主要乳胶蛋白(major latex protein,MLP)是Bet v 1超家族成员,参与植物的各种应激反应。本研究对桑树主要乳胶蛋白基因MaMLP423的启动子pMaMLP423进行了生物信息学分析和克隆表达分析。结果显示pMaMLP423具有启动子必需的TATA-box和CAAT...主要乳胶蛋白(major latex protein,MLP)是Bet v 1超家族成员,参与植物的各种应激反应。本研究对桑树主要乳胶蛋白基因MaMLP423的启动子pMaMLP423进行了生物信息学分析和克隆表达分析。结果显示pMaMLP423具有启动子必需的TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件,还有参与光响应(Box 4、TCT-motif、GA-motif等)、脱落酸反应(ABRE、AAGAA-motif)、乙烯响应(ERE)、干旱诱导(MYB、MBS等)、创伤响应(WUN-motif)等顺式作用元件。构建植物表达载体pMaMLP423及缺失部分序列的pMaMLP423ΔS1和pMaMLP423ΔS2,转化烟草瞬时表达,qPCR和组织化学染色检测显示,三个启动子均能驱动下游GUS基因的表达,但缺失S1和S2启动子的活性降低。外源激素脱落酸和乙烯利能显著诱导MaMLP4232基因的表达。本研究为深入了解MaMLP423的功能和作用提供了参考。展开更多
目的探究microRNA-423-5p(miR-423-5p)调节磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路在心力衰竭进展中的作用。方法构建大鼠心力衰竭模型,同时用AngⅡ处理(100 n M,24 h)大鼠心肌细胞H9C2构建心力衰竭体外模型。H9C2细胞转染mi...目的探究microRNA-423-5p(miR-423-5p)调节磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路在心力衰竭进展中的作用。方法构建大鼠心力衰竭模型,同时用AngⅡ处理(100 n M,24 h)大鼠心肌细胞H9C2构建心力衰竭体外模型。H9C2细胞转染miR-423-5p的抑制剂和模拟剂实现miR-423-5p的敲除和过表达;LY294002用来抑制PI3K/AKT通路的激活。RT-PCR技术检测miR-423-5p的表达; Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、casapse-3/9及PI3K、AKT总蛋白及磷酸化蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miR-423-5p的表达水平在模型组大鼠心肌组织和AngⅡ处理的H9C2细胞中升高;敲除miR-423-5p可抑制由AngⅡ造成的H9C2细胞凋亡,并促进了p-PI3K及p-AKT的表达,但敲除miR-423-5p的以上作用在PI3K/AKT通路被抑制后全部削弱。结论敲除miR-423-5p可通过激活PI3K/AKT通路抑制心肌细胞凋亡,进而缓解心力衰竭的恶性进展。展开更多
文摘目的探究microRNA-423-5p(miR-423-5p)调节磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路在心力衰竭进展中的作用。方法构建大鼠心力衰竭模型,同时用AngⅡ处理(100 n M,24 h)大鼠心肌细胞H9C2构建心力衰竭体外模型。H9C2细胞转染miR-423-5p的抑制剂和模拟剂实现miR-423-5p的敲除和过表达;LY294002用来抑制PI3K/AKT通路的激活。RT-PCR技术检测miR-423-5p的表达; Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、casapse-3/9及PI3K、AKT总蛋白及磷酸化蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miR-423-5p的表达水平在模型组大鼠心肌组织和AngⅡ处理的H9C2细胞中升高;敲除miR-423-5p可抑制由AngⅡ造成的H9C2细胞凋亡,并促进了p-PI3K及p-AKT的表达,但敲除miR-423-5p的以上作用在PI3K/AKT通路被抑制后全部削弱。结论敲除miR-423-5p可通过激活PI3K/AKT通路抑制心肌细胞凋亡,进而缓解心力衰竭的恶性进展。
