三叉神经痛(trigeminal neuralgia)是临床上的顽疾,长期以来为医学界所重视,但其发病机制尚不清晰,临床上也无有效的治疗方法。本研究首先通过免疫荧光化学法和动物行为学测定,对经眶下孔达三叉神经节目标注射给药法的效果进行了评价,...三叉神经痛(trigeminal neuralgia)是临床上的顽疾,长期以来为医学界所重视,但其发病机制尚不清晰,临床上也无有效的治疗方法。本研究首先通过免疫荧光化学法和动物行为学测定,对经眶下孔达三叉神经节目标注射给药法的效果进行了评价,然后行眶下神经慢性缩窄环术(chronic constriction injury of the infraorbital nerve,ION-CCI)建立三叉神经病理性痛大鼠模型,用经眶下孔达三叉神经节目标注射法分别注射BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP,观察药物对大鼠面部机械痛阈的影响。结果显示,通过经眶下孔达三叉神经节目标注射法,药物可以准确到达三叉神经节,并产生了比一般眶下孔注射给药法更为持久的注射效果。ION-CCI术后第6天大鼠术侧面部触须垫部产生了显著的异常性疼痛(allodynia),并可以维持到至少术后第42天。在ION-CCI术后第15天大鼠,运用经眶下孔达三叉神经节目标注射法注射BKCa通道激动剂NS1619可以剂量依赖性地显著提高ION-CCI组大鼠的面部机械痛阈,逆转面部痛觉过敏;而在ION-CCI术后第35天痛阈部分恢复的大鼠,同样方法注射Kv通道拮抗剂4-AP又可以显著降低面部痛阈。以上结果表明,BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP可以显著影响ION-CCI大鼠的面部机械痛阈,提示激活BKCa通道可以抑制由ION-CCI引起的三叉神经病理性痛,而激活Kv通道可能对ION-CCI引起的三叉神经病理痛有紧张性的抑制作用。展开更多
AP-4(activator protein 4)是一种转录因子,在生物的生长发育中有重要作用。根据家蚕表达序列标签(EST)并利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了家蚕AP-4(Bombyx mori activator protein4)基因,结合生物信息学方法对所获的序列进行开放...AP-4(activator protein 4)是一种转录因子,在生物的生长发育中有重要作用。根据家蚕表达序列标签(EST)并利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了家蚕AP-4(Bombyx mori activator protein4)基因,结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,预测了AP-4蛋白的理化性质。获得的家蚕AP-4基因cDNA的全长为1621bp,其开放阅读框为996bp,编码331个氨基酸,基因由3个外显子和2个内含子组成。同源性比对表明该基因推导的氨基酸序列与棉铃虫AP-4和谷蛀虫AP-4推测的蛋白同源性分别为76%和54%,第45-99位氨基酸序列是一个典型的保守结构域。实时定量RT-PCR显示该基因在所检测家蚕的各发育时期中,除幼虫1龄和蛹期第4天无表达外,其它时期均有表达,其中幼虫3龄和4龄期的表达量较高。展开更多
本研究利用生物信息学分析AP-4与胃癌患者临床病理信息的相关性,根据GenBank中人AP-4基因cDNA序列设计并合成特异性引物,以胃癌细胞总RNA逆转录的cDNA为模板,利用高保真酶扩增AP-4基因CDS (Coding DNA sequence)序列并构建入pcDNA3.1+载...本研究利用生物信息学分析AP-4与胃癌患者临床病理信息的相关性,根据GenBank中人AP-4基因cDNA序列设计并合成特异性引物,以胃癌细胞总RNA逆转录的cDNA为模板,利用高保真酶扩增AP-4基因CDS (Coding DNA sequence)序列并构建入pcDNA3.1+载体,并通过限制性内切酶酶切分析和测序法进行进一步验证;脂质体法将AP-4重组表达载体及对照pcDNA3.1+载体转染胃癌细胞,qRT-PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction)和Western blotting检测分别检测AP-4在m RNA和蛋白水平的表达。生物信息学分析发现,AP-4的表达与胃癌分期及预后显著相关;酶切及测序分析表明,转录因子AP-4真核表达载体构建成功,并能够在胃癌细胞中实现转录和蛋白水平的高效表达。此研究为深入研究转录因子AP-4在胃癌等肿瘤发生发展中的作用及分子机制奠定了基础。展开更多
基金supported by the Basic Research Program of Science and Technology Commission of Shanghai MunicipalityChina(No.08JC1405400)
文摘三叉神经痛(trigeminal neuralgia)是临床上的顽疾,长期以来为医学界所重视,但其发病机制尚不清晰,临床上也无有效的治疗方法。本研究首先通过免疫荧光化学法和动物行为学测定,对经眶下孔达三叉神经节目标注射给药法的效果进行了评价,然后行眶下神经慢性缩窄环术(chronic constriction injury of the infraorbital nerve,ION-CCI)建立三叉神经病理性痛大鼠模型,用经眶下孔达三叉神经节目标注射法分别注射BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP,观察药物对大鼠面部机械痛阈的影响。结果显示,通过经眶下孔达三叉神经节目标注射法,药物可以准确到达三叉神经节,并产生了比一般眶下孔注射给药法更为持久的注射效果。ION-CCI术后第6天大鼠术侧面部触须垫部产生了显著的异常性疼痛(allodynia),并可以维持到至少术后第42天。在ION-CCI术后第15天大鼠,运用经眶下孔达三叉神经节目标注射法注射BKCa通道激动剂NS1619可以剂量依赖性地显著提高ION-CCI组大鼠的面部机械痛阈,逆转面部痛觉过敏;而在ION-CCI术后第35天痛阈部分恢复的大鼠,同样方法注射Kv通道拮抗剂4-AP又可以显著降低面部痛阈。以上结果表明,BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP可以显著影响ION-CCI大鼠的面部机械痛阈,提示激活BKCa通道可以抑制由ION-CCI引起的三叉神经病理性痛,而激活Kv通道可能对ION-CCI引起的三叉神经病理痛有紧张性的抑制作用。
文摘AP-4(activator protein 4)是一种转录因子,在生物的生长发育中有重要作用。根据家蚕表达序列标签(EST)并利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了家蚕AP-4(Bombyx mori activator protein4)基因,结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,预测了AP-4蛋白的理化性质。获得的家蚕AP-4基因cDNA的全长为1621bp,其开放阅读框为996bp,编码331个氨基酸,基因由3个外显子和2个内含子组成。同源性比对表明该基因推导的氨基酸序列与棉铃虫AP-4和谷蛀虫AP-4推测的蛋白同源性分别为76%和54%,第45-99位氨基酸序列是一个典型的保守结构域。实时定量RT-PCR显示该基因在所检测家蚕的各发育时期中,除幼虫1龄和蛹期第4天无表达外,其它时期均有表达,其中幼虫3龄和4龄期的表达量较高。
文摘本研究利用生物信息学分析AP-4与胃癌患者临床病理信息的相关性,根据GenBank中人AP-4基因cDNA序列设计并合成特异性引物,以胃癌细胞总RNA逆转录的cDNA为模板,利用高保真酶扩增AP-4基因CDS (Coding DNA sequence)序列并构建入pcDNA3.1+载体,并通过限制性内切酶酶切分析和测序法进行进一步验证;脂质体法将AP-4重组表达载体及对照pcDNA3.1+载体转染胃癌细胞,qRT-PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction)和Western blotting检测分别检测AP-4在m RNA和蛋白水平的表达。生物信息学分析发现,AP-4的表达与胃癌分期及预后显著相关;酶切及测序分析表明,转录因子AP-4真核表达载体构建成功,并能够在胃癌细胞中实现转录和蛋白水平的高效表达。此研究为深入研究转录因子AP-4在胃癌等肿瘤发生发展中的作用及分子机制奠定了基础。
