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猪圆环病毒2型微滴数字PCR检测方法的建立及临床应用
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作者 刘武函 唐小明 +8 位作者 彭志 张坤 谢怡灵 范仲鑫 王卫国 尚玲 张梦凡 杨青 胡巧云 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期120-125,共6页
为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法... 为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法对90份临床样本进行检测。结果表明:建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法的最佳引物和探针浓度分别为18μmol/L和9μmol/L,退火温度为61℃;能特异性检出PCV-2,与多种常见猪病原[猪圆环病毒3型(PCV-3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)]无交叉反应;最低检测限为3.48 copies/μL;重复性试验中扩增后的拷贝数组内与组间变异系数范围分别在0.91%~6.13%和1.44%~8.53%之间,均小于10%。90份临床样本中,建立的微滴数字PCR方法检出PCV-2阳性样本43份,检出率为47.78%,经统计微滴数字PCR方法检出的阳性样本包含了实时荧光定量PCR方法检出的所有阳性样本,与实时荧光定量PCR方法的符合率为88.89%。说明本研究建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样本(特别是低病毒载量样本)的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 微滴数字pcr 病毒检测 检测方法 特异性试验 敏感性试验 重复性试验
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苹果软枝病毒2实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用
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作者 刘成龙 李凯杰 +5 位作者 范旭东 任芳 崔亚伟 张凤娟 董雅凤 胡国君 《中国果树》 2026年第3期97-104,共8页
苹果软枝病毒2(apple rubbery wood virus 2,ARWV-2)隶属Phenuiviridae科Rubodvirus属,与苹果软枝病的发生有关。根据ARWV-2的L、Ma和Sa链基因组序列分别设计了2对引物,验证后3条链各保留1对用于荧光定量PCR(qPCR)扩增,即AR-2L-F2/R2、A... 苹果软枝病毒2(apple rubbery wood virus 2,ARWV-2)隶属Phenuiviridae科Rubodvirus属,与苹果软枝病的发生有关。根据ARWV-2的L、Ma和Sa链基因组序列分别设计了2对引物,验证后3条链各保留1对用于荧光定量PCR(qPCR)扩增,即AR-2L-F2/R2、AR-2Ma-F2/R2和AR-2Sa-F1/R1。体系优化及灵敏度测定结果显示:3对引物的最佳退火温度均为59.0℃;用量为0.4μL;扩增效率分别为92.1%、92.6%和92.1%;相关系数分别为0.996、0.996和0.998;检测灵敏度分别为10^(4)、10^(4)和10^(5),是普通PCR的100倍,且AR-2Sa-F1/R1为最优引物。随机选取150株田间苹果样品进行检测,结果显示,普通PCR对ARWV-2的检出率为12.67%,而qPCR为22.00%。建立的ARWV-2 TB Green染料法qPCR检测技术特异性强、灵敏度高,可用于田间样品的检测。 展开更多
关键词 苹果 苹果软枝病毒2 实时荧光定量pcr 检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型实时荧光RT-PCR盔甲RNA阳性质控品的构建
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作者 朱向东 孙伟珊 +5 位作者 曹琪 尹春博 杨丹 李硕 邓钰蓱 李文钢 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第3期1759-1765,共7页
本研究旨在利用MS2噬菌体外壳蛋白自组装并包封外源核酸的特性,制备用于猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型(porcine reproductive and respiratory syndrome virus genotype 2,PRRSV-2)RT-qPCR检测阳性质控品,并探究其稳定性及耐RNase特性... 本研究旨在利用MS2噬菌体外壳蛋白自组装并包封外源核酸的特性,制备用于猪繁殖与呼吸综合征病毒基因2型(porcine reproductive and respiratory syndrome virus genotype 2,PRRSV-2)RT-qPCR检测阳性质控品,并探究其稳定性及耐RNase特性。选取PRRSV-2的特异性靶基因(ORF7保守区),插入pET28a(+)/CP-A重组质粒PAC位点下游构建重组载体,经原核表达、硫酸铵沉淀及凝胶过滤层析纯化,获得20~28 nm均一的MS2病毒样颗粒;通过全能核酸酶消化及RT-qPCR,验证其热稳定性和抗RNase能力。结果显示:成功构建含MS2噬菌体外壳蛋白、PAC位点和PRRSV-2靶基因的重组载体,纯化后形成包封靶基因的盔甲RNA,可耐受RNase降解,37℃无菌条件下稳定存在7 d。该盔甲RNA可作为PRRSV-2 RT-qPCR阳性质控品,相比传统合成核酸,优势在于:1)模拟真实病毒核酸状态,监控全检测流程;2)耐RNase能力强;3)3批次批内及批间变异系数均<2%;4)37℃稳定保存7 d,为PRRSV-2检测提供可靠质控工具。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因2 盔甲RNA 实时荧光RT-pcr 质控品 病毒样颗粒 MS2噬菌体
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牛细小病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 杨澳飞 刘飞飞 +10 位作者 陈慧敏 余祖华 韩新雨 贾东鹭 贾钰航 陈建 魏颖 何雷 马雪连 陈松彪 丁轲 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期362-368,共7页
本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)... 本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示,扩增VP2基因片段长度约156 bp,符合目的基因片段大小,经鉴定所构建的重组质粒正确。用该质粒测得SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的最低检测限为3.32×10^(1)copies/μL,而常规PCR方法检测限为3.32×10^(3)copies/μL,表明本研究方法敏感性较高。用该方法检测牛细小病毒Ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛疱疹病毒I型时结果均为阴性,表明本方法特异性强。重复性试验结果表明,组内和组间重复变异率均小于1%,表明该方法具有良好的重复性。分别采用本研究所建立的方法和文献中发表的方法对80份腹泻牛粪便进行检测比较。结果显示,两种方法的阳性检出率均为11%(9/80),总符合率达100%。以上结果表明本研究建立基于BPV-2 VP2基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性、重复性,为BPV-2的临床流行病学调查及快速检测提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 牛细小病毒2 VP2基因 SYBR GreenⅠ荧光定量pcr 建立 应用
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猪链球菌2型的PCR快速检测 被引量:46
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作者 倪艳秀 何孔旺 +5 位作者 王继春 何家惠 还红华 吕立新 陆承平 姚火春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期474-476,共3页
根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C... 根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等检测结果均呈阴性 ,表明了本方法的特异性。用此法对 88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测 ,36份呈阳性 ,同时用玻片凝集试验进行对照检测 ,也全部呈阳性。而此法不需进行细菌的纯分离培养 ,即可用于猪链球菌 2型的快速诊断以及流行病学调查。 展开更多
关键词 链球菌 pcr 快速检测 玻片凝集试验
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采用PCR方法对猪场猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒、猪圆环病毒2型混合感染的诊断研究 被引量:16
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作者 吴志明 闫若潜 +3 位作者 赵明军 盛敏 赵雪丽 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第1期86-89,共4页
采用猪瘟-猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(CSFV-PRRSV)多重PCR诊断试剂盒和猪圆环病毒2型(PCV-2)PCR诊断试剂盒对来自河南省不同地区的6个规模猪场送检的60份临床疑似病料进行了病原学PCR检测。结果表明:60份样品中CSFV、PRRSV、PCV-2感... 采用猪瘟-猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(CSFV-PRRSV)多重PCR诊断试剂盒和猪圆环病毒2型(PCV-2)PCR诊断试剂盒对来自河南省不同地区的6个规模猪场送检的60份临床疑似病料进行了病原学PCR检测。结果表明:60份样品中CSFV、PRRSV、PCV-2感染的阳性率分别为38.3%、30%和43.3%;3种病毒共感染样品数目占所有样品的13.3%,CSFV-PCV-2双感染的比例最高,达到31.7%,PRRSV-PCV-2双感染比例为18.3%,而CSFV-PRRSV双感染比例只有15%。自感染猪内脏器官和血清中均能成功检测出病毒。本研究结果表明PCR诊断可作为临床上这3种病的病原学快速、灵敏的诊断方法,并为猪场猪瘟、猪繁殖障碍与呼吸道综合征、猪圆环病毒2型3种病的流行病学和检测方法的研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒 猪圆环病毒2 pcr 检测
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检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立 被引量:23
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作者 倪艳秀 何孔旺 +4 位作者 王继春 何家惠 还红华 陆承平 姚火春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期20-22,共3页
根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试... 根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株从病猪体内分离的猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,8株呈阳性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是 1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高 ,可作为MRP快速诊断和流行病学调查的手段。 展开更多
关键词 猪链球菌2 溶菌酶释放蛋白 pcr 检测方法
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猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及应用 被引量:9
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作者 郑玉姝 赵朴 +7 位作者 刘俊伟 陈金山 姚四新 赵坤 李任峰 王三虎 刘兴友 张智勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第8期66-68,共3页
根据GenBank登录的PCV2的保守序列,设计1对引物,建立了PCV2的PCR检测方法。试验结果表明,该PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为PCV2的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。
关键词 猪圆环病毒2 pcr 临床诊断 流行病学调查
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基因2型牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立和初步应用 被引量:14
9
作者 任敏 焦海宏 +3 位作者 蒋颖 刘振华 王传彬 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期665-668,共4页
根据已发表的牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)5'非编码区(5'-UTR)的序列,分别设计了针对BVDV-1型、BVDV-2型以及针对BVDV-1和BVDV-2两型的特异性引物和通用引物,以标准参考株BVDV-1NADL株和BVDV-2890株为对照,建... 根据已发表的牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)5'非编码区(5'-UTR)的序列,分别设计了针对BVDV-1型、BVDV-2型以及针对BVDV-1和BVDV-2两型的特异性引物和通用引物,以标准参考株BVDV-1NADL株和BVDV-2890株为对照,建立了分别能检测BVDV-1、BVDV-2和BVDV-1/BVDV-2的RT-PCR检测方法。在此基础上,进一步对疑似BVDV-2感染牛的临床病料组织(脾、淋巴结、心肌、血液等)检测结果表明,在所检测的18份样品中,BVDV-2阳性8份(44%)。经RT-PCR鉴定为阳性的组织病料,进一步通过MDBK细胞进行病毒分离,病毒分离率为100%;结合感染细胞病变观察,间接免疫荧光试验RT-PCR和序列测定鉴定,所分离的病毒均为BVDV-2。上述研究表明,该RT-PCR检测方法敏感、特异;并证实我国牛群已存在BVDV-2的污染或感染。 展开更多
关键词 BVDV-1 BVDV-2 RT—pcr
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猪链球菌2型溶血素基因PCR快速检测方法研究 被引量:14
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作者 马有智 李肖梁 方维焕 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期78-82,共5页
根据猪链球菌2型的溶血素(haemolysin)的基因序列设计一对引物,成功地扩增了溶血素基因,并建立了检测溶血素的PCR方法.用EcoR 限制性内切酶进行酶切,获得了与预期大小一致的869bp和633bp的两个片段.同时另设计一对内引物,进行巢式PCR,... 根据猪链球菌2型的溶血素(haemolysin)的基因序列设计一对引物,成功地扩增了溶血素基因,并建立了检测溶血素的PCR方法.用EcoR 限制性内切酶进行酶切,获得了与预期大小一致的869bp和633bp的两个片段.同时另设计一对内引物,进行巢式PCR,亦能扩增出预期片段.PCR检测的敏感程度可达100个细菌;对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌和猪放线杆菌等的PCR检测结果均呈阴性.表明建立的猪链球菌2型溶血素PCR检测方法,其特异性和敏感性均很高,可作为猪链球菌病快速诊断的方法. 展开更多
关键词 猪链球菌2 溶血素 pcr 限制性内切酶
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PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子 被引量:30
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作者 何孔旺 陆承平 +2 位作者 倪艳秀 王继春 姚火春 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 2002年第3期1-4,共4页
根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C... 根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增出任何条带。用 Xba 和 H ae 分别酶切 PCR扩增产物 ,均获得与预计一致的酶切图谱 ,PCR扩增产物测序结果显示 :其基因序列分别与 Gen Bank上公布的mrp全基因第 5 0 0~ 1 3 1 5位碱基及 epf全基因第 2 441~ 3 0 2 8碱基对一致。PCR检测的敏感度可达 1 0 0个细菌。用建立的 PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测 ,检测的 1 5株 2型分离株中有 1 3株 mrp与 epf均为阳性 ,为典型的高毒力表现型菌株 (mrp+ epf+ ) ,1株为 mrp+ epf- ,1株为 mrp- epf- 。 展开更多
关键词 pcr方法 链球菌 毒力因子 聚合酶链反应
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猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其在临床检测中的应用 被引量:4
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作者 刘健 曹火仁 +4 位作者 周锦萍 鞠厚斌 张维谊 王建 刘佩红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期64-66,共3页
选择猪圆环病毒2型(PCV-2)基因保守区设计1对引物P1和P2,扩增536 bp的片段,该方法可以特异地检测出PCV-2的DNA,而对猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒及未接PCV-2的PK-15细胞均呈阴性;该法能检测出29 ng/L的病毒DNA。对扩增片段进行测... 选择猪圆环病毒2型(PCV-2)基因保守区设计1对引物P1和P2,扩增536 bp的片段,该方法可以特异地检测出PCV-2的DNA,而对猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒及未接PCV-2的PK-15细胞均呈阴性;该法能检测出29 ng/L的病毒DNA。对扩增片段进行测序,结果表明扩增片段属于PCV-2。应用该方法对2008年度上海及周边地区送检的91份临床样本进行了PCV-2的检测,结果表明,阳性样本为52份,阳性率为57.14%。研究结果表明,建立的PCR方法检测PCV-2具有较好的敏感性和特异性,可用于PCV-2感染疑似病例的诊断及其分子流行病学调查。 展开更多
关键词 PCV-2 pcr 检测
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卡氏住白细胞虫rDNAITS-2的PCR扩增与测序 被引量:4
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作者 李国清 薛红 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期573-576,共4页
运用PCR方法扩增了卡氏住白细胞虫rDNA的ITS 2及部分 5 .8S和 2 8S序列 (ITS2 +) ,并对该序列进行了克隆和测序。采用巨型裂殖体为材料 ,并根据SaccharomycescerevisiaerDNA中的 5 .8S、2 8S保守序列所设计的通用引物ITS3、ITS4 ,进行... 运用PCR方法扩增了卡氏住白细胞虫rDNA的ITS 2及部分 5 .8S和 2 8S序列 (ITS2 +) ,并对该序列进行了克隆和测序。采用巨型裂殖体为材料 ,并根据SaccharomycescerevisiaerDNA中的 5 .8S、2 8S保守序列所设计的通用引物ITS3、ITS4 ,进行了虫体ITS2 +的PCR扩增 ,将所扩增片段纯化后成功地克隆于 pGEM Teasy和PMD18 T载体的T T窗口。经双向自动测序显示 ,该ITS2 +片段的大小为 2 70bp ;经NCBIBlast联机检索 ,结果显示 ,所扩片段中 5 .8S序列与S .cerevisiae的 5 .8S序列有部分相同 ,而ITS 2序列为虫体所特有 ;同时经wDNA SIS软件分析 ,显示该ITS 2序列与S .cerevisiae间同源性相对较远 ,而与柔嫩艾美耳球虫间同源性相对较近 ,故而本试验中所测序列为卡氏住白细胞虫的ITS 2特有序列。 展开更多
关键词 卡氏住白细胞虫 rDNAITS-2 POR扩增 测序技术 寄生性原虫病
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新疆西瓜花叶病毒2号遗传变异的PCR-SSCP分析 被引量:5
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作者 黄素芳 向本春 +2 位作者 李虎 刘升学 安仙丽 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期310-313,共4页
新疆地域广阔,各地气候条件差异大。西瓜、甜瓜在新疆种植面积较广,其病毒病的发生和危害较重。西瓜花叶病毒2号(Watermelon mosaic vi-rus2,WMV-2)是致病的主要毒源之一。前人对WMV-2的研究仅限于病原鉴定以及它对瓜类氨基酸的影响,... 新疆地域广阔,各地气候条件差异大。西瓜、甜瓜在新疆种植面积较广,其病毒病的发生和危害较重。西瓜花叶病毒2号(Watermelon mosaic vi-rus2,WMV-2)是致病的主要毒源之一。前人对WMV-2的研究仅限于病原鉴定以及它对瓜类氨基酸的影响,而对它的遗传变异未做研究。为了深入研究新疆不同地域WMV-2致病性的差异,有必要弄清楚新疆的WMV-2有无遗传变异的发生。 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒2 pcr-SSCP分析 遗传变异 新疆 WMV-2 MOSAIC 气候条件 种植面积
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猪链球菌2型多重PCR快速检测方法的建立 被引量:7
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作者 韩雪清 林祥梅 +3 位作者 吴绍强 贾广乐 刘建 梅琳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期112-117,共6页
根据猪链球菌16 S rDNA基因的种特异性基因序列和CPS基因的2型(1或/和2型)型特异基因序列设计了4条引物,建立了快速检测猪链球菌2型(1或/和2型)的多重PCR方法。利用保存的猪链球菌2型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株对该方法进行了... 根据猪链球菌16 S rDNA基因的种特异性基因序列和CPS基因的2型(1或/和2型)型特异基因序列设计了4条引物,建立了快速检测猪链球菌2型(1或/和2型)的多重PCR方法。利用保存的猪链球菌2型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株对该方法进行了敏感性和特异性试验。结果显示,所建立的多重PCR方法特异、敏感,对组织中的猪链球菌2型(1或/和2型)的最低检出水平为30 CFU/mL。用所建立的多重PCR方法对采自江西、北京、珠海、天津、四川等省市的猪扁桃体样品进行了检测,并通过细菌分离和玻片凝集试验对其检测结果进行了验证,结果显示,检出阳性符合率为100%,证实建立的多重PCR方法可用于猪链球菌2型的快速检测。 展开更多
关键词 猪链球菌2 多重pcr 检测 初步应用
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2型鲤疱疹病毒双重PCR快速检测方法的建立及应用 被引量:12
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作者 罗丹 梁利国 +1 位作者 谢骏 吴旭东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期379-382,共4页
为建立快速检测2型鲤疱疹病毒(CyHV-2)的方法,本研究针对CyHV-2三联体蛋白基因的两段保守序列设计特异性引物,建立了CyHV-2双重PCR检测方法,并对反应条件进行优化,扩增的目的片段分别为218 bp和369 bp.特异性试验显示仅CyHV-2扩增出... 为建立快速检测2型鲤疱疹病毒(CyHV-2)的方法,本研究针对CyHV-2三联体蛋白基因的两段保守序列设计特异性引物,建立了CyHV-2双重PCR检测方法,并对反应条件进行优化,扩增的目的片段分别为218 bp和369 bp.特异性试验显示仅CyHV-2扩增出特异性片段,其它病毒均呈阴性;灵敏性试验表明该方法最低可以检测到3&#215;102拷贝/μL的病毒量.对2012年~2013年采集自江苏、湖北、江西、宁夏等地的鲫鱼(Carassiusauratus)样品进行检测,结果表明,该方法检测样品的阳性率为87%.以上结果表明建立的双重PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可以用于CyHV-2的快速检测和病原流行病学调查. 展开更多
关键词 2型鲤疱疹病毒 双重pcr 流行病学调查 快速诊断
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检测猪链球菌2型胞外因子(EF)的PCR方法的建立 被引量:10
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作者 倪艳秀 何孔旺 +4 位作者 王继春 何家惠 还红华 陆承平 姚火春 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期57-59,共3页
根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏... 根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马腺疫链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎霉形体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,7株呈EF阳性 ,1株呈EF 阳性 ,1株呈EF阴性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果 1份为阳性。实验结果表明此法特异性和敏感性均很高 。 展开更多
关键词 猪链球菌2 胞外因子 pcr
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PCR-DGGE法分析温度对A^2/O系统硝化菌群结构的影响 被引量:6
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作者 陶芳 黄燕 +2 位作者 高尚 黄民生 陈诚 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期53-62,共10页
研究了温度对A2/O装置中硝化细菌群落结构的影响,旨在为工艺改进及优化调控提供依据.从A2/O装置的泥水混合液中采集微生物样品并提取微生物总DNA,使用特定引物对从总DNA中扩增出目标DNA片段,然后对扩增的DNA片段进行DGGE,并对凝胶进行... 研究了温度对A2/O装置中硝化细菌群落结构的影响,旨在为工艺改进及优化调控提供依据.从A2/O装置的泥水混合液中采集微生物样品并提取微生物总DNA,使用特定引物对从总DNA中扩增出目标DNA片段,然后对扩增的DNA片段进行DGGE,并对凝胶进行染色和条带统计分析,通过聚类分析构建不同温度下硝化菌群间的相似性关系.结果表明,AOB菌在温度>25℃时,群落结构比较稳定,此时NH4+-N去除率高达95%以上;Nitrobacter菌在温度>20℃时,群落结构则比较稳定,NH4+-N去除率亦可达95%以上;Nitrospira群落结构发生变化较大,相比较而言,15~20℃时最稳定,NH4+-N去除率在75%~95%之间. 展开更多
关键词 A2/O pcr-DGGE 温度影响 硝化细菌 菌群结构
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3种实时荧光PCR仪对120份新型冠状病毒检测标本的检测结果比较 被引量:5
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作者 黄玉兰 韩声付 +5 位作者 曾林子 肯布 张光慧 贾春燕 彭秀娟 杨小蓉 《国际检验医学杂志》 CAS 2020年第22期2732-2735,2739,共5页
目的对不同厂家生产的3种实时荧光PCR仪检测的同一批新型冠状病毒检测标本结果进行比较分析,考察3种实时荧光PCR仪对新型冠状病毒核酸检测结果的差异。方法采用同一厂家同一批号新型冠状病毒核酸检测试剂,运用3种不同型号实时荧光PCR仪... 目的对不同厂家生产的3种实时荧光PCR仪检测的同一批新型冠状病毒检测标本结果进行比较分析,考察3种实时荧光PCR仪对新型冠状病毒核酸检测结果的差异。方法采用同一厂家同一批号新型冠状病毒核酸检测试剂,运用3种不同型号实时荧光PCR仪对120例新型冠状病毒肺炎患者及密切接触者的咽拭子、尿液、唾液、粪便标本进行检测,采用SPSS20.0统计软件对检测结果和检测一致性进行分析。结果3种仪器检出率分别为42.50%、35.00%、38.33%。有95例患者标本通过3种仪器扩增后检测结果一致。以仪器A检测结果为参照,仪器B有21例检测结果不同,两者检出率差异无统计学意义(P>0.05),检测结果一致性一般(K=0.732);仪器C有14例检测结果不同,两者检出率差异无统计学意义(P>0.05),检测结果一致性好(K=0.821)。结论由于不同厂家生产的仪器原理和仪器使用维护状况不同导致检测结果存在一定差异,提示仪器厂家需进一步优化仪器性能,提高检测准确性;同时各检测机构应按照要求对PCR仪进行校准维护,确保仪器状态正常,并尽可能采取多种质控手段以确保检测结果准确性。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 pcr 核酸检测
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新现猪圆环病毒3型及圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立与应用 被引量:8
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作者 张帆帆 李龙显 +8 位作者 叶昱 李凯 郭楠楠 张敏 黄冬艳 吴琼 何后军 宋德平 唐玉新 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期136-141,共6页
根据GenBank数据库中的新现猪圆环病毒3型(PCV-3)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的OFR2基因设计了2对扩增PCV-3和PCV-2的特异性引物,通过优化各反应条件,建立同时检测PCV-3和PCV-2的双重PCR方法。敏感性和特异性结果显示,该方法对PCV-3和PCV-2... 根据GenBank数据库中的新现猪圆环病毒3型(PCV-3)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的OFR2基因设计了2对扩增PCV-3和PCV-2的特异性引物,通过优化各反应条件,建立同时检测PCV-3和PCV-2的双重PCR方法。敏感性和特异性结果显示,该方法对PCV-3和PCV-2的最低核酸检测量均为1.0×103拷贝/μL,而对猪伪狂犬病毒(PRV)、猪delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪瘟病毒(CSFV)的扩增结果均为阴性。应用所建立的双重PCR检测了临床上256份样品,结果表明,PCV-3和PCV-2感染的阳性率分别为0.78%(2/256)和86.3%(221/256),仅有1份样品为PCV-3和PCV-2混合感染,混合感染阳性率为0.39%(2/256)。试验结果表明,本研究建立的PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为猪群中PCV-3和PCV-2的临床快速诊断和流行病学调查提供了一种工具。 展开更多
关键词 新现猪圆环病毒3型 猪圆环病毒2 双重pcr 应用
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