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剪接因子DDX3Y下调IL-6/JAK/STAT3信号通路促进男性胃癌细胞增殖和类器官生长的机制研究
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作者 周雅静 李东宝 +6 位作者 王鹏博 段开鹏 董超 李炜康 孙小童 徐呈祥 周进 《中国临床新医学》 2025年第6期642-651,共10页
目的分析剪接因子DDX3Y下调IL-6/JAK/STAT3信号通路促进男性胃癌细胞增殖和类器官生长的机制。方法通过生物信息学方法分析DDX3Y在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平以及DDX3Y表达情况与患者预后的关系。收集苏州大学附属第一医院收治的... 目的分析剪接因子DDX3Y下调IL-6/JAK/STAT3信号通路促进男性胃癌细胞增殖和类器官生长的机制。方法通过生物信息学方法分析DDX3Y在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平以及DDX3Y表达情况与患者预后的关系。收集苏州大学附属第一医院收治的男性胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织(距离胃癌组织>5 cm)进行免疫组化染色。对人胃永生化黏膜上皮细胞GES-1以及男性来源胃癌细胞SNU-1、NUGC-3、KATOIII、MKN74、HGC-27、NCI-N87进行培养。采用Western blot法检测DDX3Y在不同细胞系中的表达水平。通过慢病毒转染SNU-1细胞和HGC-27细胞,分别构建DDX3Y高表达/低表达的细胞(OE-DDX3Y/shDDX3Y),进行EdU细胞增殖实验。利用男性胃癌患者的胃癌组织构建类器官,并通过慢病毒转染进一步构建DDX3Y高表达/低表达的类器官,分析抑制IL-6/JAK/STAT3信号通路对类器官直径及活力的影响。使用RBPmap在线网站预测DDX3Y与IL-6前体mRNA结合的可能性。结果癌旁组织中DDX3Y mRNA表达水平显著高于胃癌组织(P<0.05)。DDX3Y mRNA高表达患者的生存预后显著优于低表达患者(log-rank检验:χ^(2)=7.856,P=0.005)。与GES-1细胞相比,DDX3Y蛋白在HGC-27细胞中显著高表达(P<0.05);相较于HGC-27细胞,SNU-1细胞中DDX3Y蛋白表达量较低(P<0.05)。在SNU-1细胞中,OE-DDX3Y组的DDX3Y蛋白表达量显著高于高表达对照组(P<0.05),OE-DDX3Y组EdU染色阳性细胞比例显著低于高表达对照组(P<0.05)。在HGC-27细胞中,shDDX3Y-1组的DDX3Y蛋白表达量显著低于低表达对照组(P<0.05),shDDX3Y组EdU染色阳性细胞比例显著高于低表达对照组(P<0.05)。相较于高表达对照组,OE-DDX3Y组类器官直径显著减小(P<0.05),活力显著降低(P<0.05),抑制IL-6/JAK/STAT3信号通路后类器官直径进一步减小(P<0.05),活力进一步降低(P<0.05)。相较于低表达对照组,shDDX3Y组类器官直径显著增大(P<0.05),活力显著增加(P<0.05),抑制IL-6/JAK/STAT3信号通路后类器官直径显著减小(P<0.05),活力显著降低(P<0.05)。RBPmap在线网站预测结果提示DDX3Y很可能与IL-6的前体mRNA发生结合(Z-score>3,结合信号显著)。结论剪接因子DDX3Y下调促进男性胃癌细胞增殖和类器官生长,其调控IL-6的可变剪接并可进一步通过影响IL-6/JAK/STAT3信号通路发挥促进肿瘤进展的作用。 展开更多
关键词 DDX3Y 肿瘤细胞增殖 可变剪接 IL-6/JAK/STAT3信号通路 胃癌性别差异
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酸性区3融合重链促进基于蛋白质内含子的双载体B域缺失型凝血因子Ⅷ转基因表达 被引量:4
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作者 朱甫祥 杨树德 +3 位作者 刘泽隆 缪静 屈慧鸽 迟晓艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1225-1231,共7页
最近的研究表明,蛋白质内含子(intein)介导的B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)的轻链和重链剪接可顺式促进后者的分泌,而且剪接反应在细胞内、外均可发生.为进一步提高基于蛋白质内含子的双载体转BDD-FⅧ基因的功效,将具有促进重链分泌作... 最近的研究表明,蛋白质内含子(intein)介导的B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)的轻链和重链剪接可顺式促进后者的分泌,而且剪接反应在细胞内、外均可发生.为进一步提高基于蛋白质内含子的双载体转BDD-FⅧ基因的功效,将具有促进重链分泌作用的位于Pro1640~Ser1690的酸性区3(acidic region-3,AR-3)引入重链,检验对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性的影响.用融合蛋白内含子的附加ar-3重链(HCAR3IntN)基因和轻链(IntCLC)基因共转染培养的HEK293细胞,分别用ELISA和Coatest法定量分析分泌至培养上清中剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性,并用免疫印迹观察了细胞内的BDD-FⅧ剪接.结果显示,共转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞,分泌至上清的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性分别为(173±26)μg/L和(1.31±0.15)U/ml,明显高于未添加ar-3的蛋白质内含子融合重链(HCIntN)与轻链(IntCLC)基因共转染细胞[(102±12)μg/L和(0.79±0.09)U/ml],提示AR-3对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性有明显改善作用.而且,分别转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞混合培养后的上清中,亦检测到剪接的BDD-FⅧ蛋白和活性[(35±7)μg/L和(0.28±0.08)U/ml],表明蛋白质内含子可进行不依赖细胞机制的蛋白质剪接.另外,转基因细胞总蛋白呈现明显的可与FⅧ多克隆抗体进行反应的剪接BDD-FⅧ蛋白条带,直观地反映细胞内BDD-FⅧ的剪接.为动物模体内运用蛋白质反式剪接技术的双腺相关病毒载体(AAV)转BDD-FⅧ基因实验提供了依据. 展开更多
关键词 凝血因子Ⅷ 酸性区3 分泌 蛋白质内含子 蛋白质反式剪接
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甘蓝型油菜种子中G3PDH基因特异性表达的ihpRNA载体构建 被引量:2
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作者 张超 付三雄 +2 位作者 陈松 李大雄 戚存扣 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第9期29-34,共6页
为验证甘蓝型油菜甘油-3-磷酸脱氢酶基因(G3PDH)的功能,采用PCR的方法克隆BnG3PDH557bp的干扰靶序列,将其正向片段插入到中间载体pHurricane的NotI酶切位点、反向重复序列插入到XhoI酶切位点,构建ihpRNA载体反向重复框,BamHI、EcoRI酶... 为验证甘蓝型油菜甘油-3-磷酸脱氢酶基因(G3PDH)的功能,采用PCR的方法克隆BnG3PDH557bp的干扰靶序列,将其正向片段插入到中间载体pHurricane的NotI酶切位点、反向重复序列插入到XhoI酶切位点,构建ihpRNA载体反向重复框,BamHI、EcoRI酶切下反向重复框后组装到由种子特异性表达的napin启动子驱动的pCAMBIAl390植物表达载体上。结果表明:PCR扩增产物、限制性内切酶酶切产物与预期片段长度相符。其中,1.7kb的片段包括正向干扰靶片段和部分AtFad2内含子序列,2.3kb大小的片段是干扰反向重复框。种子特异性表达的BnG3PDHihpRNA载体成功构建。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 甘油-3-磷酸脱氢酶 ihpRNA载体
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利用内蛋白子剪切功能一步纯化重组人神经营养因子-3 被引量:4
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作者 袁静明 李卓玉 +2 位作者 王雅梅 徐明群 sxu.edu.cn 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第3期335-339,共5页
将人神经营养因子 - 3(h NT3)基因插入含内蛋白子 -几丁质结合区 (Intein- CBD)片段的质粒p TXB1的多克隆位点 ,构建成重组子 p TXB- h NT3,随后转化入 E.coli 2 566并进行融合表达 .表达产物包涵体经 8mol/ L脲变性 ,并在 GSH,GSSG存... 将人神经营养因子 - 3(h NT3)基因插入含内蛋白子 -几丁质结合区 (Intein- CBD)片段的质粒p TXB1的多克隆位点 ,构建成重组子 p TXB- h NT3,随后转化入 E.coli 2 566并进行融合表达 .表达产物包涵体经 8mol/ L脲变性 ,并在 GSH,GSSG存在下复性 .复性后的融合蛋白经几丁质珠亲和柱吸附 .待洗涤杂蛋白后 ,加入 50 mmol/ L DTT在 4℃或 2 5℃进行剪切反应 48h,再用缓冲液洗脱 ,即得 h NT3.SDS- PAGE分析表明 ,h NT3达电泳纯 .其分子量约为 1 4 k 展开更多
关键词 人神经营养因子-3 内蛋白子 DTT剪切 纯化
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田头菇属真菌3-磷酸甘油醛脱氢酶稀有内含子特征分析
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作者 陈卫民 张小雷 +4 位作者 柴红梅 田果廷 苏开美 刘武龙 赵永昌 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期103-109,共7页
前期研究从杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)YAASM0711的单核菌株M20中获得了含有GC-AG内含子的3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPD)gpd完整编码基因,本研究通过特异性引物PCR扩增探讨该基因的组成结构及内含... 前期研究从杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)YAASM0711的单核菌株M20中获得了含有GC-AG内含子的3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPD)gpd完整编码基因,本研究通过特异性引物PCR扩增探讨该基因的组成结构及内含子的拼接特征.在杨柳田头菇和茶树菇(A.aegerita)野生群体中均获得了此基因,序列差异性分析显示该基因可被分为两类,并且在两个物种中均有分布,表明这种序列组成差异可能在两个物种分化之前就已经存在.另外,在M20菌株的菌丝体及YAASM0711菌株的不同发育时期均没有发现可选择性剪切现象.基因表达分析表明,gpd在幼嫩的子实体中表达量最高,约为菌丝体中表达量的5.5倍,推测与子实体的快速生长有关.本研究结果有助于提高对gpd功能及其在物种分化研究中作用的认识. 展开更多
关键词 GC-AG内含子 3-磷酸甘油脱氢酶 杨柳田头菇 选择性拼接 物种分化
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膀胱尿路上皮癌组织中SRSF1及Caspase-3的表达水平及临床意义 被引量:1
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作者 宰国真 王旭东 +1 位作者 马梅 李彦伟 《河南医学研究》 CAS 2020年第25期4635-4638,共4页
目的探讨膀胱浸润性尿路上皮癌组织中丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1(SRSF1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平及临床意义。方法选取2017年3月至2019年6月郑州大学第五附属医院收集的92例膀胱浸润性尿路上皮癌手术或... 目的探讨膀胱浸润性尿路上皮癌组织中丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1(SRSF1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平及临床意义。方法选取2017年3月至2019年6月郑州大学第五附属医院收集的92例膀胱浸润性尿路上皮癌手术或活检标本为观察组,选取同期20例病理检查结果为正常膀胱尿路上皮组织的活检标本为对照组。采用免疫组化法检测对照组、观察组中SRSF1及Caspase-3的表达情况,分析观察组Caspase-3与SRSF1的相关性。结果观察组SRSF1阳性表达率高于对照组(P<0.05)。复发性浸润性尿路上皮癌组织SRSF1阳性表达率高于原发性癌(P<0.001)。观察组Caspase-3阳性表达率低于对照组(P<0.05)。观察组Caspase-3与SRSF1的表达呈负相关(P<0.05)。结论SRSF1与膀胱浸润性尿路上皮癌的发生、复发关系密切,膀胱浸润性尿路上皮癌组织中Caspase-3与SRSF1表达呈负相关,SRSF1高表达与Caspase-3低表达对膀胱浸润性尿路上皮癌患者病情进展起促进作用。 展开更多
关键词 膀胱浸润性尿路上皮癌 丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 免疫组化
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多聚嘧啶结合蛋白3在胃癌中的表达及临床意义 被引量:2
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作者 陈伟霞 李朝燕 +3 位作者 李佳 康研 牛垚飞 赵爱光 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期846-854,共9页
目的:检测多聚嘧啶结合蛋白3(polypyrimidine tract binding protein 3,PTBP3)在胃癌组织中的表达及定位,探讨其表达水平与根治术后胃癌患者临床病理特征及生存预后的关系。方法:收集90例根治术后胃癌患者组织及对应的癌旁组织标本,制... 目的:检测多聚嘧啶结合蛋白3(polypyrimidine tract binding protein 3,PTBP3)在胃癌组织中的表达及定位,探讨其表达水平与根治术后胃癌患者临床病理特征及生存预后的关系。方法:收集90例根治术后胃癌患者组织及对应的癌旁组织标本,制成组织芯片后,采用免疫组织化学(SP染色系统)法检测PTBP3蛋白表达及定位。收集30例配对胃癌及癌旁组织标本,制成cDNA芯片后,采用实时荧光定量PCR法检测PTBP3 mRNA的表达水平。应用SPSS 19.0统计学软件分析PTBP3表达与88例胃癌根治术后患者临床病理特征及生存预后的关系。结果:PTBP3主要定位在细胞核上,胃癌组织中PTBP3蛋白(细胞质P<0.001,细胞核P=0.011)和mRNA(P=0.036)的表达水平均明显高于癌旁组织。多因素分析显示,TNM分期(P=0.031)和癌旁组织中PTBP3表达(P=0.014)为影响根治术后胃癌患者总生存期(overall survival,OS)的独立预后因素;癌旁组织PTBP3蛋白低表达组的中位OS期较高表达组明显延长(68.58 vs 27.27个月,P=0.016)。结论:PTBP3在胃癌中可能具有癌基因的功能,其可能成为胃癌靶向治疗的潜在候选基因。 展开更多
关键词 胃肿瘤 多聚嘧啶结合蛋白3 选择性剪接 预后
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宫颈癌组织YAP1和SRSF3蛋白表达与临床病理参数及预后的关系 被引量:11
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作者 蒋瑶 张荣 +2 位作者 张静怡 吴梦菲 朱维培 《中华实用诊断与治疗杂志》 2021年第2期131-135,共5页
目的检测宫颈癌组织Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1, YAP1)、丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3(serine and arginine rich splicing factor 3, SRSF3)蛋白表达情况,探讨YAP1、SRSF3蛋白表达与临床病理参数及预后的关系。方法 81例宫... 目的检测宫颈癌组织Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1, YAP1)、丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3(serine and arginine rich splicing factor 3, SRSF3)蛋白表达情况,探讨YAP1、SRSF3蛋白表达与临床病理参数及预后的关系。方法 81例宫颈癌患者,取其宫颈癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织和癌旁正常组织YAP1和SRSF3蛋白表达情况。记录患者临床资料,分析YAP1、SRSF3蛋白表达与临床病理参数的关系;采用Pearson相关性分析宫颈癌组织YAP1与SRSF3表达的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析YAP1、SRSF3蛋白阳性表达者与阴性表达者3年生存率的差异;采用多因素COX比例风险回归模型分析宫颈癌患者预后不良的影响因素。结果宫颈癌组织YAP1、SRSF3蛋白阳性表达率(74.07%、65.43%)高于癌旁正常组织(28.40%、30.86%)(P<0.05)。TNM分期Ⅰa/Ⅰb、无淋巴结转移的宫颈癌患者YAP1(65.31%、64.58%)和SRSF3(51.02%、52.08%)阳性表达率均低于TNM分期Ⅱa、有淋巴结转移患者(87.50%、87.88%,87.50%、84.85%)(P<0.05)。宫颈癌组织YAP1与SRSF3表达呈正相关(r=0.708,P=0.001)。YAP1阴性表达者3年生存率(90.5%)高于YAP1阳性表达者(70.0%)(P<0.05),SRSF3阴性表达者3年生存率(92.9%)高于SRSF3阳性表达者(66.0%)(P<0.05)。TNM分期Ⅱa期(OR=2.036,95%CI:1.024~3.049,P<0.001)、淋巴结转移(OR=1.842,95%CI:1.569~2.216,P=0.006)、YAP1表达阳性(OR=1.480,95%CI:1.203~2.429,P<0.001)和SRSF3表达阳性(OR=1.525,95%CI:1.106~1.814,P=0.011)是宫颈癌患者预后不良的危险因素。结论宫颈癌组织YAP1和SRSF3阳性表达率明显提高,YAP1和SRSF3表达与TNM分期、淋巴结转移、预后和生存相关,在宫颈癌的预后和诊断中有一定临床价值。 展开更多
关键词 宫颈癌 Yes相关蛋白1 丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3 淋巴结转移 TNM分期
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Nectin-3序列初步分析及其表达定位
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作者 刘向远 王鑫瑶 +3 位作者 孙雪娇 陈宇 钟子琳 陈建军 《同济大学学报(医学版)》 2021年第6期760-766,共7页
目的初步分析人的细胞黏附蛋白Nectin-3(nectin cell adhesion molecule 3)的序列并研究其亚细胞定位,观察小鼠Nectin-3眼部表达情况。方法分析Nectin-3核苷酸序列并对其编码的3个同源异构体进行氨基酸序列比对分析。构建带eGFP荧光标签... 目的初步分析人的细胞黏附蛋白Nectin-3(nectin cell adhesion molecule 3)的序列并研究其亚细胞定位,观察小鼠Nectin-3眼部表达情况。方法分析Nectin-3核苷酸序列并对其编码的3个同源异构体进行氨基酸序列比对分析。构建带eGFP荧光标签的Nectin-33个同源异构体的重组质粒,转染到HEK293T细胞内,Western印迹法实验检测其蛋白表达。分别转染至HeLa细胞内,细胞免疫荧光检测其亚细胞定位。免疫组织化学实验检测Nectin-3在新生小鼠眼球组织的表达情况。结果Nectin-3在目前数据库中共有的转录本有3个,分别编码3个同源异构体iso1(isoform1)、iso2(isoform2)和iso3(isoform3)。序列分析显示它们的N端和/或C端氨基酸序列不同,编码iso3的基因的启动子与iso1和iso2的启动子不同。成功构建Nectin-3的3个同源异构体的荧光融合蛋白表达质粒,Western印迹法显示iso1和iso2的融合蛋白均出现比预测的分子量更小的条带,iso3的融合蛋白与预测的分子量大小基本一致。免疫荧光实验显示iso3表达主要在细胞质中,iso1与iso2表达在细胞核和细胞质均可见;免疫组织化学显示Nectin-3在晶状体上皮细胞和纤维细胞、视网膜上皮细胞和睫状体色素和非色素上皮细胞之间区域均有表达。结论Nectin-3在新生小鼠眼球组织表达,iso1与iso2可能被酶切割,3个同源异构体的亚细胞定位存在差异,这些实验数据将为后续研究Nectin-3的功能奠定实验基础。 展开更多
关键词 Nectin-3 剪接变体 亚细胞定位
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Identification and characterization of cul-3b,a novel hominine CUL-3 transcript variant
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作者 LiLu Zuo-MingZhou Xiao-YanHuang MinXu Lan-LanYin HuiWang Zhi-YangXu Jia-HaoSha 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2005年第2期205-211,共7页
Aim:To identify genes related to the human testis development by substrate hybridization technique.Methods:A human testis cDNA microarray was constructed and hybridized with probes prepared from human adult and fetal ... Aim:To identify genes related to the human testis development by substrate hybridization technique.Methods:A human testis cDNA microarray was constructed and hybridized with probes prepared from human adult and fetal testes and spermatozoa mRNAs by reverse transcription reactions.The differentially expressed genes were sequenced. And a newly identified cullin-3 (CUL-3) transcript variant (designated cul-3b) was bio-informatically analyzed with an online GenBank database.Multi-tissue reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to deter- mine the tissue expression profile of cul-3b.Results:Cul-3b,a novel CUL-3 transcript variant,was identified.The expression level of cul-3b in adult testes was 3.79-fold higher than that in fetal ones.Cul-3b differed from cul-3 (including NM_003590 and AY337761) in the opening reading frame and had three internal ribosomal entry sites (IRESes) in the 5'-UTR.These led to a 24 amino acid (aa) truncation at N-terminus of CUL-3b as compared with CUL-3 and a more motivated expression pattern of cul-3b under some strict circumstances.Additionally,cul-3b expressed ubiquitously in human tissues according to multi-tissue RT-PCR.Conclusion:Cul-3b is a novel transcript variant of CUL-3,which may be important not only for the development of human testis but also for that of other organs. 展开更多
关键词 alternative splicing CUL-3 DNA sequence human testis MICROARRAY
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KHSRP通过ANK3调节前列腺癌细胞对雄激素的反应性 被引量:2
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作者 蔡人杰 徐明 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期417-426,共10页
目的·研究KH型剪接调节蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)对前列腺癌细胞增殖能力的影响及其下游基因的表达调控,考察KHSRP在前列腺癌由雄激素依赖型向非依赖型转变过程中的潜在作用及机制。方法·通过重组慢... 目的·研究KH型剪接调节蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)对前列腺癌细胞增殖能力的影响及其下游基因的表达调控,考察KHSRP在前列腺癌由雄激素依赖型向非依赖型转变过程中的潜在作用及机制。方法·通过重组慢病毒感染雄激素依赖型前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞,分别构建KHSRP功能性缺失/获得的稳定细胞株,并比较KHSRP在2种细胞之间的功能差异。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测稳定细胞株中KHSRP、雄激素受体(androgen receptor,AR)及锚定蛋白3(ankyrin 3,ANK3)的表达量。通过细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验等检测KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响。通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)检测KHSRP影响的下游基因,并通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测KHSRP下游基因的mRNA表达量。结合癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)、癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,分析研究ANK3和KHSRP在前列腺组织样本中的表达情况以及ANK3在不同前列腺癌细胞株中的表达差异。结果·GEO数据分析结果显示KHSRP在前列腺癌组织中的表达高于良性前列腺组织,提示其与前列腺癌的发生相关。细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验结果显示KHSRP的表达与LNCaP细胞增殖能力呈负相关,提示KHSRP可以抑制前列腺癌细胞的增殖,且KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响强于对DU145细胞的影响。对LNCaP稳定细胞株的Western blotting和RT-qPCR检测显示KSHRP过表达后LNCaP细胞中AR蛋白质水平下降,但mRNA水平未产生变化,提示KHSRP可以间接调节AR的蛋白质水平。RNA-seq和RT-qPCR结果显示KHSRP与影响AR蛋白稳定性的调节因子ANK3的表达呈正相关,随后的Western blotting证明KHSRP过表达后ANK3蛋白质的表达量明显升高,TCGA数据分析结果进一步说明KHSRP与ANK3的mRNA表达的相关性。根据CCLE和GEO数据,ANK3的表达与前列腺癌的恶性程度也密切相关。结论·KHSRP可能通过ANK3间接调控AR的蛋白稳定性,影响雄激素依赖型前列腺癌细胞的增殖能力,并介导前列腺癌细胞对雄激素反应性的改变。 展开更多
关键词 KH型剪接调节蛋白(KHSRP) 雄激素受体(AR) 锚定蛋白3(ANK3) 前列腺癌 细胞增殖
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基于PLC控制的烟条盒外透明纸热封拼接电控系统
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作者 谢涛 《工业控制计算机》 2025年第7期155-156,共2页
设计了一套基于PLC控制的烟条盒外透明纸热封拼接电控系统,依托于TwinCAT 3软件,完全取代了之前ZB416型硬盒硬条包装机组上伺服驱动的的拼接方式。采用气缸控制加热器对新旧纸热封,控制加热丝切割旧纸,来实现烟条盒外透明纸的自动热封... 设计了一套基于PLC控制的烟条盒外透明纸热封拼接电控系统,依托于TwinCAT 3软件,完全取代了之前ZB416型硬盒硬条包装机组上伺服驱动的的拼接方式。采用气缸控制加热器对新旧纸热封,控制加热丝切割旧纸,来实现烟条盒外透明纸的自动热封拼接。 展开更多
关键词 PLC TwinCAT 3 热封拼接 烟草机械
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真菌基因可变剪接可视化分析的新方法:ZOOM软件的应用扩展(英文) 被引量:3
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作者 严俊杰 张磊 +3 位作者 谢斌 黄千慧 龙莹 谢宝贵 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期618-624,共7页
可变剪接是引起蛋白多样性的主要机制之一,而转录组reads的重新定位是获取可变剪接位点的有效方法,适合在基因组较小的真菌中应用。ZOOM软件是一款可在window系统下运行的reads可视化定位软件,被广泛用于下一代基因组测序(NGS)的reads... 可变剪接是引起蛋白多样性的主要机制之一,而转录组reads的重新定位是获取可变剪接位点的有效方法,适合在基因组较小的真菌中应用。ZOOM软件是一款可在window系统下运行的reads可视化定位软件,被广泛用于下一代基因组测序(NGS)的reads定位及单碱基多态性位点(SNP)的发掘。本文发现该软件分析可变剪接的新用途,并以禾谷镰刀菌Fusarium graminearum的4个基因为例详细描述该方法在真菌可变剪接位点识别中的应用,这些结果均获得RT-PCR的验证。 展开更多
关键词 3’端可变剪接 5’端可变剪接 内含子保留 外显子互斥 RNA-seq数据 生物信息学方法 reads定位
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利用ihpRNA介导的基因沉默培育抗冷糖化马铃薯 被引量:4
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作者 郭志鸿 张金文 +1 位作者 王蒂 陈正华 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期479-484,共6页
为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihpRNA)载体pBIV;... 为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihpRNA)载体pBIV;采用微束激光穿刺技术转化马铃薯品种,得到了149个转基因株系,其中139个转基因株系在低温贮藏35 d时块茎还原糖含量低于亲本材料。RT-PCR分析表明还原糖含量降低的转基因植株中检测不到AcInv基因mRNA的积累。本研究结果表明以3′UTR作为RNAi载体的干涉片段可以有效地抑制靶标基因mRNA的积累,通过对AcInv沉默可获得抗低温糖化的马铃薯育种材料。 展开更多
关键词 马铃薯 冷糖化 酸性转化酶 3’端非翻译区 ihpRNA
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miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响 被引量:2
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作者 邵玉婷 彭浩 +3 位作者 万淑琼 曹欢 郑敏 潘春燕 《中国性科学》 2024年第6期60-65,共6页
目的观察微小RNA(miRNA)-5582对卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法采用加利福尼亚大学圣克鲁兹分校(UCSC)数据库分析miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌患者临床分期的关系。采用实时荧光定量聚合酶... 目的观察微小RNA(miRNA)-5582对卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法采用加利福尼亚大学圣克鲁兹分校(UCSC)数据库分析miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌患者临床分期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌细胞株A2780、HO-8910、OC3、SK-OV-3和正常卵巢上皮细胞株IOSE80中miRNA-5582的表达,miRNA-5582表达最低的SK-OV-3细胞株分为对照组和miRNA-5582组,分别转染miR-NC模拟物和miRNA-5582模拟物。MTS法和Transwell实验分别检测SK-OV-3细胞增殖及侵袭。以microRNA.org和miRWalk3.0数据库检索miRNA-5582的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-5582的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测靶基因表达。结果miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达显著低于正常组织(P<0.01)。miRNA-5582表达水平与卵巢癌患者的临床分期呈负相关(P<0.01)。miRNA-5582在卵巢癌细胞株中表达均显著低于IOSE80细胞(P<0.05),SK-OV-3细胞中miRNA-5582表达最低(P<0.01)。对照组和miRNA-5582组的miRNA-5582相对表达量为1.42±0.73和10.46±0.91,转染体系构建成功(P<0.01)。miRNA-5582组SK-OV-3细胞活性在第3、第4和第5天显著低于对照组(P<0.05)。对照组和miRNA-5582组侵袭细胞数分别为(49.48±3.78)和(15.77±3.40)个,miRNA-5582组细胞侵袭数量显著少于对照组(P<0.01)。miRNA-5582的靶基因是丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3(SRSF3)(P<0.01)。miRNA-5582组SK-OV-3细胞SRSF3基因表达显著低于对照组(P<0.01)。结论miRNA-5582在卵巢癌组织和细胞株中低表达,上调miRNA-5582通过抑制SRSF3基因表达降低卵巢癌SK-OV-3细胞的增殖和侵袭能力,miRNA-5582可能为卵巢癌的防治提供新的靶点。 展开更多
关键词 miRNA-5582 卵巢癌 丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3 细胞增殖 细胞侵袭
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鼻咽癌细胞系CNE2中NPCEDRG基因mRNA剪接变异体分析 被引量:2
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作者 侯德富 关勇军 +5 位作者 关瑞 万恂恂 李国庆 欧阳咏梅 余艳辉 陈主初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期841-850,共10页
NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的1个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.本研究对CNE2细胞所表达的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体克... NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的1个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.本研究对CNE2细胞所表达的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体克隆、鉴定,发现NPCEDRG基因至少有7个转录起始位点,其中NM_032316的TSS位于ATG上游-85 nt处,AF538150和AK094248的TSS位于-25 nt处;AF538150不存在第2外显子中6核苷酸序列(3'-TTGCAG-3')的缺失,其CDs为516 bp,编码1种由171个氨基酸组成的蛋白质(而非GenBank中公布的CDs为510 bp,1种由169个氨基酸组成的蛋白质).本研究成功克隆得到1种新的NPCEDRG基因的mRNA剪接变异体V2,其TSS位于-23 nt处,其CDs为297 bp,编码1种由98个氨基酸组成的蛋白质. 展开更多
关键词 NPCEDRG基因 mRNA剪接变异体 5'-RACE 3'-RACE RT-PCR
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Alternative splicing of the PECTINESTERASE gene encoding a cell wall-degrading enzyme affects postharvest softening in grape
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作者 Hainan Liu Maosong Pei +5 位作者 Charles Ampomah-Dwamena Yaxin Shang Yihe Yu Tonglu Wei Qiaofang Shi Dalong Guo 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期863-875,共13页
The firmness of table grape berries is a crucial quality parameter. Despite extensive research on postharvest fruit softening, its precise molecular mechanisms remain elusive. To enhance our comprehension of the under... The firmness of table grape berries is a crucial quality parameter. Despite extensive research on postharvest fruit softening, its precise molecular mechanisms remain elusive. To enhance our comprehension of the underlying molecular factors, we initially identified differentially expressed genes(DEGs) by comparing the transcriptomes of folic acid(FA)-treated and water-treated(CK) berries at different time points. We then analyzed the sequences to detect alternatively spliced(AS) genes associated with postharvest softening. A total of 2,559 DEGs were identified and categorized into four subclusters based on their expression patterns, with subcluster-4 genes exhibiting higher expression in the CK group compared with the FA treatment group. There were 1,045 AS-associated genes specific to FA-treated berries and 1,042 in the CK-treated berries, respectively. Gene Ontology(GO) annotation indicated that the AS-associated genes in CK-treated berries were predominantly enriched in cell wall metabolic processes,particularly cell wall degradation processes. Through a comparison between treatment-associated AS genes and subcluster-4 DEGs, we identified eight genes, including Pectinesterase 2(VvPE2, Vitvi15g00704), which encodes a cell wall-degrading enzyme and was predicted to undergo an A3SS event. The reverse transcription polymerase chain reaction further confirmed the presence of a truncated transcript variant of VvPE2 in the FA-treated berries.Our study provides a comprehensive analysis of AS events in postharvest grape berries using transcriptome sequencing and underscores the pivotal role of VvPE2 during the postharvest storage of grape berries. 展开更多
关键词 GRAPE postharvest softening folic acid alternative splicing Pectinesterase 2 alternative 3'splice site(A3SS)
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LAG3剪接变异体对肝癌细胞增殖及索拉非尼耐药的影响
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作者 陈帅 梁燕文 +3 位作者 林建梭 苏均宇 任建卫 刘义 《药学研究》 2026年第1期17-21,95,共6页
目的构建在肝癌细胞表达的免疫活化基因3(LAG3)剪接变异体稳转细胞株,探讨剪接变异体对肝癌细胞增殖及对索拉非尼耐药性的影响。方法以Hep3B cDNA为模板,采用巢式PCR扩增LAG3基因,对琼脂糖凝胶电泳分离差异条带测序并与NCBI数据库中的L... 目的构建在肝癌细胞表达的免疫活化基因3(LAG3)剪接变异体稳转细胞株,探讨剪接变异体对肝癌细胞增殖及对索拉非尼耐药性的影响。方法以Hep3B cDNA为模板,采用巢式PCR扩增LAG3基因,对琼脂糖凝胶电泳分离差异条带测序并与NCBI数据库中的LAG3转录变体对比,发现其相对人全长LAG3 mRNA缺少3号外显子(LAG3Δ3)。构建LAG3Δ3-pIGvetor重组质粒,通过慢病毒系统将重组质粒转染至Hep3B细胞,嘌呤霉素筛选后,利用RT-qPCR和Western blotting验证稳转细胞是否构建成功,MTT法评估细胞增殖及耐药性。结果筛选后的Hep3B-LAG3Δ3细胞LAG3Δ3 mRNA及蛋白水平较对照Hep3B-NC细胞增高(P<0.0001)。过表达LAG3Δ3细胞的增殖能力更强,其对索拉非尼的耐药性相比Hep3B-NC细胞有所增强(P<0.05)。结论成功构建Hep3B-LAG3Δ3剪接变异体稳转细胞株,LAG3Δ3可促进肝癌细胞增殖,减弱肝癌细胞对索拉非尼的敏感性。 展开更多
关键词 淋巴细胞活化因子3 剪接变异体 稳转细胞 耐药 索拉非尼
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MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响 被引量:1
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作者 黄潇枫 盛灵慧 +1 位作者 刘希 王喆 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2024年第2期167-171,共5页
目的:探讨MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响及其可能机制。方法:MN9D细胞分别以0、1μmol/L MPTP处理(对照组和MPTP组),或分别以pcDNA4、pcDNA4-BACE2转染(对照组和BACE2组),采用Western blot法检测BACE2、Cleaved Caspase-... 目的:探讨MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响及其可能机制。方法:MN9D细胞分别以0、1μmol/L MPTP处理(对照组和MPTP组),或分别以pcDNA4、pcDNA4-BACE2转染(对照组和BACE2组),采用Western blot法检测BACE2、Cleaved Caspase-3和内源性DSG2蛋白的表达。MN9D细胞分为DSG2组、DSG2+BACE2组和DSG2+BACE2+BACE抑制剂组,分别转染pENTER-DSG2+pcDNA4、pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2以及转染pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2后用1μmol/L的BACE抑制剂处理,采用Western blot法检测DSG2全长以及DSG2各片段的表达。结果:与对照组相比,MPTP组中BACE2及Cleaved Caspase-3表达均上升(P<0.05);与对照组相比,BACE2组Cleaved Caspase-3表达增加,内源性DSG2表达减少(P<0.05)。与DSG2组相比,DSG2+BACE2组中全长DSG2表达下降,DSG2羧基末端片段以及胞外DSG2氨基末端片段均增多(P<0.05),而DSG2+BACE2+BACE抑制剂组中全长DSG2及各DSG2片段的表达与DSG2组相似(P>0.05)。结论:MPTP可通过上调BACE2促进MN9D细胞凋亡,其机制可能与BACE2对DSG2的剪切有关;BACE2和DSG2可能参与了帕金森病的发病。 展开更多
关键词 MPTP BACE2 蛋白剪切 CASPASE-3 帕金森病
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基于不同拼接方式的三维点云拼接精度对比 被引量:8
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作者 马勇 韩超斌 石林峰 《矿山测量》 2018年第2期100-103,共4页
三维激光扫描仪能快速、大量的获取点云数据,完成实景复制。但通常需要多测站扫描才能完成外业数据采集,内业数据处理还需完成点云的拼接,将所有数据转换到同一个坐标系下。点云拼接主要是基于靶球或者同名点进行,针对同名点的点云拼接... 三维激光扫描仪能快速、大量的获取点云数据,完成实景复制。但通常需要多测站扫描才能完成外业数据采集,内业数据处理还需完成点云的拼接,将所有数据转换到同一个坐标系下。点云拼接主要是基于靶球或者同名点进行,针对同名点的点云拼接方式,同名点识别影响因素较多的问题,因此提出基于灰度图的拼接方式。实验对两种拼接方式进行对比,计算拼接精度,得出灰度图拼接精度明显优于点云控制点的拼接。灰度图拼接数据精度高,能够满足隧道测量的基本要求。 展开更多
关键词 点云 拼接精度 三维激光扫描仪 同名点 坐标转换
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