表达量。结果 4组治疗前及治疗后第1天裸鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4组治疗前肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第15天肿瘤体积比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后第15天,BM组、BH组肿瘤体积均低于BL组和对照组(P<0.05)。3组肿瘤抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4组P70S6K mRNA及P70S6K相对表达量比较,差异无统计学意义(F=0.634、0.119,P>0.05)。4组p-P70S6K相对表达量比较,差异有统计学意义(F=233.005,P<0.05)。结论 Bufalin对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤具有抑制作用;Bufalin可以下调P70S6K的磷酸化水平,而P70S6K则不受影响,提示Bufalin可能通过抑制P70S6K活化而发挥作用。 展开更多
关键词 食管肿瘤 蟾蜍令灵 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kda 原位移植瘤
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1,25(OH)_2D_3对人肾小球系膜细胞增殖及mTOR/p70s6K表达的影响
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作者 唐玉玲 马莉 +3 位作者 赵丹 贾林 杨锐 杨晓萍 《天津医药》 CAS 2015年第10期1089-1092,I0001,共5页
目的:探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对人肾小球系膜细胞增殖的影响及其在肾小球系膜细胞调控中对mTOR/p70s6K信号通路的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至3~7代细胞分为4组:正常对照组(加含5%胎牛血清DME... 目的:探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对人肾小球系膜细胞增殖的影响及其在肾小球系膜细胞调控中对mTOR/p70s6K信号通路的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至3~7代细胞分为4组:正常对照组(加含5%胎牛血清DMEM培养基),VD组[加1,25(OH)2D310-8 mol/L],R组(加雷帕霉素5 mg/L),R+VD组[加雷帕霉素5 mg/L及1,25(OH)2D310-8 mol/L],干预48 h。采用细胞增殖与活性检测试剂盒CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期时相分布,免疫荧光法检测细胞中mTOR、p70s6K的表达情况。结果正常对照组、VD组、R组、R+VD组:(1)吸光度值(A450)依次降低,组间多重比较差异均有统计学意义(均P<0.05);抑制率(IR)依次升高。(2)G1期细胞比例依次增加,S期、G2/M期依次减少,增殖指数(PI)依次降低,除R组与VD组比较差异无统计学意义外,其余组间多重比较差异均有统计学意义。(3)系膜细胞中mTOR、p70s6K蛋白表达强度均依次降低,除R组与VD组比较差异无统计学意义外,其余组间多重比较差异均有统计学意义。结论1,25(OH)2D3可显著抑制人系膜细胞增殖,且其可能通过抑制mTOR/p70s6K信号通路调控肾小球系膜细胞增殖。 展开更多
关键词 肾小球系膜细胞 细胞增殖 细胞周期 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kda 1 25-二羟基维生素D3 mTOR/p70s6K信号通路
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二十碳五烯酸激活PI3K/mTOR/p70S6K通路改善快速老化小鼠肌肉功能 被引量:2
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作者 斯日古楞 李天柱 +6 位作者 乌英嘎 郝丹丹 其木格 田慧敏 白春英 张凤宁 瑞云 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期713-718,共6页
目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)通路介导二十碳五烯酸(EPA)对快速老化小鼠肌肉功能的作用。方法将40只SAMP8小鼠随机分为模型组、抑制剂组、EPA组、抑制剂+EPA组,各10只,另取... 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)通路介导二十碳五烯酸(EPA)对快速老化小鼠肌肉功能的作用。方法将40只SAMP8小鼠随机分为模型组、抑制剂组、EPA组、抑制剂+EPA组,各10只,另取8只正常老化SAMR1小鼠作为对照组。抑制剂组给予PI3K抑制剂LY2940027.5 mg·kg^(-1)灌胃,EPA组给予EPA 70 mg·kg^(-1)灌胃,抑制剂+EPA组给予LY294002+EPA灌胃,模型组和对照组灌胃等体积生理盐水,干预8周。检测小鼠肌肉力量强度,计算小鼠肌肉湿重与睾丸周围脂肪湿重变化。HE染色观察小鼠骨骼肌组织病理变化,评估肌纤维横截面积。Western blot法和qRT-PCR法检测小鼠骨骼肌中PI3K、mTOR、p70S6K蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠抓力小,疲劳耐受时间短,肌肉和睾丸周围脂肪湿重轻,骨骼肌中磷酸化PI3K(p-PI3K)、p-mTOR、p-p70S6K蛋白相对表达量低(P<0.05)。与模型组比较,抑制剂组小鼠抓力更小,疲劳耐受时间更短,肌肉湿重、睾丸周围脂肪湿重更轻,骨骼肌中p-PI3K、p-mTOR、p-p70S6K蛋白相对表达量更低(P<0.05);EPA组和抑制剂+EPA组小鼠抓力增大,疲劳耐受时间较长,肌肉湿重、睾丸周围脂肪湿重较重,骨骼肌中p-PI3K、p-mTOR、p-p70S6K蛋白相对表达量上调(P<0.05)。与对照组比较,模型组、抑制剂组肌纤维横截面积明显缩小,细胞核内移明显,抑制剂+EPA组肌纤维横截面积与细胞核内移有所改善,EPA组改善更明显。结论EPA可能是通过激活PI3K/mTOR/p70S6K信号通路改善快速老化小鼠的肌肉功能。 展开更多
关键词 二十碳五烯酸 衰老 肌减少症 Ⅰ类磷脂酰肌醇3-激酶类 TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kda
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二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达 被引量:5
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作者 张永芳 王蒙蒙 +5 位作者 李昕 王永峰 裴秀英 王燕蓉 马会明 徐仙 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期146-153,共8页
目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双... 目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显著升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。 展开更多
关键词 二甲双胍 核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k) 胰岛素受体底物-1(IRS-1) 人颗粒细胞
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mTOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义 被引量:4
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作者 张文芳 潘春燕 张印星 《解放军医药杂志》 CAS 2015年第4期12-15,共4页
目的探讨m TOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的mRNA,应用RT-PCR的方法来检测3种组... 目的探讨m TOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的mRNA,应用RT-PCR的方法来检测3种组织中m TOR和P70S6K mRNA的表达水平,并进行分析。结果宫颈癌组织中m TOR、P70S6K mRNA的表达明显高于癌旁组织及正常组织(P<0.05),m TOR、P70S6K mRNA水平在宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织中均呈正相关(P<0.05)。结论 m TOR信号通路在宫颈癌组织中处于活化状态,其在宫颈癌的发生发展以及向其他部位转移中具有重要作用,是一个诊断和治疗的分子靶点。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 核糖体蛋白质S6激酶类 70-k DA 他克莫司结合蛋白质类
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HBV感染免疫耐受期产妇与正常产妇脐带血浆细胞样树突状细胞中PI3K、mTOR、p70S6K、IFNα的表达情况分析
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作者 杨雯珺 霍燚 彭建平 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期1727-1731,共5页
目的比较HBV感染免疫耐受期产妇脐带血与正常产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDC)中PI3K、mTOR、p70S6K、IFNα表达的差异。方法选取湖南中医药大学第一附属医院产科住院部2017年10月-2020年1月HBV感染免疫耐受期产妇20例(乙型肝炎组)及... 目的比较HBV感染免疫耐受期产妇脐带血与正常产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDC)中PI3K、mTOR、p70S6K、IFNα表达的差异。方法选取湖南中医药大学第一附属医院产科住院部2017年10月-2020年1月HBV感染免疫耐受期产妇20例(乙型肝炎组)及正常产妇10例(正常组)。分离培养脐带血pDC,在培养的第7天加入CpG-A,24 h后分别收集细胞及上清液,real-time PCR检测pDC PI3K、mTOR、p70S6K mRNA的表达,Western Blot技术检测pDC PI3K、mTOR、p70S6K蛋白表达,ELISA法检测pDC培养上清IFNα水平。计量资料采用两独立样本t检验。结果乙型肝炎组HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDC PI3K、mTOR、p70S6K mRNA表达水平显著低于正常产妇组(t值分别为-81.04、-63.07、-34.55,P值均<0.001);乙型肝炎组HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDC PI3K、mTOR、p70S6K蛋白表达水平亦显著低于正常产妇组(t值分别为-8.13、-7.75、-6.71,P值均<0.001);乙型肝炎组HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDC培养上清IFNα表达水平显著低于正常产妇组(t=-15.88,P<0.05)。结论HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDC的PI3K、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平及IFNα水平减少,pDC功能受到抑制。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 树突细胞 磷酸肌醇3-激酶 TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kda
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热休克蛋白70抗体检测在听神经病患者中的临床意义
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作者 兰兰 郭维 +3 位作者 赵亚丽 赵阳 顾瑞 王秋菊 《中华耳科学杂志》 CSCD 2010年第2期167-170,共4页
目的进行基于蛋白质表达水平的热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)抗体在临床诊断听神经病患者中的临床指导意义研究。探讨HSP70作为听神经病诊断的可靠应激标志物及判断预后前瞻性标记物的可行性分析。方法对92例受试者的新鲜血... 目的进行基于蛋白质表达水平的热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)抗体在临床诊断听神经病患者中的临床指导意义研究。探讨HSP70作为听神经病诊断的可靠应激标志物及判断预后前瞻性标记物的可行性分析。方法对92例受试者的新鲜血清液进行了HSP70抗体检测。92例受试者为门诊就诊的患者和正常对照组。其中包括18例诊断为听神经病患者、23例听力正常的听神经病患者亲属、19例听力正常无血缘关系的正常对照、32例感音神经性耳聋患者。所有患者均进行纯音测听、听性脑干反映潜伏期、鼓室声导纳测试、耳声发射检查,部分患者接受了核磁共振及颞骨CT扫描检查。HSP70的表达研究应用的是免疫印迹法检测受试者血清HSP70抗体反应,采用美国IMMCO公司的Otoblot抗68kDa(HSP70)免疫印迹诊断试剂盒进行检测,抗HSP70抗体阳性的反应在68kDa处出现蓝紫色条带。结果应用stata7.0进行统计分析68kDa蛋白阳性表达情况,显示在听神经病组和其家属组之间比较无差异(卡方检验P=0.43>0.05);听神经病组和感音神经性聋组间比较也无差异(卡方检验P=0.98>0.05)。但是听神经病组和正常组比较,两组间有差异(Fisher,P=0.02<0.05);听神经病亲属组和正常组比较,两组间没有差异(卡方检验,P=0.11>0.05);感音神经性聋和正常组比较,两组间有差异(卡方检验,P=0.018<0.05)。结论综合以上结果 ,我们认为抗68kDa抗体的免疫印迹检测对听神经病的诊断特异性和敏感性不理想,尚不能作为临床上的应激标记物和预后判断的指标。 展开更多
关键词 听神经病 热休克蛋白70 68kDa蛋白 听力损失
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PI3K/Akt/mTOR/p70^(S6K)信号通路在肝纤维化发生发展中的作用 被引量:14
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作者 吴长会 沈敏 +1 位作者 李龙 韦嘉 《临床肝胆病杂志》 CAS 2015年第11期1928-1932,共5页
PI3K/Akt/m TOR/p70S6K是细胞生命活动的重要信号通路,在促进细胞生长、增殖、侵袭、抗凋亡及促进血管生成中具有重要作用。简述了PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路作用于肝星状细胞(HSC)而对肝纤维化发生发展产生的作用,分析表明阻断该... PI3K/Akt/m TOR/p70S6K是细胞生命活动的重要信号通路,在促进细胞生长、增殖、侵袭、抗凋亡及促进血管生成中具有重要作用。简述了PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路作用于肝星状细胞(HSC)而对肝纤维化发生发展产生的作用,分析表明阻断该信号通路中任一靶点均能抑制HSC活化、增殖,促进HSC凋亡,抑制HSC分泌细胞外基质和延缓肝纤维化进程,阻断该通路有望成为肝纤维化的治疗策略。 展开更多
关键词 肝硬化 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶类 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 核糖体蛋白质S6激酶类 70-k DA 综述
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诺氟沙星对海月水母螅状体Hsp70基因、GTP结合蛋白基因和氧化应激蛋白基因表达的影响 被引量:2
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作者 赵情 米铁柱 +2 位作者 甄毓 石岩 王国善 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期201-211,共11页
诺氟沙星(norfloxacin,NFLX)广泛应用于水产养殖中的鱼类细菌性疾病治疗。为探讨诺氟沙星对海洋生物的毒性作用,选择海月水母螅状体为受试生物,考察了不同浓度诺氟沙星和不同暴露时间对GTP结合蛋白(GTP binding protein)、氧化应激蛋白(... 诺氟沙星(norfloxacin,NFLX)广泛应用于水产养殖中的鱼类细菌性疾病治疗。为探讨诺氟沙星对海洋生物的毒性作用,选择海月水母螅状体为受试生物,考察了不同浓度诺氟沙星和不同暴露时间对GTP结合蛋白(GTP binding protein)、氧化应激蛋白(oxidative stress protein)和热休克70 k Da蛋白(heat shock 70 k Da protein,Hsp70)表达量的影响。结果表明,NFLX对海月水母螅状体的48 h的半致死浓度(48 h-LC_(50))是415.1 mg·L^(-1),NFLX对海月水母螅状体的毒性属于低毒。随着NFLX浓度的升高和培养时间的延长,Hsp70基因在第7天浓度300 mg·L^(-1)时表达量受到显著性诱导(P<0.05),较对照组升高9.1倍;GTP结合蛋白基因和氧化应激蛋白基因的表达量都呈现先急剧升高后降低的趋势。2个基因均在第1天受到显著性诱导(P<0.05),分别在NFLX浓度100 mg·L^(-1)和300 mg·L^(-1)时表达量达到最大值,较对照组升高10.15倍和50.5倍。Hsp70基因、GTP结合蛋白基因和氧化应激蛋白基因在实验期间都对NFLX表现出较好的响应。 展开更多
关键词 诺氟沙星 海月水母螅状体 HSP70基因 GTP结合蛋白基因 氧化应激蛋白基因 基因表达
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热应激条件下小鼠睾丸组织HSP70基因表达谱的研究 被引量:3
11
作者 刘一诺 郝林琳 +2 位作者 张莹 王佳 赵志辉 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2010年第2期135-138,共4页
本试验建立了不同温度、不同时间热应激实验小鼠动物模型,采用Real-time PCR和Western-blot方法检测了小鼠睾丸组织热应激蛋白70(HSP70)在mRNA和蛋白质水平的表达规律。结果表明:25℃时,HSP70在mR-NA和蛋白质表达水平没有变化;在31℃、3... 本试验建立了不同温度、不同时间热应激实验小鼠动物模型,采用Real-time PCR和Western-blot方法检测了小鼠睾丸组织热应激蛋白70(HSP70)在mRNA和蛋白质水平的表达规律。结果表明:25℃时,HSP70在mR-NA和蛋白质表达水平没有变化;在31℃、34℃和37℃时,随应激时间的延长,HSP70mRNA和蛋白质的表达均呈现先升高后下降的趋势;40℃时,HSP70mRNA和蛋白质始终持续高表达。结论:小鼠受热应激后,睾丸组织HSP70mRNA和蛋白质均随着温度和时间的增加呈规律性变化,本研究为探索HSP70对精液品质的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 热应激 热应激蛋白70 小鼠睾丸组织
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Creation of Male Sterile Line in Tobacco With HSP70 Anti-sense Fragment 被引量:1
12
作者 易凌霄 李祥 +1 位作者 陈建南 夏石头 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2016年第10期2262-2266,2296,共6页
In order to create the Male Sterile Line in tobacco, the anti-sense fragment of HSP70 gene was linked to anther specific expression promoter TA29 and the reconstructed vector was transformed into tobacco by Agrobacter... In order to create the Male Sterile Line in tobacco, the anti-sense fragment of HSP70 gene was linked to anther specific expression promoter TA29 and the reconstructed vector was transformed into tobacco by Agrobacterium mediated transformation, and the transformants were then screened. Gus and spot blotting hybridization analysis of the transformants indicated that anti-sense fragment of HSF70 gene had been integrated into tobacco genome and expressed, thus the male sterile tobacco line was obtained. Microscope observation of anther and pollen showed that pistils of transgenic tobacco were normal, whereas anthers and pollens were fairly abortive in the same transgenic tobacco flower, comparing with pistils and stamens in control plants. The ratio of HSI:'70 protein before and after heat shock in mitochondrial was found to be 1.39 in control tobacco plants and 1.01 in transgenic tobacco sterile lines. This is suggested that the anti-sense gene fragment of HSP70 can effectively inhibit the expression of HSP70 protein and lead to transgenic male sterility in tobacco flowers. The assay provided a new genetic engineering method for male sterility creation in plants. 展开更多
关键词 70 kDa heat-shock protein Antisense gene Male sterility Gene engineering
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Vk3对宫颈癌Hela细胞mTOR信号转导蛋白基因表达的影响 被引量:3
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作者 刘玉和 于春艳 +1 位作者 王皓 孙连坤 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期267-270,共4页
目的:观察维生素K3(Vk3)对Hela细胞雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其底物p70S6激酶(p70S6K)α1、α2、β1、β2和细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA表达的变化及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对mTOR及其底物的影响,探讨mTOR信号转导蛋白在人宫颈癌的发生、发... 目的:观察维生素K3(Vk3)对Hela细胞雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其底物p70S6激酶(p70S6K)α1、α2、β1、β2和细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA表达的变化及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对mTOR及其底物的影响,探讨mTOR信号转导蛋白在人宫颈癌的发生、发展过程中的作用。方法:实验分为对照组(Con)、Vk3处理组(Vk3)、Vk3与NAC联合作用(Vk3+NAC)组及NAC单独应用组(NAC),MTT法检测各组Hela细胞存活率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组Hela细胞中mTOR、p70S6K-α1、p70S6K-α2、p70S6K-β1、p70S6K-β2及cyclinD1mRNA表达。结果:与Con组比较,Vk3组Hela细胞存活率显著降低(P<0.01),mTOR、p70S6K-α1、p70S6K-α2、p70S6K-β1、p70S6K-β2及cyclin D1 mRNA表达量均明显下降(P<0.05);而与Vk3组比较,Vk3+NAC组Hela细胞存活率显著增加(P<0.01),上述指标mRNA表达量均明显增加(P<0.05)。结论:Vk3通过其氧化应激作用抑制Hela细胞的增殖,其机制与降低mTOR信号转导蛋白及cyclinD1的基因表达有关。 展开更多
关键词 雷帕霉素靶蛋白 核糖体蛋白质激酶类 70-kda HELA细胞 细胞周期蛋白D1
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miR-181b影响ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的自噬调节机制 被引量:3
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作者 董轶 杨绍南 +3 位作者 潘旭东 马爱军 李舒 裴浩天 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2018年第2期144-148,151,共6页
目的探讨微小RNA 181b(miR-181b)是否通过调节自噬相关靶蛋白参与动脉粥样硬化发展。方法通过颈总动脉套环诱导ApoE^(-/-)小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成。通过尾静脉注射miR-181b慢病毒载体构建其过表达(miR-181bOE)及低表达(miR-181bKD)... 目的探讨微小RNA 181b(miR-181b)是否通过调节自噬相关靶蛋白参与动脉粥样硬化发展。方法通过颈总动脉套环诱导ApoE^(-/-)小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成。通过尾静脉注射miR-181b慢病毒载体构建其过表达(miR-181bOE)及低表达(miR-181bKD)模型。检测血浆中脂质水平,苏木精-伊红染色对动脉粥样硬化斑块大小和体积进行定量,Western Blot检测自噬相关蛋白的表达。结果各组ApoE^(-/-)小鼠血浆中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平均无显著差异(P>0.05)。MiR-181bKD和miR-181bOE分别显著减少和增加颈动脉斑块面积和体积(F=118.95~322.03,P<0.05)。MiR-181bOE可下调微管相关蛋白1轻链3膜结合型(LC3-Ⅱ)的表达,上调核糖体蛋白质S6激酶类70-kDa(p70S6K)表达,抑制自噬体形成;相反,miR-181bKD可上调LC3-Ⅱ的表达,下调p70S6K表达,促进自噬体形成。差异均有显著性(F=107.38~398.13,P<0.05)。结论抑制miR-181b可能通过下调p70S6K表达增加自噬活性,延缓颈动脉粥样硬化斑块的形成。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 微RNAS 自噬体 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kda
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HSPA1A受HOTAIR/miR-590-3p轴调控促进I/R诱导的心肌梗死大鼠体内NF-κB介导的炎症反应 被引量:1
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作者 刘超群 梁丽艳 +1 位作者 刘顺民 钟小兰 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2023年第5期696-705,共10页
目的:探讨热休克70 kDa蛋白1A(HSPA1A)受长链非编码RNA(lncRNA)高温转录物反义RNA(HOTAIR)/微小RNA(miR)-590-3p轴的调控,对心肌缺血/再灌注(I/R)诱导的急性心肌梗死大鼠模型的调控作用。方法:建立大鼠心肌I/R损伤模型,将SD大鼠随机分为... 目的:探讨热休克70 kDa蛋白1A(HSPA1A)受长链非编码RNA(lncRNA)高温转录物反义RNA(HOTAIR)/微小RNA(miR)-590-3p轴的调控,对心肌缺血/再灌注(I/R)诱导的急性心肌梗死大鼠模型的调控作用。方法:建立大鼠心肌I/R损伤模型,将SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、I/R组、I/R联合siRNA沉默的HSPA1A组(I/R+si-HSPA1A组)、I/R联合siRNA沉默的HOTAIR组(I/R+si-HOTAIR组)、I/R联合si-HSPA1A的阴性对照组(I/R+si-NC组)、I/R联合siRNA沉默的HOTAIR的阴性对照组(I/R+si-NC2组)。建立H9C2细胞缺氧/复氧(H/R)模型,将H9C2细胞随机分为Ctrl组、H/R组、H/R联合si-HOTAIR组(H/R+si-HOTAIR组)、H/R联合si-HOTAIR和过表达HSPA1A组(I/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组)4组。将常规培养的H9C2细胞分为miR-590-3p的拟似物组(mimic组)、mimic阴性对照组(mimic-NC组)、si-NC2组和si-HOTAIR组4组。用苏木素-伊红(HE)染色进行心肌组织病理学检查。用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测心肌组织中肌酸激酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达以及血清中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测H9C2细胞的活力。用Western blot分析HSPA1A、核因子-κB(NF-κB)P65、磷酸化的NF-κB P65(p-NF-κB P65)、IL-6、IL-1β、TNF-α的表达。用实时定量PCR(RT-qPCR)法分析HOTAIR和miR-590-3p的表达。利用双荧光素酶报告实验检测miR-590-3p与HSPA1A的3′非翻译区(UTR)以及HOTAIR与miR-590-3p的结合作用。结果:与假手术组比,I/R诱导后明显增加了心肌组织损伤和炎症(均P<0.05)。与I/R+si-NC组比,I/R+si-HSPA1A组的HSPA1A、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平都下调(均P<0.05),缓解了心肌损伤和炎症反应。与假手术组比,I/R诱导后明显增加了HOTAIR表达并下调了miR-590-3p的表达(均P<0.05)。与I/R+si-NC2组比,I/R+si-HOTAIR组的HSPA1A、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平都下调(均P<0.05),miR-590-3p的表达水平上调(P<0.05),缓解了心肌损伤和炎症反应。与H/R组比,H/R+si-HOTAIR组上调了H/R诱导下的H9C2细胞的增殖率(P<0.05),而H/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组的细胞增殖率明显低于H/R+si-HOTAIR组(P<0.05)。与H/R组比,H/R+si-HOTAIR组H/R诱导的H9C2细胞中HOTAIR、HSPA1A、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低(均P<0.05),而H/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组IL-1β、IL-6和TNF-α的表达则显著增加(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验检测发现HSPA1A的3′-UTR可直接结合miR-590-3p(P<0.05),且在H9C2细胞中,与mimic-NC组比,mimic组中的HSPA1A蛋白表达明显下调(P<0.05)。另外,HOTAIR也可直接结合miR-590-3p(P<0.05)。在H9C2细胞中,与si-NC2组相比,si-HOTAIR组的miR-590-3p表达水平上调(P<0.05)。结论:HSPA1A受HOTAIR/miR-590-3p轴调控促进I/R诱导的心肌梗死大鼠体内NF-κB介导的炎症反应。 展开更多
关键词 热休克70 kDa蛋白1A 高温转录物反义RNA 核因子-κB 急性心肌梗死 炎症反应 大鼠
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氧化型低密度脂蛋白通过Akt/mTOR/p70S6K通路诱导血管内皮细胞自噬 被引量:5
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作者 李婷 杨绍楠 +4 位作者 马爱军 潘旭东 王琨 张兆志 王源 《国际脑血管病杂志》 2017年第4期347-352,共6页
目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, oxLDL)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)自噬和Akt/mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法将培养的HUVECs分为oxLDL组和对照组,分别... 目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, oxLDL)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)自噬和Akt/mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法将培养的HUVECs分为oxLDL组和对照组,分别用100 μg/ml oxLDL和等体积磷酸盐缓冲液处理。在培养6 h和12 h后收集细胞。应用透射电子显微镜观察自噬小体,实时荧光定量聚合酶链反应检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3)和p62 mRNA表达,应用蛋白质印迹法检测LC3、p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K蛋白表达。结果与对照组相比,oxLDL处理组细胞内的自噬小体数量明显增多(P〈0.05),LC3 mRNA及蛋白表达水平均显著增高(P均〈0.05),而p62 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P均〈0.05)。此外,oxLDL处理组Akt、mTOR、p70S6K磷酸化蛋白表达水平均较对照组显著降低(P均〈0.01),但Akt、mTOR和p70S6K总蛋白表达水平与对照组无显著差异。结论oxLDL可通过抑制Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导HUVECs自噬。 展开更多
关键词 内皮细胞 内皮 血管 脂蛋白类 LDL 自噬 动脉粥样硬化 信号转导 TOR丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶 原癌基因蛋白质c-akt 核糖体蛋白S6激酶 70-kda 微管相关蛋白质类
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乳腺癌组织中mTOR/p70S6K信号通路表达及临床意义 被引量:2
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作者 劳海黎 李霞 +2 位作者 王海珍 李延海 王杰书 《中国临床实用医学》 2016年第2期50-53,共4页
目的:分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/70 kDa核糖体蛋白S6激酶(mTOR/p70S6K)信号通路在乳腺癌组织中的表达水平,并初步探究其在乳腺癌发生、发展中的作用及临床意义。方法选取2013年1月至2016年1月滨州医学院附属滨州市中心医院手术切... 目的:分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/70 kDa核糖体蛋白S6激酶(mTOR/p70S6K)信号通路在乳腺癌组织中的表达水平,并初步探究其在乳腺癌发生、发展中的作用及临床意义。方法选取2013年1月至2016年1月滨州医学院附属滨州市中心医院手术切除的新鲜乳腺癌标本40例,均取相应癌旁组织40例作对照,和32例非乳腺癌乳腺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,免疫组织化学技术检测40例乳腺癌患者癌组织、癌旁乳腺组织及32例正常乳腺组织中mTOR及P70S6K的表达情况,分析mTOR及p70S6K mRNA的表达与相关临床参数的关系。结果 mTOR mRNA在乳腺癌组织中的表达水平(0.611±0.098)显著高于在癌旁乳腺组织(0.419±0.101)和正常乳腺组织(0.381±0.043)中的表达水平,p70S6K mRNA在乳腺癌组织中的表达水平(0.625±0.109)显著高于在癌旁乳腺组织(0.471±0.129)和正常乳腺组织(0.441±0.130)中的表达水平,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。mTOR和p70S6K在乳腺癌组织中的表达呈正相关(γ=0.491,P=0.019)。mTOR及p70S6K mRNA在乳腺癌组织中的表达水平与病理分期、有无淋巴结转移等明显相关,而与肿瘤直径、年龄等无明显关系。结论 mTOR/p70S6K信号通路在乳腺癌组织中特异性激活,mTOR/P70S6K信号通路可能在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 70 kDa核糖体蛋白S6激酶(p70S6K) 逆转录聚合酶链反应 免疫组化
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核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响 被引量:1
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作者 李树颖 于德民 +1 位作者 小川涉 春日雅人 《中华糖尿病杂志》 CAS 2011年第4期328-332,共5页
目的 探讨核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对db/db小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响及其作用机制.方法 根据随机数字表将12只体质量44.5~48.2 g的9周龄雄性db/db小鼠随机分至对照组(n=6)和实验组(n=6).实验组db/db小鼠尾静脉注射制备的核... 目的 探讨核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对db/db小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响及其作用机制.方法 根据随机数字表将12只体质量44.5~48.2 g的9周龄雄性db/db小鼠随机分至对照组(n=6)和实验组(n=6).实验组db/db小鼠尾静脉注射制备的核糖体蛋白S6激酶1短发夹RNA重组基因腺病毒,对照组db/db小鼠尾静脉注射含U6启动子空载体腺病毒.在注射病毒后第6天处死小鼠获取肝脏,提取肝脏蛋白,利用Western blot法观察其中胰岛素受体底物1、胰岛素受体底物2、蛋白激酶B及其丝氨酸473蛋白的表达;提取肝脏总RNA用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测比较2组参与肝脏脂肪酸合成基因mRNA的表达.处死2组小鼠前1 d禁食16 h后经尾静脉取血,采用比色法检测游离脂肪酸、甘油三酯、总胆固醇水平.组间数据比较采用t检验.结果 db/db小鼠注射病毒后6 d,苏木素-伊红染色显示实验组肝细胞胞质含脂肪滴较对照组减少,脂肪肝得到改善.Western blot检测显示实验组核糖体蛋白S6激酶1蛋白表达被抑制,与对照组相比差异有统计学意义(分别为0.12±0.01和0.87±0.06,t=5.36,P<0.05);实验组胰岛素受体底物1、胰岛素受体底物2、蛋白激酶B丝氨酸473的蛋白表达均较对照组增强(均P<0.05).和对照组相比,实验组参与脂肪酸合成的基因固醇调节元件结合蛋白1c(分别为2.33±0.29和1.34±0.39,t=3.46,P<0.01)、脂肪酸合成酶(分别为7.8±1.2和3.4±0.4,t=4.67,P<0.01)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(764±116和535±54,t=6.12,P<0.01)mRNA表达均明显下降.血清生化测定结果显示和对照组相比实验组脂肪酸下降(t=2.64,P<0.05),胆固醇水平降低(t=4.25,P<0.01),甘油三酯组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论在营养过剩的条件下,肝脏核糖体蛋白S6激酶1过度激活,可能通过负反馈引起肝脏胰岛素信号传导下降、上调脂代谢关键调控基因固醇调节元件结合蛋白1c表达而参与了肝脏胰岛素抵抗和脂肪肝的发生. 展开更多
关键词 脂肪肝 小鼠 核糖体蛋白S6激酶类 70-kda 基因沉默 胰岛素抵抗
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联合免疫缺陷病 被引量:6
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作者 贺建新 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期250-256,共7页
联合免疫缺陷病(CID)属于最新原发性免疫缺陷病分类中的第1大类。其中儿科临床最危重类型为重症联合免疫缺陷病(SCID),不经造血干细胞移植治疗,患儿通常于1岁内夭折,很少能活过2岁。近年来,随着病例数的增多,逐渐认识到一部分SCID患儿... 联合免疫缺陷病(CID)属于最新原发性免疫缺陷病分类中的第1大类。其中儿科临床最危重类型为重症联合免疫缺陷病(SCID),不经造血干细胞移植治疗,患儿通常于1岁内夭折,很少能活过2岁。近年来,随着病例数的增多,逐渐认识到一部分SCID患儿可表现为不典型表型。另外还有2种特殊免疫和临床表型的SCID,如Omenn综合征和SCID的移植物抗宿主反应,分别由自身的及母体寡克隆细胞扩增所致。放射敏感CID属于T-B-SCID,具有放射敏感和双链DNA断裂修复缺陷,临床处理需要特殊关注。由正常发育的但伴有内在缺陷的T淋巴细胞导致的CID是近年研究热点,如zeta链相关蛋白激酶70 kDa(ZAP70)缺陷。综合征伴发的CID与临床亦密切相关,如胞质分裂贡献者8(DOCK8)缺陷。现阐述相关疾病的发病机制、分子特征、临床特点、实验室检查、诊断、治疗及预后等,为儿科医师在此领域的诊疗工作提供相关信息。 展开更多
关键词 不典型严重联合免疫缺陷病 放射敏感一联合免疫缺陷病 Zeta链相关蛋白激酶70 kDa缺陷 胞质分裂贡献者8缺陷
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