目的建立5-羟色胺2C受体(5-HT_(2C)receptor,5-HT_(2C)R)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells 2,NFAT2)共表达细胞株。方法人源5-HT_(2C)R质粒...目的建立5-羟色胺2C受体(5-HT_(2C)receptor,5-HT_(2C)R)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells 2,NFAT2)共表达细胞株。方法人源5-HT_(2C)R质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,经潮霉素(Hygro)压力筛选到稳定表达5-HT_(2C)R的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞。使用RT-qPCR和Western blot法检测该细胞株中5-HT_(2C)R的mRNA和蛋白表达水平;用核转位功能实验验证U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞受体功能的特异性;验证5-HT、LSD、DOM、DOI、赛洛西宾(PSI)和利舒脲(LIS)对5-HT_(2C)R的激活能力。结果筛选得到58号细胞为最强激活的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R单克隆细胞株。RT-qPCR和Western blot结果显示,1~15代内,U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞株稳定表达5-HT_(2C)R mRNA和蛋白。1~15代内,Vabicaserin对U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞株的激活能力稳定,5-HT_(2C)R特异性拮抗剂SB242084能够拮抗Vabicaserin的作用。5-HT、LIS、PSI能诱导U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞部分核转位,而LSD、DOM、DOI没有作用。结论成功构建了共表达5-HT_(2C)R和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞,可用于靶向5-HT_(2C)R的高活性小分子化合物筛选。展开更多
目的探讨温肾健脾固肠方联合督脉灸在腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证)治疗中的应用价值。方法所有腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证)均于2022年3月至2023年6月在我院就诊并随机分组,两组均81例,对照组采用西医常规治疗,观察组采...目的探讨温肾健脾固肠方联合督脉灸在腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证)治疗中的应用价值。方法所有腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证)均于2022年3月至2023年6月在我院就诊并随机分组,两组均81例,对照组采用西医常规治疗,观察组采用温肾健脾固肠方及督脉灸治疗,治疗4周后比较疗效。结果治疗后两组血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、脑源性神经生长因子(brain-derived neuotrophyic factor,BDNF)、D-乳酸、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)、胃泌素(gastrin,GAS)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)低于对照组,白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)更高,观察组改善更显著,差异具统计学意义(P<0.05);治疗后两组汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)、中医总症状积分更低,肠易激综合征生活质量评分(quality of life score for irritable bowel syndrome,IBS-QOL评分)更高,观察组改善更显著(P<0.05);观察组总有效率92.59%(75/81),高于对照组的82.72%(67/81),差异具统计学意义(P<0.05)。结论对于腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证),采用温肾健脾固肠方联合督脉灸治疗更有助于减轻炎症反应,调控神经递质,改善肠黏膜屏障功能,促进病情好转,进而提高临床疗效。展开更多
文摘目的建立5-羟色胺2C受体(5-HT_(2C)receptor,5-HT_(2C)R)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells 2,NFAT2)共表达细胞株。方法人源5-HT_(2C)R质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,经潮霉素(Hygro)压力筛选到稳定表达5-HT_(2C)R的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞。使用RT-qPCR和Western blot法检测该细胞株中5-HT_(2C)R的mRNA和蛋白表达水平;用核转位功能实验验证U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞受体功能的特异性;验证5-HT、LSD、DOM、DOI、赛洛西宾(PSI)和利舒脲(LIS)对5-HT_(2C)R的激活能力。结果筛选得到58号细胞为最强激活的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R单克隆细胞株。RT-qPCR和Western blot结果显示,1~15代内,U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞株稳定表达5-HT_(2C)R mRNA和蛋白。1~15代内,Vabicaserin对U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞株的激活能力稳定,5-HT_(2C)R特异性拮抗剂SB242084能够拮抗Vabicaserin的作用。5-HT、LIS、PSI能诱导U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞部分核转位,而LSD、DOM、DOI没有作用。结论成功构建了共表达5-HT_(2C)R和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞,可用于靶向5-HT_(2C)R的高活性小分子化合物筛选。
文摘目的探讨温肾健脾固肠方联合督脉灸在腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证)治疗中的应用价值。方法所有腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证)均于2022年3月至2023年6月在我院就诊并随机分组,两组均81例,对照组采用西医常规治疗,观察组采用温肾健脾固肠方及督脉灸治疗,治疗4周后比较疗效。结果治疗后两组血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、脑源性神经生长因子(brain-derived neuotrophyic factor,BDNF)、D-乳酸、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)、胃泌素(gastrin,GAS)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)低于对照组,白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)更高,观察组改善更显著,差异具统计学意义(P<0.05);治疗后两组汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)、中医总症状积分更低,肠易激综合征生活质量评分(quality of life score for irritable bowel syndrome,IBS-QOL评分)更高,观察组改善更显著(P<0.05);观察组总有效率92.59%(75/81),高于对照组的82.72%(67/81),差异具统计学意义(P<0.05)。结论对于腹泻型肠易激综合征患者(脾肾阳虚证),采用温肾健脾固肠方联合督脉灸治疗更有助于减轻炎症反应,调控神经递质,改善肠黏膜屏障功能,促进病情好转,进而提高临床疗效。
