马铃薯Y病毒6kD和NIa基因的克隆与序列分析及其植物表达载体的构建 被引量：4

1

作者 项瑜 杨兰英 +1 位作者 彭学贤 魏宁生 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期279-282,共4页

马铃薯Ｙ病毒６ｋＤ和ＮＩａ基因的克隆与序列分析及其植物表达载体的构建项瑜，杨兰英，彭学贤，魏宁生关键词马铃薯Ｙ病毒，６ｋＤ基因，ＮＩａ基因，序列分析，植物表达载体马铃薯Ｙ病毒（ＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹ，ＰＶＹ）是马铃... 马铃薯Ｙ病毒６ｋＤ和ＮＩａ基因的克隆与序列分析及其植物表达载体的构建项瑜，杨兰英，彭学贤，魏宁生关键词马铃薯Ｙ病毒，６ｋＤ基因，ＮＩａ基因，序列分析，植物表达载体马铃薯Ｙ病毒（ＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹ，ＰＶＹ）是马铃薯Ｙ病毒组（Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓｇｒ... 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 6kd基因 NIa基因 序列分析

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马铃薯Y病毒6kD和NIa基因转化的烟草介导抗病性 被引量：1

2

作者 杨兰英 项瑜 +1 位作者 魏宁生 彭学贤 《西北农业大学学报》 CSCD 1996年第2期7-11,共5页

将马铃薯Ｙ病毒中国分离株（ＰＶＹ－Ｃ）的６ｋＤ和ＮＩａ基因拼接和改造，分别构建了其正向表述和反向转录的植物表达载体。借助土壤农杆菌ＬＢＡ４４０４将在此双元载体上的６ｋＤ和ＮＩａ基因及新霉素磷酸转移酶基因（ＮＰＴⅡ）转... 将马铃薯Ｙ病毒中国分离株（ＰＶＹ－Ｃ）的６ｋＤ和ＮＩａ基因拼接和改造，分别构建了其正向表述和反向转录的植物表达载体。借助土壤农杆菌ＬＢＡ４４０４将在此双元载体上的６ｋＤ和ＮＩａ基因及新霉素磷酸转移酶基因（ＮＰＴⅡ）转入到烟草品种ＮＣ８９的染色体上，从而获得了抗卡那霉素的转化再生烟草植株。用ＰＶＹ－Ｃ对这些转化烟草进行抗性接种试验，结果表明部分转基因植株能够抵制ＰＶＹ－Ｃ的侵染，对抗病植株的子一代（Ｒ１）进行进一步的抗性分析发现，其Ｒ１代通过遗传也获得了这种抗病性。 展开更多

关键词 马铃薯 病毒 6kd NIa 基因 转基因 烟草

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评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB在肺外结核病诊断中的敏感性 被引量：46

3

作者 霍霏霏 张丽帆 刘晓清 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期449-452,共4页

目的评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的敏感性。方法对北京协和医院根据细菌学或/和组织学诊断的肺外结核患者31例,应用酶联免疫斑点技术检测6kD早期分泌靶向抗原和10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血中释放γ-... 目的评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的敏感性。方法对北京协和医院根据细菌学或/和组织学诊断的肺外结核患者31例,应用酶联免疫斑点技术检测6kD早期分泌靶向抗原和10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血中释放γ-干扰素的特异性T细胞。结果31例肺外结核患者中29例T-SPOT.TB检测阳性,敏感性为93.5%(95%CI84.8%～100%),6kD早期分泌靶向抗原肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为196/106PB-MCs(4分位间距72～532/106PBMCs),10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为276/106PBMCs(4分位间距72～568/106PBMCs),对两个肽段库总的斑点形成细胞中位数为612/106PBMCs(4分位间距192～1152/106PBMCs)。结论T-SPOT.TB检测对肺外结核诊断具有较高的敏感性。 展开更多

关键词 肺外结核 敏感性 T-SPOT.TB 6kd早期分泌靶向抗原肽段库 10kD培养滤过蛋白肽段库 γ干扰素释放分析

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外周血T-SPOT.TB预测结核性胸膜炎患者病情稳定快慢的价值 被引量：7

4

作者 高增艳 苗丽君 +1 位作者 张瑞霞 李冰 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期2655-2657,共3页

目的通过分析结核性胸膜炎患者外周血结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)与胸腔积液消失时间的相关性,探讨T-SPOT.TB在预测结核性胸膜炎患者病情稳定快慢中的价值。方法选择住院治疗并确诊为结核性胸膜炎的患者99例,采用酶联免疫斑点技... 目的通过分析结核性胸膜炎患者外周血结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)与胸腔积液消失时间的相关性,探讨T-SPOT.TB在预测结核性胸膜炎患者病情稳定快慢中的价值。方法选择住院治疗并确诊为结核性胸膜炎的患者99例,采用酶联免疫斑点技术检测外周血中经6 kD早期分泌靶抗原和10 kD培养滤过蛋白刺激后释放相应γ干扰素的特异性T细胞,分别记为T-SPOT.TB评分的A值、B值。所有患者均在正规抗结核基础上行胸腔穿刺术及胸腔闭式引流术,记录胸腔积液消失所需要的时间。分析T-SPOT.TB评分与胸腔积液消失时间的相关关系。结果 99例患者中T-SPOT.TB阳性者89例,外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸膜炎的敏感性为89.9%。T-SPOT.TB评分中A值均值为(61.3±5.2)/106PBMCs,B值均值为(74.8±3.5)/106PBMCs,A+B值均值为(136.1±3.2)/106PBMCs,胸腔积液消失时间均值为(11.7±4.2)d。A值、B值、A+B值与胸腔积液消失时间均呈正相关(r A=0.72,P A<0.001;r B=0.71,P B<0.001;r A+B=0.89,P A+B<0.001)。结论外周血T-SPOT.TB在结核性胸膜炎的诊断中具有重要价值,其评分越高,结核性胸膜炎患者胸腔积液消失时间越长,T-SPOT.TB可以作为预测及评估结核性胸膜炎患者病情稳定快慢的一个重要指标。 展开更多

关键词 结核性胸膜炎 T-SPOT TB γ干扰素释放分析 6kd早期分泌靶抗原 10kD培养滤过蛋白 病情

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结核分枝杆菌Hsp65-Esat6与hGM-CSF联合DNA疫苗的构建与体外研究 被引量：1

5

作者 王森林 张梦媛 +2 位作者 王学坤 周曙光 江振友 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期29-35,共7页

目的:应用分子生物学技术,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以p EGHsp65Esat-6为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,同时从质粒p ORF-h GM-CSF中扩增出基因佐剂h GM-CSF,分别克隆到真核表达载体p I... 目的:应用分子生物学技术,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以p EGHsp65Esat-6为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,同时从质粒p ORF-h GM-CSF中扩增出基因佐剂h GM-CSF,分别克隆到真核表达载体p IRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并转染Hep G-2细胞中表达和检测.结果:酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.93 kb和0.47kb,测序分析表明克隆的Hsp65-Esat6和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(h GM-CSF)序列与Gen Bank上公布序列完全一致;Western-bolt检测到Hsp65-Esat6融合蛋白相对分子质量(Mr)为75 000 k Da;RT-PCR方法检测出p IGM,p IHsp65GM和p IHsp65-Esat6GM转染组细胞均有h GM-CSF mRNA表达,三组细胞中h GM-CSF基因mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05).ELISA方法检测到p IHsp65-Esat6GM转染组细胞培养上清中h GM-CSF的表达,且与空载体对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:成功构建和表达了p IHsp65-Esat6GM质粒,为研制优于卡介苗(BCG)的新型抗结核病的DNA疫苗奠定了基础. 展开更多

关键词 热休克蛋白65kd-早期分泌性抗原靶6kd 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 双顺反子 基因佐剂

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CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒的构建和表达 被引量：1

6

作者 冯鑫 杨静 +5 位作者 张春燕 穆柳青 徐蕾 何永林 董志玲 杨春 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期408-412,共5页

目的:构建结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,M.tb)CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒,并且在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法:以M.tb H37Rv株DNA作为模板,PCR法扩增ESAT6和PPE68基因,利用基因拼接技术中的Gene-SOEing法扩增E... 目的:构建结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,M.tb)CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒,并且在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法:以M.tb H37Rv株DNA作为模板,PCR法扩增ESAT6和PPE68基因,利用基因拼接技术中的Gene-SOEing法扩增ESAT6-PPE68融合基因,克隆至原核表达质粒pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68。再分别以H37Rv株DNA和重组质粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68为模板扩增CFP10和ESAT6-PPE68基因,Gene-SOEing法获取目的基因CFP10-ESAT6-PPE68,克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-CFP10-ESAT6-PPE68,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果:CFP10-ESAT6-PPE68酶切片段大小与理论值符合,基因测序结果显示融合基因CFP10-ESAT6-PPE68的序列与Genbank中序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,相对分子量约为77 kD。结论:成功构建了M.tb CFP10-ESAT6-PPE68融合基因的原核表达质粒,并诱导表达出了融合蛋白,为该融合蛋白在结核病血清诊断学中的应用奠定了实验基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 培养滤液蛋白10 6kd早期分泌抗原靶 戊糖-5-磷酸-3差向异构酶 融合蛋白

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活动性肺结核相关巨噬细胞M1/M2极化的改变及ESAT6对巨噬细胞极化的影响 被引量：1

7

作者 盖林林 孙维策 +1 位作者 褚锦锦 徐栋花 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第20期2867-2873,共7页

目的探讨活动性肺结核患者外周血中单核-巨噬细胞M1/M2极化的变化及结核分枝杆菌ESAT6对人源THP-1细胞极化的影响。方法收集14例活动性肺结核(活动性肺结核组)和10例健康人(健康对照组)肝素钠抗凝全血和血清,采用淋巴细胞液分离肝素钠... 目的探讨活动性肺结核患者外周血中单核-巨噬细胞M1/M2极化的变化及结核分枝杆菌ESAT6对人源THP-1细胞极化的影响。方法收集14例活动性肺结核(活动性肺结核组)和10例健康人(健康对照组)肝素钠抗凝全血和血清,采用淋巴细胞液分离肝素钠全血中单个核细胞(PBMCs),通过实时-定量PCR仪检测确诊的活动性肺结核患者PBMCs中HLA-DR、CD11C、CD68、CD206、Arg-1的mRNA水平,应用流式细胞仪检测细胞因子(IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-4等)的分泌情况。将人源THP-1细胞经佛波酯(PMA)诱导分化,将其变成巨噬细胞样细胞后,分为M0组、M1组、M2组、M0+ESAT6组,刺激24 h后,荧光定量PCR检测HLA-DR、CD11C、CD68、CD206、Arg-1的mRNA水平。ESAT6分别刺激THP-16 h、12 h、24 h后,流式技术检测细胞培养上清中相关细胞因子的水平(IL-2、IL-6、TNF-α、IL-4等)。结果与健康对照组相比,活动性肺结核组外周血PBMCs中M1极化表型分子HLA-DR、CD11C、CD68的mRNA表达水平均上调(P<0.05);M2极化表型分子CD206 mRNA的表达水平下降(P<0.05),Arg-1 mRNA的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。活动性肺结核组患者血清M1极化相关的促炎性细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均上升(P<0.05),抗炎性细胞因子IL-4水平降低(P<0.05)。体外诱导THP-1巨噬细胞分化为不同表型,细胞M1极化表型分子HLA-DR mRNA表达水平在各组之间有统计学意义(F=21.83,P=0.000),两两比较结果显示,M1表型组、M0+ESAT6表型组均较M0组明显上调(P<0.05),其余组间差异无统计学意义(P>0.05);但CD68 mRNA表达水平在各组之间差异无统计学意义(F=2.480,P=0.135)。细胞M2极化表型分子CD206、Arg-1 mRNA水平在各组之间差异无统计学意义(F=1.233,P=0.3597;F=6.059,P=0.068)。M1极化相关的促炎性细胞因子IL-2及抗炎性细胞因子IL-4在各组细胞培养不同时间节点均差异无统计学意义(P>0.05)。与M0和ESAT6表型组相比,M1表型组促炎性细胞因子IL-6和TNF-α水平在培养12 h、24 h均显著升高(P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.001;P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01);其余组间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论活动性肺结核外周血单核-巨噬细胞向M1极化的能力增强,向M2极化的能力减弱。结核分枝杆菌ESAT6可以促进巨噬细胞向M1极化,影响肺结核病情活动及进展。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 巨噬细胞 极化 活动性肺结核 6kd早期分泌靶向蛋白

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电针对大鼠失神经腓肠肌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/70KD核糖体蛋白S6激酶信号通路的影响 被引量：3

8

作者 吴梦佳 唐成林 +5 位作者 黄思琴 安荟羽 谭程方 邱丽 朱正威 杨之雪 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2018年第9期1022-1026,共5页

目的探讨电针延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的可能机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和电针组(n=6)。后两组钳夹伤右侧坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩模型。造模后第2天,电针组电针右侧足三里穴和环跳... 目的探讨电针延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的可能机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和电针组(n=6)。后两组钳夹伤右侧坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩模型。造模后第2天,电针组电针右侧足三里穴和环跳穴,共2周。取双侧腓肠肌称重,计算腓肠肌湿重比;HE染色测量肌纤维横截面积和直径;Western blotting检测大鼠骨骼肌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、70KD核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和磷酸化p70S6K (p-p70S6K)蛋白表达;实时定量聚合酶链反应检测大鼠骨骼肌中mTOR、p70S6K基因表达。结果与假手术组相比,模型组和电针组腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积及直径显著下降(P<0.001),电针组明显高于模型组(P<0.01)。与假手术组相比,模型组右侧腓肠肌mTOR、p-mTOR、p70S6K和p-p70S6K蛋白表达升高(P<0.01);电针组高于模型组(P<0.05)。与假手术组相比,模型组右侧腓肠肌mTOR、p70S6K基因表达升高(P<0.05);电针组高于模型组(P<0.05)。结论电针可延缓失神经骨骼肌萎缩,可能与激活mTOR/p70S6K信号通路,影响骨骼肌蛋白合成有关。 展开更多

关键词 失神经肌萎缩 电针 蛋白合成 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 70KD核糖体蛋白S6激酶 大鼠

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激光对G6PD,HK活性影响的研究 被引量：1

9

作者 朱健 冯宗榴 《激光医学》 1996年第2期64-65,共2页

关键词 激光 眼病 酶 G6kd HK 晶体代谢

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结核分枝杆菌6 kD早期分泌靶抗原单克隆抗体的制备及其特异性分析 被引量：1

10

作者 宁唤唤 任瑞 +5 位作者 康健 白鹭 路延之 谢燕玲 张芳琳 柏银兰 《中国医药导报》 CAS 2023年第5期20-23,共4页

目的制备结核分枝杆菌(Mtb)6 kD早期分泌靶抗原(ESAT-6)单克隆抗体(mAb)并分析其特异性。方法用亲和层析法纯化目的蛋白ESAT-6,并用该蛋白免疫小鼠。分离免疫小鼠的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌mAb的杂交瘤细胞系。制备腹水并纯化... 目的制备结核分枝杆菌(Mtb)6 kD早期分泌靶抗原(ESAT-6)单克隆抗体(mAb)并分析其特异性。方法用亲和层析法纯化目的蛋白ESAT-6,并用该蛋白免疫小鼠。分离免疫小鼠的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌mAb的杂交瘤细胞系。制备腹水并纯化mAb。酶联免疫吸附试验法分析mAb亚类和相对亲和力,蛋白印迹法检测其特异性。结果制备了可分泌ESAT-6抗体的杂交瘤细胞系,获得了纯化的mAb。mAb亚型为IgG1,相对亲和力为3.9×10^(-5)。该mAb可特异性识别Mtb的ESAT-6。结论制备抗ESAT-6的mAb为ESAT-6用于结核病诊断与防治制剂及其机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 分泌蛋白 6 kD早期分泌靶抗原 单克隆抗体

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联想QDI推出首款DDR400主板

11

《软件世界（PC任我行）》 2002年第10期110-110,共1页

关键词 DDR400主板 联想集团 KD7X-6A CPU 三重保护技术

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