疏风解毒胶囊调控TLR4/TRIF/TBK1信号通路改善人冠状病毒229E感染小鼠肺部炎症

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作者 包蕾 耿子涵 崔晓兰 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第24期79-85,共7页

目的:研究疏风解毒胶囊在人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染小鼠模型中的抗炎和免疫调节作用。方法:将48只BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,氯喹阳性组(0.0758 g·kg^(-1)),疏风解毒胶囊高、中、低剂量组(1.872、0.936、0.468 g·... 目的:研究疏风解毒胶囊在人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染小鼠模型中的抗炎和免疫调节作用。方法:将48只BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,氯喹阳性组(0.0758 g·kg^(-1)),疏风解毒胶囊高、中、低剂量组(1.872、0.936、0.468 g·kg^(-1)),每组8只。采用滴鼻感染HCoV-229E病毒液建立冠状病毒感染模型。感染后第4天脱颈椎处死小鼠,通过称量肺湿质量和计算肺指数评估肺部病理变化,同时使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、Toll/含Toll-白细胞介素受体结构域的诱导型β干扰素适应因子(TRIF)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、TANK结合激酶1(TBK1)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)及磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)等关键基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠的肺指数显著升高(P<0.01),肺间质有大量炎症渗出,并显著升高TLR4、TRIF、TRAF6、TBK1、p-TBK1、IRF3和p-IRF3蛋白的表达(P<0.01),说明HCoV-229E引起了严重的肺部炎症。与模型组比较,疏风解毒胶囊各剂量组显著降低了小鼠的肺指数(P<0.01),其中高、中剂量组的肺指数抑制率分别为78.18%和79.27%。同时,Real-time PCR和Western blot结果显示,疏风解毒胶囊中剂量组显著降低TLR4、TRIF、TRAF6、TBK1、p-TBK1及p-IRF3的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。结论:疏风解毒胶囊能够通过抑制TLR4/TRIF/TBK1信号通路的过度激活,减轻冠状病毒感染引发的肺部炎症反应和组织损伤。 展开更多

关键词 疏风解毒胶囊 冠状病毒 Toll样受体4/含Toll-白细胞介素受体结构域的诱导型β干扰素适应因子/TANK结合激酶1(TLR4/TRIF/TBK1)信号通路 免疫调节 人冠状病毒229e(HCoV-229e)

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基于线粒体自噬探讨马鞭草苷对HCoV-229E感染巨噬细胞损伤的调控机制 被引量：1

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作者 孙绮悦 包蕾 +9 位作者 耿子涵 赵荣华 李舒冉 崔羲和 张敬升 刘宪 谢锐 崔晓兰 郭姗姗 孙静 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第21期29-37,共9页

目的:研究马鞭草苷对人冠状病毒(HCoV)-229E感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)损伤的保护作用及机制,为马鞭草苷的开发及应用提供实验依据。方法:采用不同浓度的HCoV-229E感染RAW264.7巨噬细胞,通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)... 目的:研究马鞭草苷对人冠状病毒(HCoV)-229E感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)损伤的保护作用及机制,为马鞭草苷的开发及应用提供实验依据。方法:采用不同浓度的HCoV-229E感染RAW264.7巨噬细胞,通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选最佳条件,建立冠状病毒感染巨噬细胞损伤模型。将细胞随机分为正常组、马鞭草苷组(125μmol·L^(-1))、模型组(HCoV-229E)和HCoV-229E+马鞭草苷组(HCoV-229E+马鞭草苷125μmol·L^(-1))。采用CCK-8检测细胞存活率,计算马鞭草苷对RAW264.7细胞的最大无毒浓度(CC_(0))、半数细胞毒性浓度(CC50),以及对HCoV-229E感染细胞的半数效应浓度(EC50)及治疗指数(SI)。通过钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein/PI)双染法检测细胞活性与毒性,JC-1染色法检测线粒体膜电位(MMP)变化,mito-Keima腺病毒标记法评估各组细胞的线粒体自噬水平。结果:以HCoV-229E原倍浓度感染RAW264.7细胞36 h成功建立巨噬细胞感染模型。马鞭草苷的CC_(0)值为125μmol·L^(-1),CC50值为448.25μmol·L^(-1);对HCoV-229E感染细胞的EC50值为46.28μmol·L^(-1),SI值为9.68。与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞死亡比例显著升高(P<0.01),MMP显著下降(P<0.01),线粒体自噬水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,马鞭草苷干预后细胞存活率显著升高(P<0.01),细胞死亡比例显著降低(P<0.01),MMP下降情况显著改善(P<0.01),线粒体自噬水平显著增强(P<0.01)。结论:马鞭草苷可提高HCoV-229E感染后巨噬细胞的存活率,其机制可能与激活线粒体自噬,维持MMP稳定,减轻线粒体损伤有关。 展开更多

关键词 马鞭草苷 人冠状病毒(HCoV)-229e 单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7) 线粒体自噬 线粒体膜电位

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基于蛋白质组学探讨马鞭草苷对人冠状病毒229E感染小鼠肺损伤的治疗作用及机制

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作者 孙绮悦 郭姗姗 +9 位作者 高双荣 包蕾 耿子涵 李舒冉 赵荣华 张敬升 刘宪 谢锐 崔晓兰 孙静 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第24期69-78,共10页

目的:评价马鞭草苷对人冠状病毒229E(HCoV-229E)体内、外感染模型的药理作用,并通过蛋白质组学分析,初步探究马鞭草苷的抗病毒作用机制。方法:体外采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)建立HCoV-229E感染人非小细胞肺癌细胞系(A549)细胞损... 目的:评价马鞭草苷对人冠状病毒229E(HCoV-229E)体内、外感染模型的药理作用,并通过蛋白质组学分析,初步探究马鞭草苷的抗病毒作用机制。方法:体外采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)建立HCoV-229E感染人非小细胞肺癌细胞系(A549)细胞损伤的模型,将A549细胞作为5组,正常组、模型组和3个马鞭草苷处理浓度组(125、62.5、31.25μmol·L^(-1)),通过细胞存活率检测、免疫荧光染色方法评价马鞭草苷的细胞保护活性;体内将30只BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,磷酸氯喹组,马鞭草苷高、低剂量组(40、20 mg·kg^(-1)),每组6只。建立HCoV-229E感染小鼠肺损伤模型评价马鞭草苷的治疗作用。分别通过检测肺指数、肺抑制率评价肺部损伤情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)评价肺部炎症因子的严重程度;微计算机断层扫描(Micro-CT)检测肺部的形态和结构;苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理学改变;进一步采用四维数据独立组识别(4D-DIA)蛋白质组学方法,通过差异表达蛋白筛选、功能注释、富集分析及蛋白互作网络分析方法,初步分析马鞭草苷治疗HCoV-229E感染小鼠肺损伤模型的可能机制。结果:A549细胞选用HCoV-229E原倍浓度感染36 h建立体外感染模型,马鞭草苷的最大无毒浓度为125μmol·L^(-1),半数细胞毒性浓度(CC_(50))值为288.8μmol·L^(-1)。与正常组比较,模型组细胞存活率显著下降(P<0.01),死亡细胞比例显著增加(P<0.01),线粒体损伤,膜电位显著降低(P<0.01);而不同浓度马鞭草苷(125、62.5、31.25μmol·L^(-1))处理后,均能显著提高细胞存活率(P<0.01),降低细胞死亡比例(P<0.01),并调节线粒体膜电位(P<0.01)。体内实验进一步验证了马鞭草苷对HCoV-229E感染小鼠的治疗作用。与正常组比较,模型组小鼠肺指数显著升高(P<0.01),肺组织损伤明显加重,肺部体积肿大,炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达显著升高(P<0.01)。而在马鞭草苷处理组中,这些病理改变显著改善,肺指数显著降低(P<0.01),肺组织损伤减轻,肺部体积肿大缓解,炎症因子表达也显著降低(P<0.01)。蛋白质组学分析结果显示,与正常组比较,模型组富集到多种与抗病毒免疫反应相关信号通路,包括核转录因子-κB(NF-κB)信号通路(P<0.05)。与模型组比较,马鞭草苷组富集到多种与炎症反应和自噬相关的信号通路(P<0.05),提示马鞭草苷可能通过调节这些信号通路发挥其抗病毒和抗炎作用。结论:马鞭草苷在HCoV-229E感染体内、外模型中均表现出较好的治疗作用,其机制可能与NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路和线粒体自噬有关。 展开更多

关键词 马鞭草苷 人冠状病毒229e(HCoV-229e) 蛋白质组学 人非小细胞肺癌细胞(A549) 小鼠肺损伤 肺部炎症

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一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E感染致小鼠肺炎的影响

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作者 王馨蔚 彭一峰 +10 位作者 孙静 冀祖恩 包蕾 罗恒磊 耿子涵 张虎娟 李舒冉 张敬升 郭姗姗 崔晓兰 赵荣华 《中国药物警戒》 2025年第8期851-855,862,共6页

目的探究一叶抗流感胶囊(YYKLG)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染所致小鼠肺炎的治疗作用。方法采用HCo V-229E滴鼻感染建模,小鼠根据体质量随机分为正常组,模型组,磷酸氯喹组,连花清瘟颗粒组,YYKLG高、中、低3个剂量组(分别为0.70、0.3... 目的探究一叶抗流感胶囊(YYKLG)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染所致小鼠肺炎的治疗作用。方法采用HCo V-229E滴鼻感染建模,小鼠根据体质量随机分为正常组,模型组,磷酸氯喹组,连花清瘟颗粒组,YYKLG高、中、低3个剂量组(分别为0.70、0.35、0.18 g·kg^(-1)·d^(-1)),共7组。感染当天开始正常组及模型组灌胃给予蒸馏水处理,其余组灌胃给药处理,共4 d,第5天对各组小鼠称重、解剖,评估YYKLG在高、中、低3个不同剂量下对小鼠肺指数、病毒载量、肺内细支气管及肺组织病理变化的影响。结果YYKLG高、中剂量组小鼠肺指数明显下降;YYKLG高、中、低3个剂量组肺组织病毒载量显著下降。中药给药组与模型组相比均可不同程度减轻小鼠肺部细支气管和肺组织病理损伤,其中高、中剂量组的病变程度与模型组的病变程度比较,差异具有统计学意义。结论YYKLG可以改善HCoV-229E病毒感染所致的模型小鼠肺炎症状,以期为中药治疗呼吸道疾病的临床应用提供参考。 展开更多

关键词 一叶抗流感胶囊 人冠状病毒229e 肺指数 肺指数抑制率 病毒载量 病理变化 小鼠

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人冠状病毒229E湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型的建立及评价 被引量：7

5

作者 庞博 张敬升 +8 位作者 郭姗姗 孙静 包蕾 徐英莉 曹姗 陈梦苹 王雅欣 赵荣华 崔晓兰 《中国药物警戒》 2023年第1期40-45,共6页

目的在采用外部湿热因素造成中医湿毒袭肺小鼠模型的基础上,同时采用人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染小鼠造成肺炎模型,建立湿热疫毒袭肺病症结合小鼠模型。方法对湿热感染不同天数的小鼠中医证候表征、肺指数和肺部病毒载量、肺部病理... 目的在采用外部湿热因素造成中医湿毒袭肺小鼠模型的基础上,同时采用人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染小鼠造成肺炎模型,建立湿热疫毒袭肺病症结合小鼠模型。方法对湿热感染不同天数的小鼠中医证候表征、肺指数和肺部病毒载量、肺部病理结构与影像学、小鼠血清胃泌素(Gas)、下丘脑前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(c AMP)及肌糖原评价湿毒疫动物模型。结果人冠状病毒肺炎湿热疫毒袭肺证小鼠病证结合模型小鼠饮食量下降和饮水量增加,毛发枯燥发黄,行动迟缓爱扎堆,大便便溏。肺指数增加(P<0.01),肺部病毒核酸呈阳性表达,肺组织可见病理结构变化及斑点状阴影。小鼠体内肌糖原含量、血清胃泌素含量、下丘脑c AMP、PGE2的含量在感染后均有显著升高(P<0.05)。结论本研究建立的HCoV-229E湿热疫毒袭肺证病证结合小鼠模型与临床疾病表征具有一致性,可为诊断及治疗具有该证候的病毒性肺炎与开发相关药物研究提供一种可靠的评价动物模型。 展开更多

关键词 人冠状病毒229e 湿热疫毒袭肺 病毒性肺炎 中医证候 动物模型

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SARS-CoV N蛋白与人冠状病毒HCoV-OC43和HCoV-229E的交叉反应表位及特异表位的确定 被引量：1

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作者 闫克夏 谭文杰 +5 位作者 张相民 王慧娟 张陵林 周为民 夏宁邵 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期248-255,共8页

为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位，对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒，并制备了相应的小鼠免疫血清。用... 为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位，对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒，并制备了相应的小鼠免疫血清。用间接免疫荧光方法，检测了3种N蛋白的表达及其与3种冠状病毒免疫动物血清和SARS病人恢复期血清之间的反应。与此同时，用Western blot方法分析了原核表达的39个不同区段的SARS-CoVN蛋白与3种冠状病毒动物免疫血清和SARS病人恢复期血清之间的交叉反应性。免疫荧光检测结果表明，SARS-CoV、HCov-OC43和HCoV-229E3种病毒的N蛋白在重组痘苗病毒感染的HeLa细胞中均可以特异表达；3种N蛋白之间存在明显交叉免疫反应。Western blot结果显示，SARS-CoV N蛋白的表位主要位于30～60aa、170～184aa、301～320aa和360～422aa；与HCoV-OC43的交叉反应表位主要位于30～60aa、90～120aa、204～214aa和320～360aa；与HCoV-229E的交叉反应表位主要位于30～60aa、150～160aa和301～360aa。含SARS-CoVN蛋白特异表位的重组肽N155b（60～214aa）和N185（30～214aa）只与SARS病人恢复期血清和灭活SARS-CoV免疫小鼠的血清反应，而不与灭活HCoV-OC43和HCoV-229E免疫的山羊血清产生交叉反应。上述结果为使用SARS-CoVN蛋白抗原进行特异诊断试剂的研究，提供了重要的实验依据。 展开更多

关键词 SARS-COV HCoV-OCA3 HCoV-229e N蛋白 抗原表位

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冠状病毒HcoV-229E S1蛋白的原核表达及鉴定 被引量：1

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作者 马淑霞 黄列 +7 位作者 徐锡 王春敏 代月 任继秋 杨春佳 崔刚 李丽秋 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期207-209,共3页

目的克隆表达冠状病毒HcoV-229E S1基因片段,表达S1蛋白。方法合成冠状病毒HcoV-229ES1蛋白特异性基因片段并克隆入pET21a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG高效诱导表达得到重组蛋白,用金属螯合亲和层析纯化,并通过Western blot对... 目的克隆表达冠状病毒HcoV-229E S1基因片段,表达S1蛋白。方法合成冠状病毒HcoV-229ES1蛋白特异性基因片段并克隆入pET21a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG高效诱导表达得到重组蛋白,用金属螯合亲和层析纯化,并通过Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定。结果获得了主要以包涵体形式存在的目的蛋白,Western blot鉴定其为S1基因片段蛋白。结论成功构建了HcoV-229E S1蛋白的表达载体,并在BL21(DE3)中得到了高效表达,为下一步表达蛋白免疫原性及疫苗抗病毒保护性测定打下了基础。 展开更多

关键词 冠状病毒HeoV-229e S1蛋白 原核表达

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感冒229E病毒3CL蛋白酶抑制剂金丝桃苷衍生物的合成及其构效关系研究 被引量：3

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作者 贾琦 李剑 +3 位作者 陈莉莉 刘晓峰 谭红胜 朱维良 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期288-294,共7页

目的寻找作为感冒229E抗原型冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的新化学结构。方法运用分子对接方法在ACD化合物库中发现天然产物金丝桃苷是潜在的新型抑制剂,借助分子模拟的方法进行结构改造,设计并合成了5个金丝桃苷衍生物,采用表面等离子共振(... 目的寻找作为感冒229E抗原型冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的新化学结构。方法运用分子对接方法在ACD化合物库中发现天然产物金丝桃苷是潜在的新型抑制剂,借助分子模拟的方法进行结构改造,设计并合成了5个金丝桃苷衍生物,采用表面等离子共振(SPR)法测试这些化合物与该蛋白酶的结合能力。结果与结论衍生物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ与蛋白酶的结合能力比原天然产物Ⅰ提高了3倍以上,它们的结合构象也明显不同于Ⅰ与SARS病毒3CL蛋白酶的结合构象。这些结合模式的差异为设计选择性更好的感冒病毒3CL蛋白酶抑制剂提供了有益的参考信息。将计算机辅助药物分子设计、有机合成和生物活性测试有机地结合起来,是发现和设计感冒229E型病毒3CL蛋白酶新型选择性抑制剂的有效途径。 展开更多

关键词 金丝桃苷 感冒病毒229e抗原型 3CL蛋白酶抑制剂 构效关系(SAR) 表面等离子共振(SPR)

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冠状病毒HCoV-229E S1蛋白片段的免疫原性分析

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作者 黄列 徐锡 +1 位作者 马淑霞 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期598-600,共3页

目的表达和纯化HCoV-229E的S1蛋白片段(S1 417-547),分析其诱导的免疫应答。方法将纯化蛋白免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及血清IL-4和IFN-γ含量,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布,观察其诱导的免疫应答。结果表达... 目的表达和纯化HCoV-229E的S1蛋白片段(S1 417-547),分析其诱导的免疫应答。方法将纯化蛋白免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及血清IL-4和IFN-γ含量,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布,观察其诱导的免疫应答。结果表达蛋白经金属螯合获得纯化,并诱导小鼠产生了高滴度的抗体。脾脏CD4+和CD8+比例均升高,CD4+/CD8+比值下降;免疫鼠血清IFN-γ和IL-4水平显著升高。结论成功构建了HCoV-229E S1蛋白的表达载体,并在BL21(DE3)中得到了高效表达,表达蛋白免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。 展开更多

关键词 冠状病毒HcoV-229e S1蛋白 免疫应答

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用RT-PCR法鉴定人冠状病毒SARS、229E和OC43

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作者 邹丽容 李晖 +1 位作者 柯昌文 黄平 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第5期513-515,553,共4页

目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物... 目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物,然后通过对扩增片断测序、限制性酶切方法和根据扩增片断的长度进行鉴定。结果:两种方法均能扩增到与预期目标一致的片断,特异性和灵敏度高,能快速区分3种病毒。结论:这些方法将为了解冠状病毒在呼吸道感染中的作用提供一个有利的工具。 展开更多

关键词 SAILS冠状病毒 冠状病毒229e 冠状病毒OCA3 逆转录聚合酶链式反应

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葛根汤颗粒对人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠肺炎模型的治疗作用 被引量：12

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作者 耿子涵 鲍岩岩 +7 位作者 包蕾 赵荣华 孙静 时宇静 郭姗姗 陶夏莉 高英杰 崔晓兰 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第19期34-41,共8页

目的:研究葛根汤颗粒对人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合肺炎小鼠的治疗作用。方法:BALB/c小鼠分为正常组、感染组、寒湿组、模型组、磷酸氯喹组(0.18 g·kg^(-1))、干扰素α2b(IFN-α2b)组(1.83×10^(6)U·... 目的:研究葛根汤颗粒对人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合肺炎小鼠的治疗作用。方法:BALB/c小鼠分为正常组、感染组、寒湿组、模型组、磷酸氯喹组(0.18 g·kg^(-1))、干扰素α2b(IFN-α2b)组(1.83×10^(6)U·kg^(-1))及葛根汤颗粒高、低剂量组(6.6、3.3 g·kg^(-1)),每组10只,采用寒湿环境加hCoV-229E感染进行造模并给药。观察小鼠一般状态及肺指数,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织病毒载量,用苏木素-伊红(HE)染色法评价肺组织病变,运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清胃肠激素、肺组织炎性因子的水平,利用流式细胞术检测外周血淋巴细胞百分比。结果:葛根汤颗粒能够明显缓解模型小鼠精神萎靡、四肢无力、大便黏腻等状态;葛根汤颗粒高剂量组能够明显降低模型小鼠的肺指数、组织病理学评分、血清胃动素水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,葛根汤颗粒高、低剂量组均可明显升高血清胃泌素水平(P<0.05,P<0.01),明显升高外周血CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分比(P<0.05,P<0.01),显著降低肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平(P<0.01),并使白细胞介素-6(IL-6)水平呈现降低趋势。结论:葛根汤颗粒能够改善hCoV-229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠的一般体征,调节胃肠激素水平,降低肺指数和肺组织病理学评分,并可能通过抑制肺组织中炎性细胞因子、恢复外周血淋巴细胞百分比发挥免疫调节作用,从而对模型小鼠起到治疗作用。 展开更多

关键词 葛根汤颗粒 寒湿疫毒袭肺证 病毒性肺炎 人冠状病毒229e(hCoV-229e) 免疫调节 白细胞介素(IL) 肿瘤坏死因子(TNF)

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人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型的建立及评价 被引量：12

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作者 耿子涵 包蕾 +6 位作者 郭姗姗 时宇静 鲍岩岩 赵荣华 孙静 高英杰 崔晓兰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第1期3-12,67,共11页

目的建立人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型,观察其中医证候、疾病表现与病毒性肺炎典型临床表现的一致性,验证该模型在药效评价中的可靠性。方法将BALB/c幼龄小鼠置于具有寒湿环境的人工气候箱中,并叠加hCoV-2... 目的建立人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型,观察其中医证候、疾病表现与病毒性肺炎典型临床表现的一致性,验证该模型在药效评价中的可靠性。方法将BALB/c幼龄小鼠置于具有寒湿环境的人工气候箱中,并叠加hCoV-229E滴鼻感染的方法建立小鼠模型,以仅进行感染、仅置于寒湿环境、正常饲养的小鼠分别作为对照。评价模型小鼠的中医证候相关外观行为表征,以及肺指数、肺组织中的病毒载量及活病毒存在情况、肺部组织病理学及影像学改变、血清胃肠激素水平、淋巴细胞的百分比和肺组织中的炎性细胞因子水平变化,并使用能够治疗寒湿疫毒袭肺证的复方中药"寒湿疫方",评价该模型在药效评价中的可靠性。结果与正常小鼠相比,模型小鼠表现出与寒湿证以及与病毒性肺炎疾病相一致的外观和行为,包括摄食和饮水量减少、活跃程度下降、便溏、毛发油腻(P<0.05或P<0.01),以及肺部病毒核酸阳性、肺指数增加(P<0.01)、肺及支气管组织病理学评分显著增加(P<0.05或P<0.01)、胃动素水平上升(P<0.01)、胃泌素水平降低(P<0.01)、外周血淋巴细胞百分比降低(P<0.01)、炎性细胞因子水平升高(P<0.01)。给予复方中药后,各指标有不同程度的缓解(P<0.05或P<0.01)。结论本研究建立的hCoV-229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型与临床疾病表现具有一致性,为治疗该证候肺炎的药物筛选提供了一种潜在的方法。 展开更多

关键词 人冠状病毒229e 病毒性肺炎 中医药 病证结合模型 寒湿疫毒袭肺证

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急性呼吸道感染病例中人冠状病毒229E感染情况及病毒基因特征分析 被引量：3

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作者 李丰辰 蒋豪然 +14 位作者 夏百成 马洪滨 朱汝南 许晶 黄艳智 郜振国 胡孔新 李岩 向星宇 吴巨龙 许红梅 张凤 王文慧 张燕 崔爱利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期13-26,共14页

为阐明我国全人群急性呼吸道感染(Acute respiratory infection,ARI)病例中人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCoV-229E)感染情况及病毒基因特征,本研究对2009-2021年间中国十一省份15,335例ARI监测病例中HCoV-229E核酸阳性病例... 为阐明我国全人群急性呼吸道感染(Acute respiratory infection,ARI)病例中人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCoV-229E)感染情况及病毒基因特征,本研究对2009-2021年间中国十一省份15,335例ARI监测病例中HCoV-229E核酸阳性病例进行描述性流行病学分析,同时对HCoV-229E阳性病例的临床标本进行S基因扩增和测序,阳性序列用于病毒系统发育和进化分析。本研究中共检测出316例HCoV阳性病例,其中38例为HCoV-229E阳性。HCoV-229E检出率在不同季节中差异无统计学意义(χ^(2)=2.345,P=0.504);男性检出率高于女性(χ^(2)=4.546,P<0.05);不同年龄组中,除了5~17岁青少年组未检测到HCoV-229E,其他年龄组间HCoV-229E检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.927,P=0.588)。在38例HCoV-229E阳性病例中有23例(60.53%)为混合感染病例,和HCoV-229E单一感染病例相比,包括肺炎病例在内的下呼吸道感染病例在混合感染病例中比例增高。本研究共获得9条2019-2021年HCoV-229E刺突蛋白(Spike protein,S)基因序列,结合从GenBank中下载的90条HCoV-229E S基因代表性序列共同构建系统发育树。结果表明,全球HCoV-229E序列可划分为Genogroup1~6共6个组,具有明显的时间聚集性。Genogroup 6是目前全球流行的主要优势谱系,位于HCoV-229E系统发育树的末端。本研究所获得的9条HCoV-229E序列均隶属于Genogroup 6,但位于不同分支。S基因分子进化速率约为7.32×10^(-4)替换/位点/年,S蛋白处于负向选择压力下(ω<1),但仍有个别正向选择位点存在,S蛋白多个位点上发生氨基酸突变和N-糖基化位点突变,其中部分突变发生在S蛋白受体结合结构域的3个受体结合环中。本研究通过开展中国内地部分地区ARI病例中HCoV-229E感染情况和病毒基因特征分析,阐述了我国HCoV-229E流行病学特征和病毒分子进化特点,为我国HCoV-229E感染的控制与预防提供基线数据。 展开更多

关键词 人冠状病毒229e 流行特征 系统发育分析 分子进化

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一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E湿热疫毒袭肺小鼠药理作用研究 被引量：3

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作者 张敬升 赵荣华 +8 位作者 张薇 冀祖恩 庞博 徐英莉 曹姗 孙静 郭姗姗 彭一峰 崔晓兰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期233-240,共8页

了解一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCo V-229E)湿热疫毒袭肺小鼠的药理作用,为扩展其临床应用提供参考。使用HCo V-229E滴鼻感染和湿热环境造模小鼠,考察一叶抗流感胶囊高、中、低不同剂量组[0.704g/(kg·... 了解一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCo V-229E)湿热疫毒袭肺小鼠的药理作用,为扩展其临床应用提供参考。使用HCo V-229E滴鼻感染和湿热环境造模小鼠,考察一叶抗流感胶囊高、中、低不同剂量组[0.704g/(kg·d)、0.352g/(kg·d)、0.176g/(kg·d)三个剂量]对小鼠的肺指数、病毒载量和小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α含量及下丘脑中PGE2、cAMP含量,同时检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞比例,并设西药磷酸氯喹和中成药连花清瘟颗粒作为阳性对照药。一叶抗流感胶囊三个剂量组均可降低小鼠肺指数,高剂量组和中剂量组可降低肺炎模型小鼠的病毒载量,三个剂量组肺组织中TNF-α、IL-6及IL-10含量与模型组比较均下降,下丘脑中c AMP、PGE2含量与模型组比较均降低,且差异具有统计学意义;高、中剂量组外周血CD4+、CD8+T百分比与模型组比较升高,差异有统计学意义;高、中剂量组外周血B细胞百分比与模型组比较均下降,但差异无统计学意义。表明一叶抗流感胶囊对HCo V-229E湿热疫毒袭肺小鼠模型具有治疗作用。 展开更多

关键词 一叶抗流感胶囊 人冠状病毒229e 肺指数 病毒载量 肺组织 下丘脑 外周血

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银翘解毒软胶囊体外抑制人冠状病毒229E及其介导的炎症的研究 被引量：3

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作者 刘振海 杨春光 +4 位作者 雷标 王周琅 谢玉琪 杨子峰 谢斌 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期64-68,共5页

目的探究银翘解毒软胶囊(YQ)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法通过经典的体外细胞模型分析银翘解毒软胶囊的体外毒性及对HCoV-229E的抑制作用;通过空斑实验验证银翘解毒软胶囊对HCoV-229E的抑制作用;应用实时定量PCR法... 目的探究银翘解毒软胶囊(YQ)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法通过经典的体外细胞模型分析银翘解毒软胶囊的体外毒性及对HCoV-229E的抑制作用;通过空斑实验验证银翘解毒软胶囊对HCoV-229E的抑制作用;应用实时定量PCR法分析银翘解毒软胶囊对HCoV-229E介异的炎症因子表达水平的影响。结果银翘解毒软胶囊对人肝癌细胞的50%毒性浓度为(3 315±131)μg·mL^(-1),对HCoV-229E的50%抑制浓度为(361.9±36)μg·mL^(-1),选择指数为9.16。空斑实验表明银翘解毒软胶囊2 mg·mL^(-1)几乎可完全抑制病毒复制(P<0.001)。银翘解毒软胶囊在2 mg·mL^(-1)浓度作用下,可明显抑制由冠状病毒HCoV-229E感染介导的炎症因子如趋化因子(C-C基元)配体5(CCL-5,P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1,P<0.001)、白细胞介素6(IL-6,P<0.001)、白细胞介素8(IL-8,P<0.001)和肿瘤坏死因子α(TNF-α,P<0.001)核酸的升高。结论体外实验显示银翘解毒软胶囊可抑制人冠状病毒HCoV-229E的复制及其介导的炎症反应,具有作为抗冠状病毒药物的开发价值。 展开更多

关键词 银翘解毒软胶囊 人冠状病毒229e(HCoV-229e) 炎症因子 人肝癌细胞Huh7

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伏湿小鼠模型构建及其对人冠状病毒HCoV-229E易感性研究 被引量：2

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作者 秦聖乐 杨子峰 +4 位作者 赵瑾 黄婉怡 邓玲珠 王玉涛 王新华 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1348-1355,共8页

目的构建小鼠伏湿模型,并观察该模型对人冠状病毒HCoV-229E的易感性。方法将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组10只。模型组和中药组采用高脂饮食+湿度(95±5)%环境21 d建立伏湿模型小鼠,中药组15 d起给予给予五... 目的构建小鼠伏湿模型,并观察该模型对人冠状病毒HCoV-229E的易感性。方法将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组10只。模型组和中药组采用高脂饮食+湿度(95±5)%环境21 d建立伏湿模型小鼠,中药组15 d起给予给予五指防冠方(11.44 g/kg)灌胃。另取64只小鼠随机分为正常组、正常低滴度[10^(-3)HCoV-229E半数组织培养感染剂量(TCID_(50))]感染组、正常中滴度(10^(-4)TCID_(50))感染组、正常高滴度(10^(-5)TCID_(50))感染组、模型组、伏湿低滴度(10^(-3)TCID_(50))感染组、伏湿中滴度(10^(-4)TCID_(50))感染组、伏湿高滴度(10^(-5)TCID_(50))感染组,每组8只,各组给予相应滴度的HCoV-229E滴鼻,正常组和模型组不予干预。观察小鼠一般情况,测量小鼠体重、肺指数及肺、小肠组织脂多糖(LPS)含量,观察舌组织、肺组织、结肠组织病理,并进行肠道微生物16S rRNA基因测序;检测肺组织炎症因子炎症因子干扰素诱导蛋白10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白β(MIP-β)、趋化因子配体5(RANTES)mRNA表达水平。结果正常组小鼠被毛光滑,大便成形;模型组小鼠出现被毛潮湿、大便变软,肛周黄秽、饮水量减少的表现,结肠隐窝内有少量中性粒细胞浸润;中药组上述表现有所缓解。与正常组比较,模型组的Shannon、Chao1、Sob指数及拟杆菌门、变形菌门、Alistipes、Bacteroides、Ruminiclostridium_5、Ruminiclostridium_9属相对丰度降低(P<0.05,P<0.01),舌组织角化及放线菌门、Jeotgalicoccus、Corynebacterium_1属相对丰度升高(P<0.01)。正常组和模型组肠道微生物菌落构成及19类功能基因有差异(P<0.05,P<0.01),功能基因涉及糖、辅酶和维生素、氨基酸代谢等。与模型组比较,中药组的Chao1、Sob指数及拟杆菌门、Alistipes、Bacteroides、Ruminiclostridium_5、Ruminiclostridium_9属相对丰度升高(P<0.05,P<0.01),舌组织角化及Jeotgalicoccus、Corynebacterium_1属相对丰度降低(P<0.05,P<0.01)。与正常中滴度感染组比较,伏湿中滴度感染组小鼠肺指数(P<0.05);与正常组、模型组、正常中滴度感染组比较,伏湿中滴度感染小鼠肺组织中IP-10、MCP-1、MIP-1β、RANTES mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论本研究采用复合因素成功构建伏湿证小鼠模型,伏湿证小鼠可出现肺组织病理改变、肠道微生态改变;其对人冠状病毒HCoV-229E更易感,感染后炎症因子mRNA升高更明显。 展开更多

关键词 伏湿模型 人冠状病毒HCoV-229e 肠道微生物 易感性 炎症因子

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散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E和OC43感染致小鼠肺炎的作用机制研究 被引量：2

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作者 张敬升 高双荣 +7 位作者 庞博 刘莉娜 徐英莉 曹姗 陈梦苹 张宇 赵荣华 崔晓兰 《中国药物警戒》 2024年第1期51-54,88,共5页

目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂... 目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂量组,高剂量为11 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药52.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量为5.5 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药26.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量为2.75 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药13.2 g·kg^(-1)·d^(-1))。使用人冠状病毒229E和OC43感染小鼠,建立肺炎模型。通过检测肺指数和肺部病理变化等指标评价散寒化湿颗粒对冠状病毒肺炎小鼠的药理作用。结果散寒化湿颗粒在高、中、低3个剂量组均能有效降低小鼠的肺指数,并减轻肺组织的病理损伤。结论散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43感染致小鼠肺炎均具有治疗作用。 展开更多

关键词 散寒化湿颗粒 人冠状病毒229e 人冠状病毒OC43 小鼠 肺炎 肺指数 病理变化

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普通冠状病毒229E株的分子流行病学分析 被引量：2

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作者 马淑霞 李金梁 +1 位作者 谷鸿喜 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期29-31,共3页

目的明确哈尔滨地区普通冠状病毒229E(HumanCoronavirus229E,HcoV229E)株的流行和变异情况及其与SARSCoV的异同,为进一步掌握该地区常见上呼吸道病毒的流行规律及预防,乃至疫苗的制备打下基础。方法利用RTPCR法对2003年上半年采集的部... 目的明确哈尔滨地区普通冠状病毒229E(HumanCoronavirus229E,HcoV229E)株的流行和变异情况及其与SARSCoV的异同,为进一步掌握该地区常见上呼吸道病毒的流行规律及预防,乃至疫苗的制备打下基础。方法利用RTPCR法对2003年上半年采集的部分发热病人血清及血细胞进行筛选,同时采用基因测序、序列分析等手段对扩增的HcoV229ENgene片断进行蛋白和基因分析。结果55例标本中HcoV229ERNA阳性病例5例,占909%;测序结果看出哈尔滨地区检出229E株N基因的序列与已公布的HcoV229ENgene(295802)序列完全相同,所测片断为HcoV229ENgene的部分序列。该基因与猪流行性腹泻病毒、犬冠状病毒、TGEV及猫感染性腹膜炎病毒有一定同源性;但与已公布的SARSCoVNgene序列比较,相似性小于1%。结论(1)该地区发热病人普通冠状病毒229E株阳性率为909%;(2)哈尔滨地区流行的HcoVN基因无变异发生;(3)HcoV229E与猪流行性腹泻病毒、犬冠状病毒、TGEV和猫感染性腹膜炎病毒有一定的同源性;(4)哈尔滨地区HcoV229ENgene与SARSCoVNgene相似性小于1%。 展开更多

关键词 犬冠状病毒 SARS-CoV 发热病人 腹膜炎 分子流行病学 哈尔滨地区 N基因 TGEV 猪流行性腹泻病毒 同源性

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伏湿小鼠感染人冠状病毒HCov-229E后免疫功能状态变化

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作者 柯宏霞 秦聖乐 +2 位作者 许琪华 王玉涛 王新华 《中国中西医结合杂志》 CSCD 北大核心 2024年第12期1496-1502,共7页

目的 通过伏湿小鼠模型感染人冠状病毒HCov-229E,探索伏湿状态下病毒感染机体免疫功能的改变。方法 将24只BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常组、伏湿组、感染组、伏湿感染组,每组6只;伏湿组和伏湿感染组构建伏湿小鼠模型,感染组和伏湿... 目的 通过伏湿小鼠模型感染人冠状病毒HCov-229E,探索伏湿状态下病毒感染机体免疫功能的改变。方法 将24只BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常组、伏湿组、感染组、伏湿感染组,每组6只;伏湿组和伏湿感染组构建伏湿小鼠模型,感染组和伏湿感染组造模第22天给予10^(-4)HCoV-229E半数组织培养感染剂量(TCID_(50))滴鼻,正常组和伏湿组以磷酸盐缓冲液(PBS)代替。观察肺组织病理;测量脾指数、胸腺指数;检测外周血白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lym)、单核细胞(Mono)、中性粒细胞(NE)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、红细胞分布宽度标准差(RDW-SD);Luminex液相芯片法观察血清中趋化因子配体5(CCL5/RANTES)、巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β)、干扰素诱导蛋白10 (IP-10)炎症因子在蛋白水平的表达;免疫组化检测肺组织CD4^(+)、CD8^(+)的表达;流式细胞术检测肺CD4+、CD8+T细胞、自然杀伤(NK)细胞的表达。结果 正常组以及伏湿组小鼠肺组织肺泡结构完整,腔内无明显渗出;感染组小鼠肺间质、肺泡腔内出现较多的组织细胞和中性粒细胞浸润,间质小血管周围出现淋巴细胞浸润,伏湿感染组肺泡炎症浸润现象较感染组加重。与正常组比较,伏湿组胸腺指数、脾指数、外周血WBC、Lym、Mono、NE、肺部CD4+表达、CD4+T细胞比例降低,血清RANTES、MIP-1β、IP-10水平升高(P<0.05,P<0.01)。与感染组比较,伏湿感染组胸腺指数和脾指数降低,外周血RDW-CV、RDW-SD、肺部CD4^(+)、CD8^(+)表达、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞比例、血清RANTES、MIP-1β、IP-10水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论 伏湿小鼠感染人冠状病毒HCov-229E后表现为免疫失衡状态,免疫炎症损伤更严重。 展开更多

关键词 伏湿 人冠状病毒HCoV-229e 免疫功能 中医证型 中西医结合

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云南松松塔抗HIV活性提取物对人冠状病毒229E抑制活性的研究 被引量：3

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作者 李亚飞 尚方建 +2 位作者 罗春雨 石哲芳 刘奇 《大理大学学报》 2023年第10期21-26,共6页

目的:评价云南松松塔抗HIV活性提取物(以下简称“松塔提取物”)对人冠状病毒(HCoV)-229E的抑制活性,初步明确其作用靶点。方法:构建HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合模型及假病毒模型,检测松塔提取物对HCoV-229E的抑制活性;利用时间... 目的:评价云南松松塔抗HIV活性提取物(以下简称“松塔提取物”)对人冠状病毒(HCoV)-229E的抑制活性,初步明确其作用靶点。方法:构建HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合模型及假病毒模型,检测松塔提取物对HCoV-229E的抑制活性;利用时间-移除实验明确作用靶点,时间-添加实验确定其作用时间。结果:松塔提取物能够抑制HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合现象发生,半抑制浓度(IC50)为(0.136±0.010)mg/mL;能有效抑制HCoV-229E假病毒感染,IC50为(0.069±0.015)mg/mL;时间-移除实验以及时间-添加实验显示松塔提取物靶向于HCoV-229E S蛋白,作用在感染早期(1 h前);不同浓度松塔提取物对293T及Huh-7细胞无明显毒性作用。结论:松塔提取物能靶向HCoV-229E S蛋白,在感染早期抑制HCoV-229E的感染,是一种安全性高的候选药物。 展开更多

关键词 云南松 松塔提取物 HCoV-229e 抑制活性

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