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羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层材料的理化性质及生物相容性
1
作者 李丛丛 吾凡别克·巴合提 +3 位作者 赵莉 陈晓涛 孔垂范 俞敏 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第2期404-413,共10页
背景:纯钛及钛合金种植体因良好的生物相容性及弹性模量被广泛应用于种植修复领域,但钛基种植体表面的生物惰性导致其与周围骨组织的整合性较差,需要进行表面修饰提高钛基种植体的骨整合能力。目的:在纯钛片表面制备羟基磷灰石/氧化石墨... 背景:纯钛及钛合金种植体因良好的生物相容性及弹性模量被广泛应用于种植修复领域,但钛基种植体表面的生物惰性导致其与周围骨组织的整合性较差,需要进行表面修饰提高钛基种植体的骨整合能力。目的:在纯钛片表面制备羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层材料,探究涂层材料的理化性能与生物相容性。方法:通过电化学沉积法及浸泡冻干法在钛片表面制备负载羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层,同时制备负载白细胞介素4的钛片与负载羟基磷灰石/氧化石墨烯涂层的钛片,表征纯钛片及上述3种钛片的理化性能。将MC3T3-E1细胞分别接种于纯钛片及上述3种钛片的表面,通过CCK-8、DAPI染色检测细胞增殖,Calcein-AM/PI染色检测细胞活性,扫描电镜观察细胞形态与黏附。结果与结论:①扫描电镜、X射线能量色散谱、X射线光电子能谱、X射线衍射谱、拉曼光谱检测显示,在钛片表面成功制备了羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层。羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4组水接触角大于纯钛组、羟基磷灰石/氧化石墨烯组,小于白细胞介素4组。②CCK-8、DAPI染色结果显示,羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层可促进MC3T3-E1细胞增殖。Calcein-AM/PI染色结果显示,羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层组MC3T3-E1细胞活性较高,较少见死细胞。扫描电镜下可见MC3T3-E1细胞黏附于4组材料表面,细胞形态良好,相较于纯钛组,白细胞介素4组MC3T3-E1细胞伸出伪足更多,细胞间联系更加紧密,黏附面积更大;相较于羟基磷灰石/氧化石墨烯组,羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4组MC3T3-E1细胞伸出伪足更多,细胞间联系更加紧密,黏附面积更大。③结果表明,羟基磷灰石/氧化石墨烯/白细胞介素4涂层具有良好的理化性能及生物学性能。 展开更多
关键词 氧化石墨烯 羟基磷灰石 白细胞介素4 种植体复合涂层 MC3T3-E1细胞 生物相容性 工程化材料
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绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜的促成骨效应
2
作者 孙蕾 张琦 张宇 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第8期1877-1884,共8页
背景:绿原酸具有抗菌、抗病毒、促成骨等作用,但水溶性较差限制了其生物活性。目的:观察绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜的促成骨效应。方法:(1)以绿原酸、牛血清蛋白和壳聚糖为原料,通过去溶剂法和静电吸附技术制备绿原酸蛋白微球... 背景:绿原酸具有抗菌、抗病毒、促成骨等作用,但水溶性较差限制了其生物活性。目的:观察绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜的促成骨效应。方法:(1)以绿原酸、牛血清蛋白和壳聚糖为原料,通过去溶剂法和静电吸附技术制备绿原酸蛋白微球。表征绿原酸蛋白微球的微观形貌、粒径大小、Zeta电位与药物包封率。将对数生长期的MC3T3-E1细胞分3组培养:对照组不进行任何处理,绿原酸组加入10 mg/L绿原酸,绿原酸蛋白微球组加入50 mg/L绿原酸蛋白微球,检测细胞增殖、成骨诱导后的碱性磷酸酶活性以及过氧化氢诱导氧化应激下的活性氧水平。(2)利用静电纺丝技术分别制备聚己内酯静电纺丝膜与绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜,扫描电镜观察静电纺丝膜的微观形貌。将对数生长期的MC3T3-E1细胞分4组培养:对照组不进行任何处理,绿原酸组加入10 mg/L绿原酸,聚己内酯组加入聚己内酯静电纺丝膜,微球纺丝膜组加入绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜,成骨诱导7 d后,RT-qPCR检测RUNX2、碱性磷酸酶mRNA表达,Western blot检测RUNX2、碱性磷酸酶蛋白表达。结果与结论:(1)绿原酸蛋白微球为表面光滑的双层结构,粒径较为均一,平均粒径(322.38±8.39)nm,Zeta电位为(42.85±2.11)mV,药物包封率为(57.16±7.32)%。绿原酸与绿原酸蛋白微球均可促进MC3T3-E1细胞增殖与早期成骨分化,降低氧化应激反应的活性氧水平。(2)两组静电纺丝膜均为孔隙较多的3D网状结构,聚己内酯静电纺丝表面较光滑,纺丝直径也较为一致,绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜表面出现较多球状突起,纺丝直径差异较大。绿原酸与绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜均可提高MC3T3-E1细胞内RUNX2、碱性磷酸酶mRNA与蛋白表达。结果表明,绿原酸蛋白微球/聚己内酯静电纺丝膜可促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 绿原酸 MC3T3-E1细胞 成骨 蛋白微球 静电纺丝 细胞增殖 细胞分化 工程化骨材料
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骨松汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导成骨细胞铁死亡的影响及机制
3
作者 王莉莎 郭中华 +7 位作者 王上增 史栋梁 张仲博 任博文 王云飞 周晓宁 王俊杰 杨少祥 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第10期1405-1412,共8页
目的探究骨松汤含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)铁死亡的影响及其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)筛选骨松汤含药血清和铁抑制素-1(Fer-1)处理浓度。选择合适剂量的骨松汤含药血清和Fe... 目的探究骨松汤含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)铁死亡的影响及其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)筛选骨松汤含药血清和铁抑制素-1(Fer-1)处理浓度。选择合适剂量的骨松汤含药血清和Fer-1干预,荧光探针检测亚铁离子(Fe^(2+))和活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平及碱性磷酸酶(ALP)活性;比色法检测谷胱甘肽(GSH)水平;茜素红S染色检测钙结节吸光度(OD)值;免疫印迹检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰-Co A合成酶4(ACSL4)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)蛋白表达。细胞过表达NOX4,检测铁死亡相关指标(GPX4和ACSL4蛋白表达、GSH水平、MDA含量)和细胞成骨功能(ALP活性和钙结节OD值)。结果H_(2)O_(2)诱导MC3T3-E1细胞铁死亡。与H_(2)O_(2)组相比,骨松汤含药血清和Fer-1干预显著提高了细胞存活率、SOD和CAT活性、GSH水平以及GPX4蛋白表达(P<0.05),降低细胞MDA含量、Fe^(2+)和ROS水平以及NOX4与ACSL4蛋白表达(P<0.05)。NOX4过表达抑制了骨松汤含药血清对H_(2)O_(2)处理MC3T3-E1细胞铁死亡和成骨功能的保护作用。结论骨松汤含药血清能够抑制H_(2)O_(2)诱导的MC3T3-E1细胞铁死亡,这可能与其抑制NOX4/ROS信号通路活化有关。 展开更多
关键词 骨松汤含药血清 过氧化氢 MC3T3-E1细胞 铁死亡 NOX4 成骨细胞
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负载纳米钽的液晶显示光固化聚乳酸支架制备及促成骨性能
4
作者 李明哲 叶翔凌 +1 位作者 王冰 余翔 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第4期670-677,共8页
背景:聚乳酸因具有良好的生物相容性和可控的降解速率在生物医学工程中得到了广泛应用,然而存在机械强度低和生物活性不足等缺陷,限制了其在骨组织工程中的进一步应用。目的:构建聚乳酸/聚多巴胺/钽(PLA/PDA/Ta)骨组织工程支架,探究其... 背景:聚乳酸因具有良好的生物相容性和可控的降解速率在生物医学工程中得到了广泛应用,然而存在机械强度低和生物活性不足等缺陷,限制了其在骨组织工程中的进一步应用。目的:构建聚乳酸/聚多巴胺/钽(PLA/PDA/Ta)骨组织工程支架,探究其生物安全性和体外促成骨性能。方法:利用液晶显示光固化技术制备具有多孔结构的聚乳酸(PLA)支架,将PLA支架分别浸泡在多巴胺溶液与多巴胺-纳米钽混合溶液中分别制备聚乳酸/聚多巴胺(PLA/PDA)支架、PLA/PDA/Ta支架,表征支架的微观形貌与水接触角。将MC3T3-E1细胞分别与PLA、PLA/PDA、PLA/PDA/Ta支架共培养,进行CCK-8检测与活/死细胞染色;成骨诱导分化后,进行碱性磷酸酶、茜素红染色及成骨基因检测。结果与结论:①扫描电镜下可见3种支架均具有互连的多孔三维结构,平均孔径为200μm;PLA/PDA/Ta支架的水接触角低于PLA、PLA/PDA支架(P<0.05);②CCK-8检测显示,相较于PLA、PLA/PDA支架,PLA/PDA/Ta支架可促进细胞的增殖(P<0.05);活/死细胞染色显示3组细胞增殖良好;③碱性磷酸酶与茜素红染色显示,相较于PLA、PLA/PDA支架,PLA/PDA/Ta支架可促进细胞碱性磷酸酶的表达与矿化结节形成;RT-qPCR检测显示,相较于PLA、PLA/PDA支架,PLA/PDA/Ta支架可促进细胞骨形态发生蛋白、Runx-2及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05,P<0.01);④结果表明,PLA/PDA/Ta支架具有优异的促细胞增殖与成骨活性。 展开更多
关键词 液晶显示光固化打印 聚乳酸 聚多巴胺 纳米钽 MC3T3-E1细胞 骨组织工程支架
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骨疏康对MC3T3-E1细胞成骨分化及大鼠磨牙压低牙根吸收作用影响的研究
5
作者 万哲 杜军 肖朋 《新疆医科大学学报》 2025年第9期1292-1298,共7页
目的探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8... 目的探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8)法检测骨疏康含药血清对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)的增殖活性。将细胞分为对照组、骨疏康含药血清组(10%骨疏康含药血清培养24 h)和骨疏康含药血清+MSAB组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂,10%骨疏康含药血清和5μmol/L MSAB培养24 h),采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红S(Alizarin red S,ARS)染色观察细胞成骨分化能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt family member 3A,Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达。取12只大鼠建立磨牙压低模型,将建模成功大鼠随机分为模型组和骨疏康组(骨疏康,2.1 g/kg,每天1次,连续4 w),每组6只,另取6只未建模大鼠为正常组;采用Western blot法检测磨牙组织Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平。结果CCK8结果显示,与对照组相比,骨疏康含药血清组的细胞增殖活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,骨疏康含药血清组ALP活性、ALP和ARS染色强度升高,Runx2、BMP2、Wnt3a和β-catenin的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与骨疏康含药血清组相比,骨疏康含药血清+MSAB组ALP活性、ALP染色强度降低,Runx2和BMP2的蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。动物实验结果显示,与正常组相比,模型组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,骨疏康组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨疏康通过介导Wnt/β-catenin通路促进MC3T3-E1细胞及大鼠磨牙组织的成骨分化。 展开更多
关键词 骨疏康 成骨分化 MC3T3-E1细胞 信号通路
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姜黄素通过上调circRNA_SLC8A1表达促进小鼠的骨折愈合
6
作者 马运锋 韩小飞 《沈阳药科大学学报》 2025年第10期978-988,共11页
目的 研究circRNA_SLC8A1在姜黄素促进骨折愈合中发挥的作用,以及其潜在的作用机制。方法 采用RT-qPCR检测骨折患者和健康志愿者外周血中circRNA_SLC8A1表达水平,以及姜黄素干预的成骨细胞MC3T3-E1中circRNA_SLC8A1表达水平;采用star B... 目的 研究circRNA_SLC8A1在姜黄素促进骨折愈合中发挥的作用,以及其潜在的作用机制。方法 采用RT-qPCR检测骨折患者和健康志愿者外周血中circRNA_SLC8A1表达水平,以及姜黄素干预的成骨细胞MC3T3-E1中circRNA_SLC8A1表达水平;采用star Base预测了miR-20b-5p分别与circRNA_SLC8A1和死骨片1(Sequestosome 1,SQSTM1)结合,并通过荧光素酶报告基因分析进行验证。用0、5、10、20、40、80μmol·L^(-1)的姜黄素处理MC3T3-E1细胞72 h,用携带circRNA_SLC8A1的腺病毒载体(sh-circRNA_SLC8A1)、miR-20b-5p mimic、miR-20b-5p inhibitor、SQSTM1的过表达载体(OE-SQSTM1)、SQSTM1的小干扰RNA(si-SQSTM1)和所对应的空白对照转染MC3T3-E1细胞,分别采用CCK-8、Transw ell分析和流式细胞术检测细胞增殖、迁移和凋亡;采用ELISA检测caspase-3活性;采用Western blotting检测骨源性碱性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase,BALP)和骨钙素(osteocalcin)的蛋白表达水平。除此之外,还构建了小鼠股骨骨折模型,检测建模后21 d小鼠股骨中circRNA_SLC8A1的表达水平变化;Micro-CT分析观察小鼠股骨组织中骨体积(bone volume,BV)、骨小梁体积(trabecular bone volume,TV)和骨密度(bone mineral density,BMD);H&E染色股骨组织切片,显微镜下观察记录骨面积和愈伤组织骨痂面积。结果 circRNA_SLC8A1在骨折患者的外周血中的表达水平显著降低,在骨折小鼠的股骨组织中的表达水平在第7天时达到最低值,随后开始升高。此外,40μmol·L^(-1)的姜黄素处理MC3T3-E1细胞24 h无毒性,48 h后细胞活性降低,我们还发现姜黄素以剂量依赖诱导circRNA_SLC8A1表达水平升高。沉默circRNA_SLC8A1抑制MC3T3-E1细胞的增殖、迁移,诱导细胞凋亡,而姜黄素的处理逆转了这一影响。随后,我们通过验证发现miR-20b-5p能够分别与circRNA_SLC8A1和SQSTM1结合,且circRNA_SLC8A1通过充当miR-20b-5p的海绵上调SQSTM1的表达水平。miR-20b-5p inhibitor或OE-SQSTM1转染M C3T3-E1细胞,促进细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡和caspase-3活化。体内实验发现,骨折小鼠的BV/TV、BMD和骨面积显著减小,愈伤组织骨痂面积增大,股骨组织中circRNA_SLC8A1、SQSTM1、BALP和osteocalcin的表达水平显著降低,miR-20b-5p的表达水平升高;而姜黄素处理增大了小鼠的BV/TV、BMD和骨面积,减小了愈伤组织骨痂面积,促进了股骨组织中circRNA_SLC8A1、SQSTM1、BALP和osteocalcin的表达水平,抑制了miR-20b-5p的表达,高剂量姜黄素效果更佳;除此之外,注射携带circRNA_SLC8A1过表达载体的腺病毒(Lv-circRNA_SLC8A1)同样促进了小鼠的骨折愈合。结论 姜黄素抑制骨折小鼠股骨组织中circRNA_SLC8A1的表达水平降低,经miR-20b-5p/SQSTM1轴加速骨折愈合。 展开更多
关键词 姜黄素 骨折愈合 circRNA_SLC8A1 MC3T3-E1细胞 miR-20b-5p/SQSTM1轴
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红景天苷促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力的体外实验 被引量：4
7
作者 刘朝辉 韩晓谦 +2 位作者 段昕 郭鹏达 张云涛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第2期231-237,共7页
背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因... 背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因和蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8实验和碱性磷酸酶实验筛选红景天苷(0.5,1,5,10,50μmol/L)促进MC3T3-E1细胞增殖和分化的最佳浓度。实验分为4组:对照组、红景天苷组、红景天苷+LY294002组、LY294002组,分别用成骨诱导液、含10μmol/L红景天苷、10μmol/L红景天苷+10μmol/L LY294002、10μmol/L LY294002的成骨诱导液进行培养,观察红景天苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对成骨相关基因和蛋白表达的影响。结果与结论:①CCK-8实验和碱性磷酸酶实验显示:红景天苷促进MC3T3-E1细胞增殖的作用在10μmol/L时最显著;②与对照组相比,红景天苷可以促进矿化、促进细胞黏附、减少细胞死亡,提高Runx-2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达(P<0.01),提高Runx-2和p-Akt蛋白表达(P<0.01);而添加PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002则可逆转以上结果;③结果表明,红景天苷能促进MC3T3-E1细胞矿化,并能促进成骨相关基因、蛋白的表达,这可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 红景天苷 MC3T3-E1细胞 细胞分化 成骨 矿化 LY294002 PI3K/AKT信号通路
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马钱苷对成骨细胞及成骨细胞-破骨细胞耦联的影响
8
作者 王玉 杨林涛 +3 位作者 孙博宇 刘宇 兰天 曾以德 《中国细胞生物学学报》 2025年第8期1853-1861,共9页
该研究在促进成骨细胞分化的基础上,探讨马钱苷(Loganin)对成骨细胞-破骨细胞耦联功能的影响。以小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)为实验对象,通过CCK-8法检测Loganin对MC3T3-E1细胞活性的影... 该研究在促进成骨细胞分化的基础上,探讨马钱苷(Loganin)对成骨细胞-破骨细胞耦联功能的影响。以小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)为实验对象,通过CCK-8法检测Loganin对MC3T3-E1细胞活性的影响;碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性试剂盒及茜素红染色评估Loganin对成骨细胞分化的影响;qRT-PCR法检测成骨分化相关基因的表达情况;Western blot法检测成骨分化相关蛋白的表达情况;共培养系统检测Loganin对成骨细胞-破骨细胞耦联的影响;TRAP染色和F-actin染色评估破骨细胞形成及破骨细胞吸收功能;qRT-PCR法检测破骨分化相关基因的表达。结果显示,Loganin在一定浓度范围(0.1μmol/L和1μmol/L)内显著提高MC3T3-E1细胞的活性、ALP活性以及促进矿化结节的形成,且具有浓度依赖性。此外,Loganin(1μmol/L)显著上调成骨分化标志物Runx2、OSX和OPG的基因表达水平以及Runx2、OPG和ALP的蛋白表达水平,并且下调RANKL的基因及蛋白表达水平。共培养实验中,含Loganin的条件培养基显著抑制破骨细胞及F-actin吸收环的形成,且下调CTSK、TRAP基因的表达。因此,Loganin在促进成骨分化的基础上,可能通过上调OPG和下调RANKL来影响成骨细胞–破骨细胞的耦联,进而抑制破骨细胞的生成功能和破骨细胞的吸收功能,调节骨代谢平衡。 展开更多
关键词 马钱苷 MC3T3-E1细胞 RAW264.7细胞 成骨细胞-破骨细胞耦联
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黄芪甲苷可缓解MC3T3-E1细胞氧化应激损伤并促进成骨 被引量：3
9
作者 张加豪 李嘉程 +3 位作者 温明韬 郭艳波 骆帝 李刚 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第17期3529-3536,共8页
背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的... 背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的作用。方法:将MC3T3-E1细胞分4组培养:对照组加入完全培养基,模型组加入含过氧化氢的完全培养基干预24 h后更换为完全培养基,黄芪甲苷组加入含过氧化氢、黄芪甲苷的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷的完全培养基,抑制剂组加入含过氧化氢、黄芪甲苷、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)抑制剂的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷、ERK抑制剂的完全培养基。过氧化氢干预48 h后,通过丙二醛含量检测黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞氧化应激的缓解作用;过氧化氢干预48 h后进行成骨诱导培养,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色验证MC3T3-E1细胞成骨及矿化能力,通过RT-qPCR检测成骨相关基因的表达,Western blot检测成骨相关蛋白及ERK/腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路蛋白的表达。结果与结论:(1)模型组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均少于对照组(P<0.05),黄芪甲苷组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均多于模型组(P<0.05)。(2)与对照组比较,模型组细胞内丙二醛含量增加(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05),AMPK mRNA与p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷组细胞内丙二醛含量减少(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均升高(P<0.05),ERK1/2、AMPK mRNA表达升高(P<0.05),p-AMPK、p-ERK1/2蛋白表达均升高(P<0.05);ERK抑制剂可部分抑制黄芪甲苷的上述作用。(3)结果表明,黄芪甲苷可通过激活ERK/AMPK信号通路促进氧化应激条件下MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 骨质疏松症 MC3T3-E1细胞 氧化应激 ERK/AMPK信号通路 成骨 工程化骨材料
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川续断皂苷Ⅵ促进低氧环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化 被引量：1
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作者 李蕴喆 牛泽蕃 +3 位作者 王紫瑈 艾崇毅 陈刚 王新兴 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第35期7481-7489,共9页
背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确。目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O... 背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确。目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O_(2))用完全培养基培养,低氧组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O_(2))用完全培养基培养,川续断皂苷Ⅵ组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O_(2))用含有川续断皂苷Ⅵ的完全培养基培养。24 h后,采用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖活性,TUNEL染色法和Western blot实验检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧水平和细胞周期分布。另外,各组细胞在低氧条件下分别用含1×10^(-5),1×10^(-6),1×10^(-7)mol/L川续断皂苷Ⅵ的成骨诱导液培养7 d,通过光学显微镜观察和碱性磷酸酶染色筛选川续断皂苷Ⅵ最适浓度,采用Western blot方法检测骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、PI3K/AKT信号轴相关蛋白表达。结果与结论:①与对照组相比,低氧条件下MC3T3-E1细胞增殖能力下降,1×10^(-6)mol/L川续断皂苷Ⅵ可以显著提高低氧状态下细胞增殖能力,并且减少细胞凋亡;②与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组细胞内活性氧减少,进入S期细胞比例明显增多;③与低氧组相比,1×10^(-6)mol/L川续断皂苷Ⅵ组细胞形态舒展,较多突起,碱性磷酸酶染色较深;④与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白表达增加,p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低。结果表明,低氧环境下川续断皂苷Ⅵ可能通过调节PI3K/AKT通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化。 展开更多
关键词 MC3T3-E1细胞 低氧 川续断皂苷Ⅵ PI3K AKT 通路 细胞分化 成骨
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淫羊藿苷调控LAP自噬促进酒精抑制的MC3T3-E1细胞成骨分化 被引量：2
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作者 曾麒 陈跃平 +2 位作者 宋世雷 赖渝 吴华华 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第3期590-599,共10页
研究细胞自噬在MC3T3-E1细胞成骨诱导(生理)、酒精(alcohol,AL)干预(病理)分化过程中的影响机制,以及淫羊藿苷(icariin,ICA)对AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。成骨矿化结节染色鉴定该细胞可分化为成骨细胞。CCK-8实... 研究细胞自噬在MC3T3-E1细胞成骨诱导(生理)、酒精(alcohol,AL)干预(病理)分化过程中的影响机制,以及淫羊藿苷(icariin,ICA)对AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。成骨矿化结节染色鉴定该细胞可分化为成骨细胞。CCK-8实验筛选合适的AL和ICA浓度后,实验分为7组:完全培养基(complete medium,CM)组,成骨诱导培养基(osteogenic induction medium,OIM)组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-8)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-7)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-6)mol·L^(-1)ICA组,OIM+0.25 mol·L^(-1)AL+1×10^(-5)mol·L^(-1)ICA组,培养7 d。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测ALP相对面积,Western blot、RT-qPCR检测成骨、自噬相关蛋白及mRNA表达情况,活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色检测ROS水平,细胞凋亡线粒体膜电位实验检测细胞凋亡情况。结果显示,ICA可上调AL干预后下调的ALP相对面积;AL下调成骨相关蛋白Wnt家族成员1(Wnt family member 1 gene,Wnt1)及成骨相关基因Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、核心结合因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、ALP的表达水平,抑制细胞成骨分化,ICA可上调AL抑制的成骨相关蛋白及mRNA的表达水平,促进细胞成骨分化;AL抑制典型自噬,ICA调控Rubicon抑制LC3相关吞噬作用(LC3-associated phagocytosis,LAP)促进典型自噬;ICA下调AL诱导后上升的ROS水平;ICA下调AL干预后导致的成骨细胞凋亡。综上,ICA可调控Rubicon抑制LAP促进典型自噬,清除ROS减少细胞凋亡,最终通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进AL干预病理状态下MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 酒精 成骨细胞 MC3T3-E1细胞 Wnt1/β-catenin通路 成骨分化 骨代谢失衡 自噬 LAP
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基于MFBN-YOLOv5输电线路绝缘子缺陷检测研究 被引量：2
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作者 王凯 黄陈蓉 +1 位作者 顾杰 季星宇 《计算技术与自动化》 2025年第1期80-87,共8页
针对输电线路上绝缘子检测效率低下的问题,提出了一种绝缘子缺陷检测模型MFBN-YOLOv5。首先针对骨干网络中特征提取能力不足的问题,本文设计了MC3模块替换骨干网络中的C3模块,在骨干网络尾部引入了Fenhence模块,模块采用卷积与空洞卷积... 针对输电线路上绝缘子检测效率低下的问题,提出了一种绝缘子缺陷检测模型MFBN-YOLOv5。首先针对骨干网络中特征提取能力不足的问题,本文设计了MC3模块替换骨干网络中的C3模块,在骨干网络尾部引入了Fenhence模块,模块采用卷积与空洞卷积串联的方式,有效扩大感受野并增强特征提取。其次,为了改进模型特征融合的能力,在颈部引入BiFPN结构,提升网络对绝缘子不同缺陷的特征融合能力。最后,边界回归损失函数使用NWD(Normalized Wasserstein Distance)度量方式,提高了在复杂背景条件下模型对绝缘子缺陷的定位精度。实验结果表明,改进后的MFBN-YOLOv5模型可以快速、准确地检测绝缘子的缺陷,平均精度均值(mAP0.5)达到95.6%,比原YOLOv5s模型高3.9%,能够满足日常电力巡检的需求。 展开更多
关键词 绝缘子缺陷 MC3 空洞卷积 改进特征融合 NWD
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环状RNA mmu_circ_0000818在地塞米松导致的MC3T3-E1细胞凋亡中的作用及机制
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作者 杨慧霞 丁宁 +5 位作者 马润秋 李桂忠 郝银菊 马胜超 姜怡邓 白志刚 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第4期478-489,共12页
目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dex... 目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dexamethasone(DEX)组;(2)采用Western blot检测各组细胞BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;(3)提取正常和DEX处理的MC3T3-E1细胞RNA,进行RNA测序,筛选出差异表达的circRNAs,并通过GO和KEGG分析其功能;(4)筛选出差异表达的mmu_circ_0000818并进行细胞水平验证以及UCSC Genome Browser Gateway和circbase网站分析mmu_circ_0000818在染色体的位置和保守性;(5)构建mmu_circ_0000818过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)并转染细胞,流式细胞术检测各组MC3T3-E1细胞凋亡情况。结果(1)与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞凋亡升高(P<0.01);(2)根据log2foldchange(≥2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的circRNAs,与Control组相比,DEX组中共有234个表达差异的circRNAs,其中上调的138个,下调的96个。差异表达circRNAs的靶基因利用GO和KEGG进行富集分析,Apoptosis(凋亡)和PI3K-Akt signaling pathway(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路)差异最显著。(3)qRT-PCR结果显示,与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞中mmu_circ_0000818表达明显升高(P<0.01),UCSC Genome Browser Gateway和circbase分析发现mmu_circ_0000818主要位于17:78712463-78715086,由Crim1基因第6~7外显子环化形成并且在不同物种间具有高的保守性。(4)流式细胞术结果提示抑制mmu_circ_0000818可改善DEX引起的MC3T3-E1细胞凋亡,过表达则促进其凋亡。结论mmu_circ_0000818在DEX处理的MC3T3-E1细胞中显著增高,降低其可抑制DEX引起的细胞凋亡。 展开更多
关键词 环状RNA mmu_circ_0000818 地塞米松 MC3T3-E1细胞 RNA测序 凋亡
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右归丸入血成分对Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK通路相关因子mRNA表达的影响
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作者 商佳璐 叶怡馨 +2 位作者 王娅红 章建华 尹华 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第8期1152-1160,共9页
目的探讨右归丸入血成分对MC3T3-E1和RAW264.7细胞Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK通路相关因子mRNA表达的影响。方法用MC3T3-E1和RAW264.7细胞分别进行成骨和破骨的诱导培养,制备右归丸入血成分的单体干预液进行细胞干预,通过RT-qPCR检... 目的探讨右归丸入血成分对MC3T3-E1和RAW264.7细胞Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK通路相关因子mRNA表达的影响。方法用MC3T3-E1和RAW264.7细胞分别进行成骨和破骨的诱导培养,制备右归丸入血成分的单体干预液进行细胞干预,通过RT-qPCR检测MC3T3-E1细胞中Lrp6、Lrp5、β-catenin、Tcf7、Fzd2、OPG及RAW264.7细胞中Traf6、Nfatc1、Fos、Mmp9、Ctsk、Car2 mRNA的表达。结果与空白对照组相比,乌头碱能显著抑制Traf6、Fos和Mmp9的mRNA表达(P<0.05);次乌头碱和新乌头碱能显著抑制Fos的mRNA表达(P<0.05);苯甲酰乌头原碱可显著上调Lrp6、β-catenin、Tcf7、Fzd2和OPG的mRNA表达(P<0.05),显著下调Traf6、Fos和Mmp9的mRNA(P<0.05);苯甲酰次乌头原碱可促进Lrp5、β-catenin、Tcf7、Fzd2和OPG的mRNA表达(P<0.05);苯甲酰新乌头原碱可促进Lrp6、Lrp5、Tcf7和OPG的mRNA表达(P<0.05),抑制Traf6、Fos、Mmp9和Car2的表达(P<0.05);松脂醇二葡萄糖苷可促进Lrp5、β-catenin、Tcf7和OPG的mRNA表达(P<0.05),显著下调Traf6、Ctsk、Car2的mRNA表达(P<0.05);肉桂酸能显著上调Lrp5、Tcf7、Fzd2和OPG的mRNA表达(P<0.05),显著抑制Nfatc1和Fos的mRNA表达(P<0.05)。结论右归丸入血成分在一定浓度范围内可以通过调控Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子的基因表达影响骨形成和骨吸收,起到治疗骨质疏松的作用。 展开更多
关键词 右归丸入血成分 MC3T3-E1 RAW264.7 WNT/Β-CATENIN OPG/RANKL/RANK 信号通路 mRNA 骨质疏松
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piR-7472影响电压调控钾离子通道促进小鼠成骨细胞分化的机制 被引量：2
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作者 隆宇斌 王湘斌 +3 位作者 樊基耿 杨厚志 杨洋 李勇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第14期2868-2874,共7页
背景:现有研究在PIWI相互作用RNA(piRNA)抗骨质疏松方面取得了重大进展,但piRNA发挥功能的具体靶点和相关机制仍有待探索。目的:探讨piR-7472对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)分化的影响及下游机制。方法:①12只C57/BL6J小鼠随机分为假手... 背景:现有研究在PIWI相互作用RNA(piRNA)抗骨质疏松方面取得了重大进展,但piRNA发挥功能的具体靶点和相关机制仍有待探索。目的:探讨piR-7472对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)分化的影响及下游机制。方法:①12只C57/BL6J小鼠随机分为假手术组和卵巢切除组,每组6只,术后8周通过Micro-CT检测小鼠的骨量,RT-qPCR检测piR-7472的表达;②将MC3T3-E1细胞分为NC mimics组、piR-7472 mimics组、NC inhibitor组与piR-7472 inhibitor组,转染后成骨诱导7 d采用RT-qPCR检测piR-7472、骨桥蛋白、胶原蛋白Ⅰ、Runt相关转录因子2、钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1 mRNA的表达;成骨诱导7 d采用Western blot检测骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2、钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1(KCNF1)蛋白表达;成骨诱导14 d通过碱性磷酸酶染色检测碱性磷酸酶的表达;成骨诱导21 d通过茜素红染色检测矿化结节数量;③双荧光素酶报告基因实验观察piR-7472是否能与钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1相结合。结果与结论:①与假手术组相比,卵巢切除组小鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量明显下降,骨小梁分离度明显升高,并且骨组织中piR-7472 mRNA表达明显下调;②与NC组相比,piR-7472 mimics组骨桥蛋白、胶原蛋白Ⅰ、Runt相关转录因子2的mRNA表达明显升高,骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2的蛋白表达明显升高,矿化沉积与碱性磷酸酶表达增多;与NC inhibitor组相比,piR-7472 inhibitor组骨桥蛋白、胶原蛋白Ⅰ、Runt相关转录因子2的mRNA表达明显降低,骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2的蛋白表达明显降低,矿化沉积与碱性磷酸酶表达降低;③通过miRanda数据库预测发现piR-7472能与KCNF1相互作用;双荧光素酶报告基因实验发现piR-7472 mimcis能与钾电压门控通道调节因子亚家族F成员1结合并促进其表达。结果表明:piR-7472能够促进成骨前体细胞MC3T3-E1成骨分化,其发挥作用的机制可能是通过促进KCNF1表达实现的。 展开更多
关键词 成骨细胞MC3T3-E1 PIWI相互作用RNA 成骨分化 骨质疏松症 电压调控的钾离子通道 KCNF1
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重组胶原蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松和骨形成的影响
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作者 高瞻 李佳 +3 位作者 郑雨婷 杨思梦 刘宜隆 吴迎 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 北大核心 2025年第3期294-303,共10页
目的探究重组胶原蛋白(recombinant collagen,RC)对去卵巢大鼠骨质疏松和胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化、矿化等骨形成过程的影响。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)... 目的探究重组胶原蛋白(recombinant collagen,RC)对去卵巢大鼠骨质疏松和胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化、矿化等骨形成过程的影响。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)和RC灌胃组(RC),每组6只。Sham组行假手术,OVX组和RC组行双侧卵巢切除术,分别予生理盐水和0.1 g/(kg·d)RC灌胃12周。使用双能X线吸收测量仪、Micro-CT三维重建、三点弯曲实验分别检测大鼠各部位的骨密度、股骨微结构、股骨生物力学特性,使用ELISA法检测大鼠血清骨代谢标志物水平。使用0.1~6 mg/mL重组胶原蛋白肽(recombinant collagen peptide,RCP)培养MC3T3-E1细胞,CCK-8法确定RCP的最适干预浓度,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定法、ELISA法、茜素红染色(alizarin red staining,ARS)检测RCP对MC3T3-E1细胞分化、矿化的影响。结果12周RC补充在一定程度上缓解去卵巢导致的大鼠全身、脊柱、上肢骨密度减少,股骨骨小梁面积百分比降低,股骨最大载荷、最大应力、刚度减小,血清骨代谢标志物骨钙素(osteocalcin,OCN)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)水平异常等骨质疏松症状(P<0.05)。中浓度(1.0 mg/mL、2.0 mg/mL)RCP促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.01),对ALP活性、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COL1)、OCN分泌无显著影响,但能显著提高矿化结节生成水平(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论RC补充能缓解去卵巢导致的大鼠骨质疏松相关症状,与其增强成骨细胞增殖活性并浓度依赖性促进矿化有关。 展开更多
关键词 重组胶原蛋白 去卵巢 骨质疏松 MC3T3-E1细胞 骨形成
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基于有氧糖酵解探究补骨生髓方含药血清通过介导HIF-1α促进MC3T3-E1细胞成骨分化的作用
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作者 尹煜辉 李琰 +4 位作者 齐保玉 刘平 朱立国 刘宁 魏戌 《湖南中医药大学学报》 2025年第5期818-824,共7页
目的 探讨补骨生髓方(BGSSD)含药血清通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导MC3T3-E1细胞有氧糖酵解过程对成骨分化的影响。方法 选取18只SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,各9只。含药血清组按生药量5.87 g/(kg·d)给予BGSSD药... 目的 探讨补骨生髓方(BGSSD)含药血清通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导MC3T3-E1细胞有氧糖酵解过程对成骨分化的影响。方法 选取18只SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,各9只。含药血清组按生药量5.87 g/(kg·d)给予BGSSD药液灌胃,空白血清组给予20 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃,连续灌胃9次后收集腹主动脉血液,获取BGSSD含药血清和空白血清。将MC3T3-E1细胞分为空白血清组、含药血清组和有氧糖酵解抑制剂组,并将HIF-1α慢病毒转染稳定的MC3T3-E1细胞作为SiRNA HIF-1α组。空白血清组加入含20%空白血清的α-MEM培养基,含药血清组和SiRNA HIF-1α组均加入含20%BGSSD含药血清的α-MEM培养基,有氧糖酵解抑制剂组加入含20%BGSSD含药血清和8 mmol/L抑制剂2-脱氧葡萄糖的α-MEM培养基。采用碱性磷酸酶(ALP)染色法观察4组培养7 d后的黑色沉淀物情况;ELISA检测培养48 h后细胞上清液中ALP和丙酮酸(PA)、乳酸(LA)的含量;qRT-PCR和Western blot检测培养48 h后细胞HIF-1α、Runt相关转录因子2(RUNX2)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果 与空白血清组比较,含药血清组的黑色沉淀物明显增加、颜色加深,ALP、LA、PA含量均升高(P<0.05),PDK1、RUNX2、HIF-1α mRNA相对表达水平和蛋白表达量均升高(P<0.05)。与含药血清组比较,SiRNA HIF-1α组和有氧糖酵解抑制剂组的黑色沉淀物减少、颜色变浅,ALP、LA及PA含量均降低(P<0.05),PDK1、RUNX2的mRNA相对表达水平和蛋白表达量均降低(P<0.05);SiRNA HIF-1α组HIF-1α的mRNA相对表达水平和蛋白表达量降低(P<0.05)。结论 BGSSD可能通过HIF-1α介导有氧糖酵解促进MC3T3-E1细胞成骨分化,其作用机制可能与调控HIF-1α/PDK1通路相关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 补骨生髓方 有氧糖酵解 MC3T3-E1细胞 骨形成
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藏红花素水凝胶对软骨细胞与MC3T3-E1细胞的影响 被引量：1
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作者 尹航 宋奎 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第34期7293-7300,共8页
背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓... 背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓度(0,15,20,25 mmol/L)的藏红花素溶液分别加入氧化透明质酸-氧化硫酸软骨素-Ⅱ型胶原混合溶液中,采用席夫碱交联方式制备藏红花素水凝胶,随后制备4种水凝胶浸提液。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与人软骨细胞共培养,检测细胞糖胺聚糖合成,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移,RT-qPCR检测细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与MC3T3-E1细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,RT-qPCR检测成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,成骨诱导分化后的碱性磷酸酶活性与矿化结节形成。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,15,20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液促进软骨细胞的增殖,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液抑制软骨细胞的增殖。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进软骨细胞的迁移,提升软骨细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达与糖胺聚糖合成,并且呈现剂量依赖性。②15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进MC3T3-E1细胞的增殖,提高成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,并且具有剂量依赖性。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液可提高成骨诱导分化后MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性与矿化结节形成,其中以20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液的提高效果最显著。③结果表明,藏红花素水凝胶可促进软骨细胞的增殖、迁移及软骨细胞外基质的合成,促进MC3T3-E1细胞的增殖与成骨分化,其中20 mmol/L藏红花素水凝胶的综合效果较好。 展开更多
关键词 藏红花素 水凝胶 软骨细胞 MC3T3-E1细胞 细胞增殖 细胞迁移 细胞分化 工程化软骨材料
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不同补肾类中药方含药血清抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231间质-上皮转化的机制研究比较
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作者 毛昀 丁致薰 +3 位作者 付玲 胡贝尔 朱世杰 曹文 《湖南中医药大学学报》 2025年第8期1434-1442,共9页
目的探讨补肾阳方、补肾阴方、阴阳双补方含药血清干预乳腺癌细胞间质-上皮转化的疗效差异与分子机制。方法建立乳腺癌细胞MDA-MB-231和成骨前体细胞MC3T3-E1共培养模型,分组为对照组、模型组、补肾阳方组、补肾阴方组、阴阳双补方组,... 目的探讨补肾阳方、补肾阴方、阴阳双补方含药血清干预乳腺癌细胞间质-上皮转化的疗效差异与分子机制。方法建立乳腺癌细胞MDA-MB-231和成骨前体细胞MC3T3-E1共培养模型,分组为对照组、模型组、补肾阳方组、补肾阴方组、阴阳双补方组,其中对照组为乳腺癌细胞单培养,其他组为乳腺癌细胞与成骨前体细胞共培养模型。对照组和模型组培养液中加入10%普通血清,补肾阳方组、补肾阴方组、阴阳双补方组培养液中加入10%相应含药血清。给药干预24、48、72 h后,采用CCK-8法检测乳腺癌细胞活力;结晶紫染色观察细胞形态。共培养48 h后,细胞划痕实验检测乳腺癌细胞迁移能力,流式细胞术检测乳腺癌细胞周期和凋亡;培养48 h后qRT-PCR和Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、缝隙连接蛋白43(Cx43)和dickkopf相关蛋白1(Dkk-1)mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果与对照组比较,模型组乳腺癌细胞活力增加(P<0.05)、细胞总凋亡率下降(P<0.05),细胞周期检测示G_(2)/M期细胞增多(P<0.05),G_(0)/G_(1)期、S期细胞减少(P<0.05);E-cad、N-cad、Cx43和Dkk-1 mRNA相对表达水平和蛋白表达量均上升(P<0.05)。与模型组比较,补肾阳方组、补肾阴方组、阴阳双补方组细胞活力、迁移愈合率降低(P<0.05),细胞总凋亡率增加(P<0.05),细胞周期检测示G_(0)/G_(1)期细胞增多(P<0.05),G_(2)/M期细胞减少(P<0.05);E-cad、N-cad、Cx43和Dkk-1 mRNA相对表达水平和蛋白表达量下降(P<0.05)。结论成骨前体细胞MC3T3-E1通过间质-上皮转化促进乳腺癌细胞MDA-MB-231存活;采用补肾类中药干预共培养模型后,可抑制乳腺癌细胞活力、促进凋亡,机制与抑制间质-上皮转化进程,下调关键蛋白mRNA(E-cad、N-cad、Cx43和Dkk-1)的表达相关。 展开更多
关键词 乳腺癌 骨转移 MDA-MB-231细胞 MC3T3-E1细胞 间质-上皮转化 补肾类中药
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不同质量比处理牙本质基质/α-半水硫酸钙复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响
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作者 施鹏伟 高永强 +1 位作者 王超 刘一鸣 《北京生物医学工程》 2025年第2期171-176,共6页
目的探讨不同质量比处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)/α-半水硫酸钙(α-calcium sulfate hemihydrate,α-CSH)复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖和成骨向分化的影响。方法制备α-CSH、10%TDM/α-CSH、30%TDM/α-CSH、50%TDM/... 目的探讨不同质量比处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)/α-半水硫酸钙(α-calcium sulfate hemihydrate,α-CSH)复合材料浸提液对MC3T3-E1细胞增殖和成骨向分化的影响。方法制备α-CSH、10%TDM/α-CSH、30%TDM/α-CSH、50%TDM/α-CSH复合材料浸提液,采用不同质量比TDM/α-CSH复合材料浸提液培养MC3T3-E1细胞。采用CCK-8检测培养0 d、1 d、3 d、5 d、7 d时各组细胞的增殖活力,同时采用RT-qPCR和Western blot实验检测各组细胞中成骨分化相关基因,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)的表达。结果与空白对照组和α-CSH组相比,10%TDM/α-CSH组、30%TDM/α-CSH组、50%TDM/α-CSH组中细胞的增殖活力明显升高(P<0.05)。培养5 d和7 d时,30%TDM/α-CSH组和50%TDM/α-CSH组中MC3T3-E1细胞的增殖活力明显高于10%TDM/α-CSH组(P<0.05);与30%TDM/α-CSH组相比,50%TDM/α-CSH组中MC3T3-E1细胞的增殖活力也明显升高(P<0.05)。与空白对照组和α-CSH组相比,10%TDM/α-CSH组、30%TDM/α-CSH组、50%TDM/α-CSH组MC3T3-E1细胞中ALP、OPN和RUNX2的表达水平显著升高(P<0.05);30%TDM/α-CSH组和50%TDM/α-CSH组中ALP、OPN和RUNX2的表达水平明显高于10%TDM/α-CSH组(P<0.05);与30%TDM/α-CSH组相比,50%TDM/α-CSH组中ALP、OPN和RUNX2的表达水平也明显升高(P<0.05)。结论TDM/α-CSH复合材料浸提液,尤其是50%TDM/α-CSH复合材料浸提液能够显著促进MC3T3-C1细胞的增殖及成骨向分化。 展开更多
关键词 处理牙本质基质 α-半水硫酸钙 MC3T3-E1 增殖 分化
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