为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细...为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细胞株,命名为4G 5。抗体亚类鉴定重链类型为IgG 1,轻链类型为κ。该M A b细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280。IFA结果显示,MAb4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSVHuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS M LV病毒株。Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSVHuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该M A b无中和活性。通过截短表达GP3蛋白鉴定该M A b抗原表位识别序列为74W CRIGHD RCS83。本研究获得的M A b为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础。展开更多
基金国家863计划(2011A A 10A 208)中央科研院所公益性基础科研业务费项目(ZBK J201218)
文摘为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细胞株,命名为4G 5。抗体亚类鉴定重链类型为IgG 1,轻链类型为κ。该M A b细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280。IFA结果显示,MAb4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSVHuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS M LV病毒株。Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSVHuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该M A b无中和活性。通过截短表达GP3蛋白鉴定该M A b抗原表位识别序列为74W CRIGHD RCS83。本研究获得的M A b为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础。
