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核磁共振实验结合量子化学计算研究3/4/5-O-阿魏酰奎宁酸三维结构
1
作者 张佳钰 聂文博 +3 位作者 涂朝 郑利敏 王艳 杨春升 《波谱学杂志》 2025年第1期47-55,共9页
3/4/5-O-阿魏酰奎宁酸(3/4/5-O-feruloylquinic acid,3/4/5-O-FQA)具有抗氧化活性,对预防多种疾病和维持人体健康有益,然而其准确三维结构尚不清楚.本文采用核磁共振波谱技术,结合量子化学理论计算方法,研究了3/4/5-O-FQA分别在气相、D_... 3/4/5-O-阿魏酰奎宁酸(3/4/5-O-feruloylquinic acid,3/4/5-O-FQA)具有抗氧化活性,对预防多种疾病和维持人体健康有益,然而其准确三维结构尚不清楚.本文采用核磁共振波谱技术,结合量子化学理论计算方法,研究了3/4/5-O-FQA分别在气相、D_(2)O溶液和DMSO-d_(6)溶液中的三维结构.结果表明,3-O-FQA在D_(2)O和DMSO-d_(6)两种溶液中的三维结构存在差异,主要表现在酯化位H-3位置处二面角τ(H3C3O1C9)的不同,相差4.147°.这些结构差异导致了3-O-FQA在两种溶液中的^(1)H核磁共振谱图中H-3质子裂分方式不同.该工作给出了3/4/5-O-FQA的精确结构信息,能够为进一步研究其性质和应用价值提供参考和帮助. 展开更多
关键词 三维结构 核磁共振 量子化学计算 化学位移 3/4/5-O-阿魏酰奎宁酸
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3/4开口试验段汽车风洞的风阻测量误差分析与修正
2
作者 庞加斌 《空气动力学学报》 CSCD 北大核心 2024年第7期112-117,I0002,共7页
汽车风洞用3/4开口试验段模拟真实道路气动环境,有限的试验段尺寸、地面边界层及射流剪切层会干扰流场,从而引起风阻测量误差。根据简化势流模型分析,3/4开口试验段存在模型实体阻塞、喷口阻塞、收集口阻塞以及水平压力梯度4项系统误差... 汽车风洞用3/4开口试验段模拟真实道路气动环境,有限的试验段尺寸、地面边界层及射流剪切层会干扰流场,从而引起风阻测量误差。根据简化势流模型分析,3/4开口试验段存在模型实体阻塞、喷口阻塞、收集口阻塞以及水平压力梯度4项系统误差源,其中模型实体阻塞让风阻测量值偏低,喷口和收集口阻塞让风阻测量值偏高,彼此平衡抵消机制使3/4开口试验段风洞具有能够适应更大尺寸模型的优势。利用Mercker-Wiedemann修正方法,结合同济大学整车气动声学风洞,计算修正了3辆不同尺寸车型的风阻系数。结果显示:设定风阻系数误差不超过1%为标准,3/4开口试验段汽车风洞最大阻塞比为15%;水平压力梯度对风阻系数误差的影响更大,风洞设计和验收标准应保证dC_(p)(x)/dx≤0.001/m。 展开更多
关键词 汽车风洞 3/4开口试验段 射流剪切层 阻塞效应 水平压力梯度
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1936年甘肃康乐6(3/4)级地震地表破裂带调查 被引量：17
3
作者 张波 何文贵 +3 位作者 方良好 庞炜 赵泽贤 刘兴旺 《地震研究》 CSCD 北大核心 2015年第2期262-271,333,共10页
结合前人研究结果和野外考察,发现1936年甘肃康乐6^3/4级地震的地表破裂带长14 km,走向NWW,主要由3小段（西段、中段和东段）呈右阶排列而成。地表破裂主要有地震陡坎、地裂缝等。西段长3.7 km,有新鲜的崩塌堆积;中段长4.4 km,有大规模... 结合前人研究结果和野外考察,发现1936年甘肃康乐6^3/4级地震的地表破裂带长14 km,走向NWW,主要由3小段（西段、中段和东段）呈右阶排列而成。地表破裂主要有地震陡坎、地裂缝等。西段长3.7 km,有新鲜的崩塌堆积;中段长4.4 km,有大规模的基岩崩塌,同震左旋位移和垂直位移分别为2.5 m和0.6 m;东段长约6 km,同震水平位移和垂直位移分别为1.5 m和0.3 m。同震变形以左旋走滑为主,兼具逆冲分量,最大地表垂直位错量（0.6 m）仅为水平位错量（2.5 m）的（1/4）。1936年康乐地震时崩落的岩块上零星生长着最大直径仅20-30 mm的丽石黄衣,部分无地衣生长,此次地震由围子山—大夏河断裂向东扩张所致。 展开更多
关键词 地表破裂带 1936年康乐6^3/4级地震 同震位移 基岩崩塌
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胃癌组织中肿瘤干细胞表面标志物CD44v6、CD133与OCT3/4的表达变化及意义 被引量：9
4
作者 刘鹏军 张利霞 +3 位作者 葛亚强 张中平 薛志新 石红建 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第25期46-48,共3页
目的观察胃癌组织中肿瘤干细胞表面标志物CD44v6、CD133与OCT3/4的表达变化,并探讨其意义。方法收集50例胃癌患者癌组织标本及其对应的癌旁正常组织标本,采用免疫组化法检测CD44v6、CD133与OCT3/4表达情况,并分析其与胃癌患者临床病理... 目的观察胃癌组织中肿瘤干细胞表面标志物CD44v6、CD133与OCT3/4的表达变化,并探讨其意义。方法收集50例胃癌患者癌组织标本及其对应的癌旁正常组织标本,采用免疫组化法检测CD44v6、CD133与OCT3/4表达情况,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果胃癌组织中CD44v6、CD133、OCT3/4阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.01)。CD44v6、CD133与OCT3/4在胃癌组织中的表达不存在相关性。CD44v6表达与胃癌细胞浸润、淋巴结转移有关;CD133表达与胃癌组织分化程度、淋巴结转移有关;OCT3/4表达与胃癌细胞浸润、淋巴结转移有关。结论 CD44v6、CD133与OCT3/4在胃癌组织中呈高表达,三者与胃癌的发生、转移及浸润等存在一定关系。 展开更多
关键词 胃癌 肿瘤干细胞标记物 CD44V6 CD133 OCT3/4
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航空声学风洞3/4开口试验平台地板对远场噪声测量的影响 被引量：4
5
作者 张军 陈鹏 +2 位作者 雷红胜 张俊龙 李征初 《航空学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第8期2574-2582,共9页
利用Kirchhoff-Helmholtz声学理论建立了地板声波反射问题的时域理论模型,推导了地板面上反射波的幅值函数和延迟时间的表达式,并引入了恰当的数值方法对反射声场进行求解,理论方法的正确性得到了实验结果的验证。以典型的高斯调制正弦... 利用Kirchhoff-Helmholtz声学理论建立了地板声波反射问题的时域理论模型,推导了地板面上反射波的幅值函数和延迟时间的表达式,并引入了恰当的数值方法对反射声场进行求解,理论方法的正确性得到了实验结果的验证。以典型的高斯调制正弦波脉冲和连续正弦波为例,用建立的理论方法对噪声信号的传播过程和平台地板对远场噪声测量的影响进行了数值模拟研究,结果表明:地板的存在将使得远场接收到的噪声信号中出现直达波和反射波,反射波包含了中心波和边缘波。在低频段,地板宽度增加,远场噪声声压级增大;在高频段,地板宽度增加对远场总噪声级影响不明显。对于高速列车(HST)模型,车底位置的声源比车顶位置的声源在高频段受到地板反射的影响更大。 展开更多
关键词 声学风洞 3/4开口地板 噪声测量 声场 Kirchhoff-Helmholtz方法
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慢性丙型肝炎患者NS3/4A蛋白酶抑制剂预存耐药的临床研究 被引量：4
6
作者 李展翼 严颖 +2 位作者 刘莹 蔡庆贤 赵志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期437-441,448,共6页
【目的】了解我国华南地区从未接受任何抗病毒治疗的慢性丙型肝炎(慢丙肝)患者NS3/4A蛋白酶抑制剂相关耐药位点的流行情况、临床特点包括其对干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗的影响。【方法】在接受抗病毒治疗前对183例慢丙肝患者的NS3/4... 【目的】了解我国华南地区从未接受任何抗病毒治疗的慢性丙型肝炎(慢丙肝)患者NS3/4A蛋白酶抑制剂相关耐药位点的流行情况、临床特点包括其对干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗的影响。【方法】在接受抗病毒治疗前对183例慢丙肝患者的NS3/4A蛋白酶抑制剂相关的耐药位点采用自行设计型别特异性引物行巢式PCR,PCR产物纯化后直接测序法鉴定,有变异的患者为变异组(125例),无变异的患者为野生组(37例),对两组患者的临床资料包括干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后的持续病毒应答率等进行分析。【结果】183例患者中162例患者样本的NS3区扩增成功,其中125例(77.16%)患者检出耐药相关的变异位点266个,其中HCV 1b型A156S变异率为18.33%(11/60),T54S为5.00%(3/60);HCV 2a型V36L变异率为100.00%(14/14),A156S为64.29%(9/14);HCV 6a型Q80K变异率为95.45%(84/88),V36L为4.55%(4/88),D168E为2.27%(2/88),变异组患者经干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后的持续病毒性应答率为81.60%(102/125),而野生组的为81.03%(30/37),两者比较无明显差异(P=0.943)。【结论】我国不同基因型的慢丙肝患者对NS3/4A蛋白酶抑制剂存在不同的预存耐药,耐药变异对慢丙肝患者疾病状态包括干扰素联合利巴韦林的疗效无影响。预存耐药的存在警示我们未来在使用此类药物时需分析病毒基因型及预存耐药变异情况,从而为患者提供最好的病毒学监测及最优的治疗方案。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3/4A蛋白酶抑制剂 预存耐药 基因型
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ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用 被引量：3
7
作者 马红芳 何湘 +5 位作者 王可 王芳 焦新安 张艳红 章金刚 钟辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期483-485,489,共4页
目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Fla... 目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。 展开更多
关键词 丙肝病毒 NS3/4A基因 ULBP1 报告基因
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Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞神经分化中的作用 被引量：3
8
作者 王舒阳 韩瑞 +5 位作者 张广宇 王翠琴 彭越 鲁晶晶 彭涛 贾延劼 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期385-392,共8页
目的:探讨Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元中的作用。方法:构建大鼠Oct3/4慢病毒载体(Oct3/4-LV)并感染大鼠MSCs;实验分为感染组(感染Oct3/4-LV)、阴性对照组(感染FU-PGC-NC-LV)和未感染组3组;采用β-巯基乙醇... 目的:探讨Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元中的作用。方法:构建大鼠Oct3/4慢病毒载体(Oct3/4-LV)并感染大鼠MSCs;实验分为感染组(感染Oct3/4-LV)、阴性对照组(感染FU-PGC-NC-LV)和未感染组3组;采用β-巯基乙醇诱导各组大鼠MSCs分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后形态学变化;MTT法检测细胞存活率;免疫细胞化学法检测神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Oct3/4的表达变化;Western blotting法检测MAP-2和Oct3/4蛋白的表达变化;RT-PCR法检测MAP-2和Oct3/4 mRNA的表达变化。结果:(1)阳性克隆PCR证明大鼠Oct3/4慢病毒载体构建成功,孔稀释法测定病毒滴度为2×10^(11)TU/L。(2)倒置显微镜下观察大鼠Oct3/4慢病毒载体感染成功,感染复数(MOI)值为10,感染48 h时感染率最高,荧光表达最强;感染率可达83.4%±2.2%。感染组中,MSCs形态发生变化;MTT提示感染组细胞存活率显著降低(P<0.05)。(3)β-巯基乙醇可以诱导大鼠MSCs向神经元分化,其中以感染组诱导效果最佳,具有比较典型的神经元形态,NSE和MAP-2的表达率与其它各组相比显著增高(P<0.05)。(4)感染组与其它各组同时点的Oct3/4表达相比均显著增高(P<0.01)。并且随着诱导时间的延长,各组Oct3/4表达持续减少,诱导后5 h与诱导前相比存在显著差异(P<0.05)。结论:Oct3/4在大鼠MSCs分化为神经元的过程中可能起到了重要的调控作用。 展开更多
关键词 Oct3/4 骨髓间充质干细胞 神经元 慢病毒
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民族药野梦花基源及提取物抗丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性研究 被引量：4
9
作者 危英 马超美 +3 位作者 梁光义 魏升华 危莉 服部征雄 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1661-1663,共3页
目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞... 目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞香科植物(Daphne papyracea Wall.ex Steud.var.crassiuscula Rehd.),其乙酸乙酯和正丁醇提取物,在浓度为100μg.ml-1时,对HCV NS3/4A蛋白酶的抑制率分别为70.5%和65.4%。结论民族药野梦花的乙酸乙酯和正丁醇部位为抗HCV NS3/4A蛋白酶的有效部位。 展开更多
关键词 野梦花 基源 丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制剂
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猪博卡病毒3/4/5型PCR检测方法的建立及应用 被引量：2
10
作者 付朋飞 杨兴武 +5 位作者 乔涵 潘鑫龙 郭晓庆 张宇 郭珍珍 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期908-911,共4页
通过分析GenBank上登录的猪博卡病毒3/4/5型(PBoV3/4/5型)基因序列,发现这些基因序列中存在一段高度同源性保守序列,针对该序列设计并合成1对引物,成功建立了可同时扩增出PBoV 3/4/5型的PCR检测方法。对2013年8月至2014年5月河南省50份... 通过分析GenBank上登录的猪博卡病毒3/4/5型(PBoV3/4/5型)基因序列,发现这些基因序列中存在一段高度同源性保守序列,针对该序列设计并合成1对引物,成功建立了可同时扩增出PBoV 3/4/5型的PCR检测方法。对2013年8月至2014年5月河南省50份临床腹泻仔猪小肠样品进行检测,结果 21份为PBoV阳性,阳性率为42%,表明PBoV在河南省猪群中存在一定流行。本试验建立的PCR方法对PBoV3/4/5的检测具有简便、快速、灵敏度高和特异性强的特点,为PBoV 3/4/5型的快速检测提供了有效的技术支持。 展开更多
关键词 猪博卡病毒 PBoV3/4/5型 PCR
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精原细胞瘤中M2A、AP-2γ、OCT3/4、PLAP和CD117的表达及其意义 被引量：3
11
作者 童英 成元华 文安智 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第8期1338-1340,共3页
目的:检测精原细胞瘤中M2A、AP-2γ、OCT3/4、PLAP和CD117的表达情况,探讨这些标记物在该肿瘤病理诊断及鉴别诊断中的意义。方法:采用免疫组化SP法,检测40例睾丸精原细胞瘤中M2A、AP-2γ、OCT3/4、PLAP和CD117的表达情况。结果:M2A、AP-... 目的:检测精原细胞瘤中M2A、AP-2γ、OCT3/4、PLAP和CD117的表达情况,探讨这些标记物在该肿瘤病理诊断及鉴别诊断中的意义。方法:采用免疫组化SP法,检测40例睾丸精原细胞瘤中M2A、AP-2γ、OCT3/4、PLAP和CD117的表达情况。结果:M2A、AP-2γ、OCT3/4、PLAP和CD117阳性表达率分别为95.0%、87.5%、72.5%、67.5%和75.0%,在13例PLAP表达阴性的精原细胞瘤中M2A和AP-2γ的阳性表达率分别为84.6%和76.9%。M2A、AP-2γ表达与OCT3/4、PLAP、CD117的表达比较,差异有显著性;M2A与AP-2γ表达之间比较,差异无显著性,OCT3/4、PLAP与CD117间比较,差异也无显著性。结论:精原细胞瘤中M2A、AP-2γ高水平表达,可以作为诊断精原细胞瘤、特别是PLAP标记阴性的精原细胞瘤的免疫组化标记物,可作为鉴别诊断的有用指标。 展开更多
关键词 精原细胞瘤 M2A AP-2γ OCT3/4 疫组织化学
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HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展 被引量：4
12
作者 汪桦 薛小平 雷迎峰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第25期2595-2600,共6页
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研... 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展. 展开更多
关键词 丙型肝炎 NS3/4A丝氨酸蛋白酶 NS5B RNA依赖的RNA聚合酶 酶类抑制剂
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人重组Oct3/4真核表达载体构建及在卵巢癌细胞中的表达研究 被引量：2
13
作者 王育 肖世金 赵爱民 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期797-801,共5页
目的构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株(SKOV3),观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达。方法采用RT-PCR技术扩增获得目的基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA... 目的构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株(SKOV3),观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达。方法采用RT-PCR技术扩增获得目的基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA测序鉴定。利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染SKOV3,以空载体转染细胞和未转染细胞作为转染对照组和阴性对照组。经G418(neomycin)筛选获得SKOV3稳定转染细胞株,Western blotting分析检测细胞Oct3/4蛋白的相对表达水平。结果 PCR扩增产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的基因条带大小约1000bp,与理论预期值一致。构建完成人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,DNA测序结果与GenBank数据库进行比对序列一致。Western blotting检测显示,转染pcDNA3.1-Oct3/4组稳定转染细胞中Oct3/4蛋白相对表达量(10.225±0.987)显著高于转染对照组(1.713±0.896)和阴性对照组(校正值为1)(P<0.01)。结论成功构建人重组Oct3/4真核表达载体并转染SKOV3,稳定转染细胞株中Oct3/4蛋白呈稳定过量表达。实验为进一步研究Oct3/4基因在卵巢癌发生、发展及耐药机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 Oct3/4基因 载体 蛋白表达 卵巢癌
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胚胎/多能干细胞标记物Oct3/4在乳腺浸润性小叶癌中的表达及其对分子分型的意义 被引量：1
14
作者 周国江 何潇言 +3 位作者 王鸿雁 韩玉翠 赵子龙 杨勇 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期679-683,共5页
目的研究干细胞标记物Oct3/4在乳腺浸润性小叶癌组织中的表达及其对分子分型的意义。方法回顾性分析67例临床病理和术后随访资料完整的乳腺癌患者,采用免疫组织化学方法检测乳腺浸润性小叶癌及正常乳腺组织中Oct3/4的表达情况,探讨Oct3/... 目的研究干细胞标记物Oct3/4在乳腺浸润性小叶癌组织中的表达及其对分子分型的意义。方法回顾性分析67例临床病理和术后随访资料完整的乳腺癌患者,采用免疫组织化学方法检测乳腺浸润性小叶癌及正常乳腺组织中Oct3/4的表达情况,探讨Oct3/4表达与其分子分型及临床病理参数的关系。结果 Oct3/4在癌组织中的阳性率明显高于癌旁正常乳腺组织(P<0.05);Oct3/4在基底细胞样型、Luminal A型、Luminal B(HER2-)型、Luminal B(HER2+)型、HER2(+)型浸润性小叶癌阳性表达率分别为77.78%、29.63%、14.28%、20%、21.43%,差异有统计学意义(P<0.05);Oct3/4与CK5/6的表达呈正相关性(r=0.394,P<0.05);Oct3/4阳性表达与患者年龄、是否绝经、肿瘤大小、腋淋巴结转移情况、AJCC分期、患者生存状况及组织学分型均无相关性。结论干细胞标志物Oct3/4表达可能与乳腺浸润性小叶癌的发生相关,但与其进展和预后关系不明显;Oct3/4表达与浸润性小叶癌的基底细胞样型存在一定相关性;Oct3/4与CK5/6在分子机制上可能存在一定的联系。 展开更多
关键词 乳腺浸润性小叶癌 分子分型 免疫组织化学 Oct3/4 干细胞标记物
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HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化 被引量：2
15
作者 雷迎峰 尹文 +4 位作者 杨敬 吕欣 韦三华 安群星 徐志凯 《科学技术与工程》 2008年第5期1151-1155,共5页
在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶... 在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶 大肠杆菌 蛋白表达
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NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂——Telaprevir 被引量：1
16
作者 刘永贵 赵丽嘉 +1 位作者 于鹏 沈雪砚 《药物评价研究》 CAS 2011年第5期392-397,共6页
Telaprevir是美国Vertex制药公司开发的一种丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂,能抑制HCV的病毒复制。在欧洲和美国开展的国际多中心、双盲、对照III期临床试验结果显示,本品具有提高HCV感染患者持续病毒学应答(sustained vira... Telaprevir是美国Vertex制药公司开发的一种丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂,能抑制HCV的病毒复制。在欧洲和美国开展的国际多中心、双盲、对照III期临床试验结果显示,本品具有提高HCV感染患者持续病毒学应答(sustained viral response,SVR)的作用,确定了其治疗HCV感染的有效性及耐受性。2011年5月23日,美国FDA批准本品与聚乙二醇干扰素α和利巴韦林联用,用于治疗成人慢性丙型肝炎,商品名"Incivek"。 展开更多
关键词 TELAPREVIR NS3/4A 蛋白酶抑制剂 丙型肝炎 持续病毒学应答(SVR) 聚乙二醇干扰素Α 利巴韦林
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丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶瞬时表达小鼠模型的建立 被引量：2
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作者 闫虎 路遥 +5 位作者 杜娟 贾帅争 付秋霞 彭剑淳 周勇 詹林盛 《生物技术通讯》 CAS 2011年第4期527-531,共5页
目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依... 目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依赖于有活性的NS3/4A在NS4A/B位点的切割。将含融合基因的质粒NS3/4A(△4AB)SEAP通过水动力转染技术转染到小鼠体内,检测小鼠血清中SEAP的活性,高活性的SEAP是该评价体系成立的证据。结果与结论:在瞬时表达NS3/4A的小鼠血清中检测到了高活性的SEAP,建立了可用于评价抗NS3/4A的小鼠体内瞬时模型。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶 分泌性碱性磷酸酶 体内模型
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3/4球形充气膜结构力学特性研究 被引量：1
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作者 方圆 高宝中 +1 位作者 申跃奎 赵明 《安徽工业大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第2期168-174,共7页
为研究3/4球形充气膜结构力学特性,利用现有的该类充气膜结构风压试验资料,采用ANSYS软件对充气膜结构进行非线性有限元数值模拟,研究风载作用下膜材的最大应力、最大位移与内外压比、风速、半径之间的关系,讨论其主要受力特性与变形特... 为研究3/4球形充气膜结构力学特性,利用现有的该类充气膜结构风压试验资料,采用ANSYS软件对充气膜结构进行非线性有限元数值模拟,研究风载作用下膜材的最大应力、最大位移与内外压比、风速、半径之间的关系,讨论其主要受力特性与变形特征,并拟合出结构控制位置处最大应力和最大位移的计算公式。结果表明,内压与半径是影响该类充气膜动力特性的主要因素,结构自振频率随内压的增大而增大,随半径的增大而减小;风载作用下,结构控制位置处的位移和应力随气膜半径和风速的增大而增大。 展开更多
关键词 3/4球形充气膜 内外压比 半径 最大应力 最大位移
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Tet-on和Cre/loxP系统双重调控表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠的建立 被引量：2
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作者 兰海云 孙梦宁 +9 位作者 马玉 赵亚 吕欣 杨敬 雷迎峰 姚敏 黄小军 张建敏 康健 尹文 《生物技术通讯》 CAS 2012年第3期342-346,共5页
目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏... 目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达萤光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1等3个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经多西环素(Dox)诱导1周后,以在体生物发光成像系统(BLI)检测报告基因Luc的表达,免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果:NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示仅在小鼠肝脏部位有强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达;免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后的小鼠肝细胞中特异性表达。结论:建立了Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制,以及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶 三转基因小鼠
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表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A点突变质粒的构建及在Huh7细胞中的表达 被引量：1
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作者 王雪萍 李富军 +2 位作者 长野(藤井)基子 北山喜久美 堀田博 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期720-723,731,共5页
目的构建表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A的点突变质粒,并在Huh7细胞中进行表达。方法以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),根据分型标准设计点突变引物。首先构建4个单点突变质粒:pSG5/M-H05-5(A1-2)/4A(A1-2)(Y56F),pSG5/M-H05-5(B1-1)/4A... 目的构建表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A的点突变质粒,并在Huh7细胞中进行表达。方法以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),根据分型标准设计点突变引物。首先构建4个单点突变质粒:pSG5/M-H05-5(A1-2)/4A(A1-2)(Y56F),pSG5/M-H05-5(B1-1)/4A(B1-1)(L80Q),pSG5/M-H05-5(B2-1)/4A(B2-1)(V51A),pSG5/M-H05-5(B2-2)/4A(B2-2)(S61A)。然后,分别以A1-2,B2-1,B2-2为模板,再将第80位的赖氨酸点突变为谷氨酸(L80Q),构建另外3个双点突变质粒:pSG5/M-H05-5(B1-2)/4A(B1-2),pSG5/M-H05-5(A2-1)/4A(A2-1)和pSG5/M-H05-5(A2-2)/4A(A2-2)。每个质粒均进行序列测定验证点突变成功。用FuGene6转染试剂将构建物转染入Huh7细胞,并应用间接免疫荧光试验和Western blotting检测构建物的表达。结果免疫荧光实验检测到NS3的4种亚细胞定位方式:点状,弥漫样,面包圈样,及短棒状。Western Blotting亦显示构建物均成功表达,同时发现A2-1和B2-1亚型NS3/4A存在不完全切割现象,表明与其他亚型相比,A2-1和B2-1NS3 in cis丝氨酸蛋白酶活性较弱。结论成功构建表达不同氨基端二级结构HCV NS3/4A点突变质粒,为抗不同亚型HCV的深入研究提供基础。 展开更多
关键词 pSG5 点突变 HCVNS3/4A 二级结构 Huh 7细胞
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