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SV40-LT基因的原核表达及免疫原性检测
1
作者 付玉志 李传峰 +3 位作者 陈宗艳 王超 陈铁桥 刘光清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期208-212,共5页
为了获得纯化的SV40-大T抗原(SV40-LT)及其特异性抗体,本研究利用原核表达系统高效表达了SV40大T抗原的高抗原指数区域,然后将纯化的大T抗原免疫试验兔,制备了相应的特异性抗体。经蛋白免疫电泳和ELISA方法检测,结果表明本研究获得的原... 为了获得纯化的SV40-大T抗原(SV40-LT)及其特异性抗体,本研究利用原核表达系统高效表达了SV40大T抗原的高抗原指数区域,然后将纯化的大T抗原免疫试验兔,制备了相应的特异性抗体。经蛋白免疫电泳和ELISA方法检测,结果表明本研究获得的原核表达产物,不仅具有较好的免疫原性,而且能够诱导试验兔产生较高的抗体水平(抗体效价为1∶6 400)。 展开更多
关键词 SV40-lt基因 原核表达 特异性抗体 ELISA
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SV40-LT基因使牙髓干细胞永生化的研究 被引量：1
2
作者 陈冬雪 白喜龙 梁英民 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期189-193,共5页
目的:分离牙髓干细胞,用含有SV40-LT抗原的慢病毒感染牙髓干细胞以建立永生化细胞株并进行鉴定。方法:消化法获得牙髓干细胞;用慢病毒粒子HBLV-SV40LT-3*flag-PURO感染目的细胞,抗生素筛选出稳定传代的细胞株,并进行干性测定。结果:原... 目的:分离牙髓干细胞,用含有SV40-LT抗原的慢病毒感染牙髓干细胞以建立永生化细胞株并进行鉴定。方法:消化法获得牙髓干细胞;用慢病毒粒子HBLV-SV40LT-3*flag-PURO感染目的细胞,抗生素筛选出稳定传代的细胞株,并进行干性测定。结果:原代与永生化的牙髓干细胞(iDPSCs)在分化能力及表面标记物的检测无差异;Real-time PCR结果显示,感染组细胞中SV40-LT基因的转录水平显著提高;Western blot结果显示,实验组均可检测到标签蛋白Flag的表达。结论:含有SV40-LT基因片段的慢病毒可使人牙髓干细胞发生永生化,永生化后的细胞仍具有多向分化潜能。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 永生化 SV40-lt
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MDCK过表达SV40-LT基因稳定细胞系的构建
3
作者 刘文凯 田玲 +3 位作者 乔自林 王家敏 王明明 李铀 《甘肃畜牧兽医》 2021年第12期54-58,共5页
细胞永生化使细胞能够在保持遗传性状的同时无限增殖,细胞的体外永生化需要将HPV的E6和E7基因、SV40的LT基因或人端粒酶逆转录酶(hTERT)等导入目标内,而SV40-LT是建立永生化细胞最便捷的基因。本试验利用慢病毒感染方式将SV40-LT导入MDC... 细胞永生化使细胞能够在保持遗传性状的同时无限增殖,细胞的体外永生化需要将HPV的E6和E7基因、SV40的LT基因或人端粒酶逆转录酶(hTERT)等导入目标内,而SV40-LT是建立永生化细胞最便捷的基因。本试验利用慢病毒感染方式将SV40-LT导入MDCK细胞中,阳性筛选后经qPCR和免疫荧光实验均检测到SV40-LT的表达,成功建立了利用慢病毒方式导入SV40-LT的实验体系,为后续永生化细胞建系研究提供了技术依据。 展开更多
关键词 增殖 MDCK SV40-lt 细胞永生化
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恒河猴外周血及肾组织SV40病毒基因分析 被引量：1
4
作者 刘建生 刘馨 +2 位作者 徐冬蕾 邵聪文 侯宗柳 《中国病毒学》 CSCD 2003年第1期79-81,共3页
SV40即猿猴病毒40(simian virus 40),是DNA肿瘤病毒的原型代表,其基因结构为共价闭合环状双股DNA分子,标准参考株SV40-776含5243个核甘酸,不同分离株bp数略有差异.
关键词 SV40病毒 大T抗原 小T抗原 恒河猴
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树鼩骨骼肌卫星细胞系的建立及生物学特性研究
5
作者 罗丽莹 柯盛辉 +2 位作者 覃万钊 班晓羽 何光耀 《医学理论与实践》 2025年第20期3421-3426,3437,共7页
目的:通过慢病毒转染猿猴病毒40的大T抗原(SV40-LT)基因建立稳定表达SV40-LT的树鼩原代骨骼肌卫星细胞(SMSCs)模型,为永生化细胞建系研究奠定基础。方法:实验利用慢病毒转染SV40-LT基因成功建立永生化SMSCs模型,通过多项实验对细胞进行... 目的:通过慢病毒转染猿猴病毒40的大T抗原(SV40-LT)基因建立稳定表达SV40-LT的树鼩原代骨骼肌卫星细胞(SMSCs)模型,为永生化细胞建系研究奠定基础。方法:实验利用慢病毒转染SV40-LT基因成功建立永生化SMSCs模型,通过多项实验对细胞进行鉴定并验证其生物功能特性。转染后的细胞在形态上与原代细胞基本一致,且具有较高的SMSCs细胞纯度和稳定SV40-LT蛋白表达。结果:永生化SMSCs具有更快的增殖能力和细胞活力,且无明显的细胞衰老表现。血清依赖性分析、软琼脂分析结果及染色体核型分析均表明永生化SMSCs未发生恶性转化。然而,在诱导分化模型中,转染后的SMSCs未能形成明显的肌管结构,与原代细胞有所不同。结论:本研究成功构建了慢病毒转染SV40-LT基因,成功建立稳定表达SV40-LT的树鼩原代SMSCs模型,不仅探究了建立成熟永生化实验体系的过程,而且提高了树鼩原代SMSCs的增殖能力和细胞活力,为永生化细胞建系研究提供了技术依据。 展开更多
关键词 树鼩 骨骼肌卫星细胞 SV40-lt基因
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大鼠Kupffer细胞分离、培养及永生化实现 被引量：3
6
作者 毛德文 裴燕燕 王明刚 《大众科技》 2017年第12期35-37,共3页
枯否细胞(Kupffer Cells,KC)是肝脏免疫防御的第一道防线,其与多种肝脏疾病密切关联。Kupffer细胞分离纯化技术要求较高,且该细胞分化增殖能力极弱,成为开展大规模细胞实验的主要障碍。课题组简化了Kupffer细胞分离纯化步骤,构PDS152_p ... 枯否细胞(Kupffer Cells,KC)是肝脏免疫防御的第一道防线,其与多种肝脏疾病密切关联。Kupffer细胞分离纯化技术要求较高,且该细胞分化增殖能力极弱,成为开展大规模细胞实验的主要障碍。课题组简化了Kupffer细胞分离纯化步骤,构PDS152_p Lenti-GFP-IRES-SV40LT表达载体,包装形成慢病毒颗粒侵染Kupffer细胞,侵染后细胞生长速度变快,能多次传代,细胞状态稳定,巨噬细胞特异性标志F4/80呈阳性表达。将SV40LT片段导入Kupffer细胞可实现细胞永生化,且转染后的kupffer细胞仍维持巨噬细胞的功能特性。 展开更多
关键词 KUPFFER细胞 SV40-lt片段 永生化 特性
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鸡骨骼肌卫星细胞系的建立及分析 被引量：1
7
作者 王燕星 张雨时 +7 位作者 姬海港 刘阳 牛玉芳 韩瑞丽 刘小军 田亚东 康相涛 李转见 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4972-4981,共10页
旨在通过慢病毒包装SV 40-LT基因并转导PMSCs以构建鸡骨骼肌卫星细胞系。本研究采集20~30枚15胚龄健康AA鸡的胸部组织,采用混合酶消化法分离培养PMSCs。将细胞随机分为两组,每组3个重复,处理组选择SV 40-LT慢病毒转染48 h后,更换含1μg&... 旨在通过慢病毒包装SV 40-LT基因并转导PMSCs以构建鸡骨骼肌卫星细胞系。本研究采集20~30枚15胚龄健康AA鸡的胸部组织,采用混合酶消化法分离培养PMSCs。将细胞随机分为两组,每组3个重复,处理组选择SV 40-LT慢病毒转染48 h后,更换含1μg·mL^(-1)的嘌呤霉素筛选培养基于处理组和对照组(病毒不转染)。待对照组细胞全部死亡,对处理组细胞进行不断传代培养,最终获得鸡骨骼肌卫星细胞系。免疫荧光试验分析鸡骨骼肌卫星细胞标志基因PAX7的表达;采用CCK-8和细胞周期分析检测细胞增殖特性;血清依赖性和软琼脂分析检测其恶性转化情况;构建诱导分化模型检测其诱导分化能力。结果表明,PMSCs中有92%细胞PAX 7基因呈阳性,可用于后续研究。SV 40-LT基因在鸡骨骼肌卫星细胞系(IMSCs P12)中的表达是原代鸡骨骼肌卫星细胞的15倍,且连续传代至12代后,IMSCs P12与PMSCs均呈纤维样状。IMSCs P12具有更高的增殖活性且没有发生恶性转化,随后,对IMSCs P12进行诱导分化,在其增殖至70%到诱导分化1 d这一阶段,IMSCs P12与PMSCs的PAX 7基因表达下调,而MyoD和MyHC基因表达上调。结果提示,本研究通过转染SV 40-LT基因成功培养了鸡骨骼肌卫星细胞系,其具有与原代鸡骨骼肌卫星细胞相似的特性。该细胞系的建立为研究家禽骨骼肌相关的功能基因提供了新的平台,也为SV 40-LT基因在家禽细胞永生化的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 骨骼肌卫星细胞 SV 40-lt 细胞系 PAX 7
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