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转基因大豆MON87701品系qPCR和3D-dPCR检测方法的建立 被引量：5
1
作者 温洪涛 杨洋 +4 位作者 丁一佳 张晓磊 关海涛 李亮 张瑞英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期212-219,共8页
转基因大豆MON87701是由孟山都公司研发的商业化抗虫大豆品系,目前已在17个国家广泛应用。为建立适用于MON87701大豆的高效检测方法,本研究基于实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR, qPCR)和芯片式数字PCR(3D digita... 转基因大豆MON87701是由孟山都公司研发的商业化抗虫大豆品系,目前已在17个国家广泛应用。为建立适用于MON87701大豆的高效检测方法,本研究基于实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitive PCR, qPCR)和芯片式数字PCR(3D digital PCR, 3D-dPCR)平台,对44种不同转基因材料进行测试,建立双重定量检测方法。研究结果显示:只在转基因大豆MON87701样品中获得了阳性结果,证实该方法中引物和探针组合具有较高的特异性。进一步对2%、0.9%、0.09%和0.02%不同含量的MON87701转基因大豆进行定量测试,建立的qPCR和3D-dPCR两种方法的定量限均达到0.09%,检出限均达到0.02%,两者并无明显差别,但由于3D-dPCR和qPCR相比不需要标准物质制作标准曲线,并且对DNA提取质量要求更低,因此使用起来更加便捷高效,为转基因检测提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 转基因大豆 MON87701 定量检测 qPCR 3d-dpcr
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马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立 被引量：10
2
作者 雷程红 陈凯云 +6 位作者 徐新峰 胡都斯·艾尔肯 徐军 白梅花 史茜 肖媛媛 王科珂 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1299-1306,共8页
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探... 试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(EHV-1) 3D数字PCR(3d-dpcr) 绝对定量
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转基因玉米MZIR098定量PCR检测方法的建立 被引量：2
3
作者 温洪涛 杨洋 +6 位作者 丁一佳 关海涛 苑冉 张瑞英 李凌燕 梁晋刚 王晶 《计量学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期430-439,共10页
利用转基因抗虫耐除草剂玉米MZIR098的5’端旁侧序列信息,设计引物及探针,随后通过qPCR和3D-dPCR平台,建立了玉米MZIR098的转化体特异性双重定量检测方法。经测试后显示,qPCR和3D-dPCR两种检测方法的重复性(相对标准差)均小于25%,符合... 利用转基因抗虫耐除草剂玉米MZIR098的5’端旁侧序列信息,设计引物及探针,随后通过qPCR和3D-dPCR平台,建立了玉米MZIR098的转化体特异性双重定量检测方法。经测试后显示,qPCR和3D-dPCR两种检测方法的重复性(相对标准差)均小于25%,符合转基因检测方法相关标准,并且检出限和定量限也无显著差异。上述结果说明2种方法均可满足转基因定量检测的基本需求,可为今后准确高效地检测玉米MZIR098及其产品提供新的参考方法。 展开更多
关键词 计量学 转基因玉米 MZIR098 定量检测 qPCR 3d-dpcr
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