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2015—2018年大连市流感监测及甲型H1N1流感病毒HA基因特征分析 被引量：1
1
作者 韩焱 吕秋月 +3 位作者 纪颖 刘大鹏 滕雪 孙楠 《医学动物防制》 2025年第3期209-214,共6页
目的本研究旨在了解2015—2018年大连市流感病毒的流行特征并分析甲型H1N1流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因的遗传变异情况,为流感防控提供参考。方法对2015年7月—2018年6月流感监测哨点医院采集的3936份流感样病例(influenza-l... 目的本研究旨在了解2015—2018年大连市流感病毒的流行特征并分析甲型H1N1流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因的遗传变异情况,为流感防控提供参考。方法对2015年7月—2018年6月流感监测哨点医院采集的3936份流感样病例(influenza-like illness,ILI)标本,采用实时荧光定量PCR方法进行流感病毒核酸检测,检测结果用SPSS 22.0软件进行统计分析。核酸阳性标本使用犬肾(madin-darby canine kidney,MDCK)细胞进行病毒分离,并随机选取每年的甲型H1N1流感病毒毒株进行基因测序,使用MEGA 5.0软件分析其HA1基因特征。结果流感病毒核酸检测阳性共590份,阳性率总体呈上升趋势,2017—2018年流感病毒阳性率最高(20.1%),2015—2016年流感病毒阳性率最低(10.9%),不同年份流感病毒阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=45.124,P<0.001)。共分离出甲型流感病毒H1N1亚型毒株94株,将随机选取的39株分离株的HA编码区与疫苗株及参考株的HA编码区进行比较,所有分离株均观察到P83S、D97N、K163Q、S185T、S203T和K283E位点突变。高比例的毒株(84.6%)具有S84N、S162N和I216T位点突变。结论系统发育分析证实,大多数在流行的毒株与上一流行季分离的参考株及疫苗株A/Michigan/45/2015亲缘关系较近,而与A/California/7/2009疫苗株的亲缘关系较远,揭示毒株积累氨基酸变异和形成新的系统发育群的趋势。 展开更多
关键词 流感监测 甲型流感病毒H1n1亚型 HA基因 进化分析 变异分析
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抗感方对实验小鼠免疫调节及抗H1N1流感病毒作用探究 被引量：1
2
作者 王祺 白长川 +4 位作者 于雪峰 张宏 甘雨 翟娜 孟硕 《辽宁中医药大学学报》 2025年第7期10-15,共6页
目的探讨抗感方对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用及抗H1N1流感病毒作用。方法采用小鼠网状内皮系统吞噬能力试验(非特异性免疫),小鼠血清溶血素生成试验(体液免疫),小鼠迟发超敏反应试验(细胞免疫),小鼠免疫因子调控试验,观察抗感方对... 目的探讨抗感方对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用及抗H1N1流感病毒作用。方法采用小鼠网状内皮系统吞噬能力试验(非特异性免疫),小鼠血清溶血素生成试验(体液免疫),小鼠迟发超敏反应试验(细胞免疫),小鼠免疫因子调控试验,观察抗感方对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用;采用药物对流感病毒感染BALB/C小鼠死亡的保护实验,观察抗感方抗H1N1流感病毒作用。结果与模型组比较,各给药组小鼠网状内皮系统吞噬能力有升高的趋势,玉屏风颗粒组(1.95 g/kg)、匹多莫德组(0.21 g/kg)差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠血清溶血素生成OD值都有升高的趋势,其中抗感方高剂量组(27.30 g生药/kg)、匹多莫德组(0.21 g/kg)升高差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠迟发超敏反应有下降的趋势,其中抗感方低剂量组(6.82 g生药/kg)、高剂量组(27.30 g生药/kg)、匹多莫德组(0.21 g/kg)降低明显(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,抗感方高剂量组(27.30 g生药/kg)、玉屏风颗粒组(1.95 g/kg)、匹多莫德组(0.21 g/kg)能够促进IL-4分泌(P<0.05或P<0.01),抗感方高剂量组(27.30 g生药/kg)、匹多莫德组(0.21 g/kg)能够促进IFN-γ的分泌(P<0.01、P<0.05),抗感方高剂量组(27.30 g生药/kg)能够抑制TNF-α的分泌(P<0.05)。与模型组比较,抗感方中剂量组(13.65 g生药/kg)、奥司他韦胶囊组(19.50 mg/kg)平均生存日数延长(P<0.05或P<0.01)。结论抗感方具有提高机体免疫力及抗H1N1流感病毒作用,其机制可能与促进IL-4、IFN-γ分泌,抑制TNF-α的生成有关。 展开更多
关键词 免疫调节作用 抗感方 H1n1流感病毒
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2023年中国A(H1N1)pdm09亚型流感病毒抗原和基因特性分析
3
作者 成艳辉 隗合江 +7 位作者 李希妍 曾晓旭 肖宁 唐静 谢怡然 杨磊 王大燕 黄维娟 《疾病监测》 北大核心 2025年第4期492-498,共7页
目的分析2023年中国分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒的抗原和基因特性。方法对2148株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株用红细胞凝集抑制试验进行抗原分析,对其中505株毒株进行序列测定和分析。结果2023年检测的2148株毒株中,95.00%以上的毒株... 目的分析2023年中国分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒的抗原和基因特性。方法对2148株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株用红细胞凝集抑制试验进行抗原分析,对其中505株毒株进行序列测定和分析。结果2023年检测的2148株毒株中,95.00%以上的毒株抗原性与疫苗株A/Victoria/4897/2022和A/West Virginia/30/2022类似;98.42%(497/505)测序毒株的血凝素(HA)基因属于C.1分支,在此分支中存在多个有共同氨基酸位点变异的小分支;在测序毒株中,11株毒株有已知对神经氨酸酶抑制剂耐药的E119A、Q136K和H275Y氨基酸位点变异。结论2023年中国流行的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒与同期的疫苗株抗原性匹配,但HA基因存在多样性的特点。 展开更多
关键词 A(H1n1)pdm09亚型流感病毒 抗原性 基因特性
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粤港澳大湾区冬季甲型H1N1流感传播的气候适宜性及其时空分异规律
4
作者 段海来 刘畅 杜尧东 《生态学杂志》 北大核心 2025年第7期2377-2382,共6页
基于粤港澳大湾区逐日气象资料与甲型H1N1流感病例数据,运用气候适宜度模型对粤港澳大湾区冬季甲型H1N1流感传播的气候适宜性及其时空差异进行了计算、评价和预测。结果表明:12月下旬到次年2月中旬气候适宜性指数较高,且变异系数较小,其... 基于粤港澳大湾区逐日气象资料与甲型H1N1流感病例数据,运用气候适宜度模型对粤港澳大湾区冬季甲型H1N1流感传播的气候适宜性及其时空差异进行了计算、评价和预测。结果表明:12月下旬到次年2月中旬气候适宜性指数较高,且变异系数较小,其中1月下旬适宜性指数最高,是甲型H1N1流感传播的最适宜时期;近42年来粤港澳大湾区冬季甲型H1N1流感传播的气候适宜性指数呈下降趋势,2015年以后适宜性指数降幅较大;从冬季各月来看,12月和1月呈现一致性增加趋势,2月呈现显著下降趋势;粤港澳大湾区冬季甲型H1N1流感传播的气候适宜性呈现西北向东南递减的区域分异规律,其中西北地区适宜性指数是东南沿海地区的1.5~2.0倍;从变化趋势来看,珠江口以西区域的东部以及惠州部分地区的H1N1传播适宜性呈上升趋势,尤其以佛山和中山地区升幅最为显著,增加速度达到1.0(10 a)^(-1)以上,沿海地区则在下降,减少速度在0.05(10 a)^(-1)以上。由此可见,粤港澳大湾区甲型H1N1流感传播的关键时期是冬至前后至翌年立春前后,重点关注区域是珠江口以西核心城市。 展开更多
关键词 气候适宜性指数 甲型H1n1流感 气候变化 粤港澳大湾区
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衰老抑制C57BL/6J小鼠肺部CD8^(+)T细胞对甲型H1N1流感病毒的记忆性免疫应答
5
作者 王超 李顺 +4 位作者 任晓楠 杨华 陈丽香 徐春华 周晓辉 《实验动物与比较医学》 2025年第5期515-523,共9页
目的比较年轻与老年C57BL/6J小鼠感染甲型H1N1流感病毒后肺组织中CD8^(+)T细胞在收缩期及记忆性免疫应答期的功能差异。方法摘取未行流感病毒感染的年轻(3月龄)与老年(24月龄)雌性C57BL/6J小鼠肺组织,制备单细胞悬液,分别用佛波酯(phorb... 目的比较年轻与老年C57BL/6J小鼠感染甲型H1N1流感病毒后肺组织中CD8^(+)T细胞在收缩期及记忆性免疫应答期的功能差异。方法摘取未行流感病毒感染的年轻(3月龄)与老年(24月龄)雌性C57BL/6J小鼠肺组织,制备单细胞悬液,分别用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)/离子霉素或分化簇(cluster of differentiation,CD)3/CD28抗体(T细胞抗原受体/共刺激信号)进行非特异性抗原刺激,通过流式细胞术对肺CD8^(+)T细胞行细胞内细胞因子染色(flow cytometry intracellular cytokine staining,ICS)以检测其分泌肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的能力。以490 PFUPR8流感病毒滴鼻感染年轻和老年C57BL/6J小鼠,28天后进行同源流感病毒的二次感染,于初次感染后第28天(收缩期)、第32天(记忆性免疫应答期)分离肺组织,采用流感病毒特异性MHC-Ⅰ四聚体染色法检测病毒特异性CD8^(+)T细胞在肺组织CD8^(+)T细胞中的比例,ICS法分析CD8^(+)CD44^(high) T细胞亚群TNF-α、IFN-γ及颗粒酶B(granzyme B)的表达。结果非特异性抗原刺激后,老年组小鼠的肺组织CD8^(+)T细胞中TNF-α、IFN-γ分泌能力显著高于年轻组(P<0.05)。病毒特异性抗原刺激后,收缩期的两组小鼠间病毒特异性CD8^(+)T细胞比例以及TNF-α、IFN-γ、granzymeB的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);而在记忆性免疫应答期,老年组小鼠的病毒特异性CD8^(+)T细胞比例以及TNF-α、IFN-γ、granzymeB的表达水平均显著低于年轻组(P<0.05)。结论老年小鼠肺部CD8^(+)T细胞在非特异性抗原刺激下免疫相关因子表达功能正常,但在抗原特异性记忆免疫应答阶段的免疫相关因子表达功能受损,提示衰老导致CD8^(+)T细胞免疫记忆形成或维持发生缺陷。 展开更多
关键词 甲型H1n1流感病毒 CD8^(+)T细胞 免疫衰老 记忆性免疫应答 小鼠
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EA1N车轴钢正火组织异常的原因分析
6
作者 邬中华 王松伟 《金属热处理》 北大核心 2025年第3期307-311,共5页
讨论了EA1N车轴钢在常规正火处理后组织中存在的异常粗大珠光体团形貌及性能,分析了异常粗大珠光体团形貌的成因和正火温度及后续冷却速度对EA1N车轴钢显微组织的影响。结果表明,粗大珠光体团的形成与EA1N车轴中碳成分偏析、正火处理温... 讨论了EA1N车轴钢在常规正火处理后组织中存在的异常粗大珠光体团形貌及性能,分析了异常粗大珠光体团形貌的成因和正火温度及后续冷却速度对EA1N车轴钢显微组织的影响。结果表明,粗大珠光体团的形成与EA1N车轴中碳成分偏析、正火处理温度和后续冷却速度有关。正火温度越高,异常珠光体团就越粗大。正火处理后的冷却速度越小,越容易形成珠光体团,而且珠光体团的粗化程度越严重。 展开更多
关键词 EA1n车轴钢 异常组织 正火 珠光体团
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莫诺拉韦在体外/体内抗H1N1流行性感冒病毒感染特点的研究 被引量：1
7
作者 冯茜莉 王进千 +3 位作者 杨宣叶 胡欣妍 丁玉林 马晓霞 《中国感染控制杂志》 北大核心 2025年第4期478-485,共8页
目的分析莫诺拉韦在体内和体外对流行性感冒(流感)病毒的抗病毒效果。方法检测莫诺拉韦对流感病毒H1N1 PR8毒株在体外和体内的抗病毒能力。以人源非小细胞肺癌细胞系(A549细胞)作为PR8感染的体外模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-... 目的分析莫诺拉韦在体内和体外对流行性感冒(流感)病毒的抗病毒效果。方法检测莫诺拉韦对流感病毒H1N1 PR8毒株在体外和体内的抗病毒能力。以人源非小细胞肺癌细胞系(A549细胞)作为PR8感染的体外模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹试验(WB)、噬斑的方法,分析莫诺拉韦体外对病毒复制、蛋白合成及病毒颗粒形成方面的抗病毒效果。以PR8滴鼻感染C57BL/6雌性小鼠为体内感染模型,分别从病毒载量、病理变化及免疫组化方面,对对照组、给药组、接毒组和接毒-给药组进行检测,以评估莫诺拉韦的抗病毒能力。结果体外试验结果显示,莫诺拉韦对流感病毒的复制、蛋白合成及病毒颗粒形成没有明显抑制作用(均P>0.05)。小鼠体内试验结果显示,与单纯感染H1N1小鼠相比,接受莫诺拉韦治疗的小鼠肺组织病毒载量明显下降,病理变化程度较轻,免疫组化检测显示核蛋白(NP)抗原信号明显减弱,干扰素(IFN)-α、白细胞介素(IL)-4和IL-6在肺中的表达水平较低(均P<0.01)。结论作为具有抗病毒活性的前体物,莫诺拉韦无法在体外培养的肺源细胞中发挥抗病毒活力,但可以在宿主体内转化为活性形式,显著降低H1N1流感病毒在肺增殖的能力,进而减轻病毒对肺组织的损伤。 展开更多
关键词 莫诺拉韦 流行性感冒 抗病毒 感染模型 病理变化 H1n1
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欧亚类禽H1N1猪流感病毒适应性突变氨基酸的鉴定及其功能分析 被引量：1
8
作者 万云飞 杨玉莹 +4 位作者 张乃心 许萌萌 于钦浩 乔传玲 陈化兰 《中国农业科学》 北大核心 2025年第10期2035-2044,共10页
【目的】A型流感病毒通过适应性突变跨越种间屏障,感染包括人类在内的多种哺乳动物,对全球公共卫生构成持续威胁。基于细胞传代培养鉴定流感病毒发生的适应性突变,并对突变氨基酸的功能进行分析,为流感的监测和防控提供理论指导。【方... 【目的】A型流感病毒通过适应性突变跨越种间屏障,感染包括人类在内的多种哺乳动物,对全球公共卫生构成持续威胁。基于细胞传代培养鉴定流感病毒发生的适应性突变,并对突变氨基酸的功能进行分析,为流感的监测和防控提供理论指导。【方法】将一株欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)(A/swine/Zhejiang/199/2013,简称ZJ199)在MDCK细胞中传代培养,测序发现病毒在第3代发生适应性突变,并将其命名为ZJ199-P3。之后比较ZJ199与ZJ199-P3病毒在体内外的复制能力和对小鼠的感染性。建立ZJ199的反向遗传系统,并以rZJ199为骨架拯救分别含有单点突变的重组病毒,测定亲本病毒和单点突变重组病毒在体外的复制能力,确定影响病毒复制的关键氨基酸位点;通过测定病毒聚合酶活性、神经氨酸酶活性以及ISRE和NF-κB报告基因活性,确定病毒适应性突变对病毒生物学活性的影响。【结果】分析比较ZJ199与ZJ199-P3病毒的氨基酸序列,结果发现ZJ199-P3病毒在NP、NA和NS2蛋白分别含有A234T、S21G和M100I突变。测定ZJ199-P3病毒在体内外的复制能力,结果与ZJ199病毒相比,ZJ199-P3病毒在体内外的复制能力均下降。利用反向遗传技术,分别拯救了病毒rZJ99及单点突变病毒rZJ199-NA-S21G、rZJ199-NP-A234T和rZJ199-NS2-M100I;体外复制能力测定结果显示与rZJ199病毒相比,NP蛋白A234T突变导致rZJ199-NP-A234T病毒复制能力下降,而NA蛋白S21G和NS2蛋白M100I突变对病毒的复制能力无明显影响。进一步研究发现,NP蛋白A234T突变导致病毒聚合酶活性下降;NA蛋白S21G突变导致病毒神经氨酸酶活性下降;NS2蛋白M100I突变减弱了对ISRE和NF-κB报告基因活性的抑制作用。【结论】通过在细胞上的传代培养,鉴定了EA H1N1 SIV的3个适应性突变氨基酸,发现NP蛋白A234T突变通过降低病毒聚合酶活性,使得病毒的体外复制能力下降;NA蛋白S21G突变和NS2蛋白M100I突变均影响病毒的生物学活性。以上突变氨基酸的发现,提示我们需进一步加强流感病毒的监测,为流感的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 H1n1 猪流感病毒 复制 适应性突变
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基于甲型H1N1流感病毒继发金黄色葡萄球菌感染小鼠模型探究金银花药效及作用机制 被引量：1
9
作者 王晨 李勋 +7 位作者 高燕 毛志海 周思琴 吴高峰 才太吉 高树华 张永文 赵渤年 《药物评价研究》 北大核心 2025年第5期1155-1166,共12页
目的建立甲型H1N1流感病毒(H1N1)继发金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染模型,探讨金银花水提物(LJAE)对该模型药效及机制。方法小鼠按体质量随机分为对照组、模型组、磷酸奥司他韦(OT,抗病毒阳性药,11 mg·kg^(-1),临床等效... 目的建立甲型H1N1流感病毒(H1N1)继发金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染模型,探讨金银花水提物(LJAE)对该模型药效及机制。方法小鼠按体质量随机分为对照组、模型组、磷酸奥司他韦(OT,抗病毒阳性药,11 mg·kg^(-1),临床等效剂量)组、头孢克洛缓释片(CF,抗菌阳性药,106.38 mg·kg^(-1),临床等效剂量)组和LJAE低、中、高剂量(6.5、13.0、26.0 mL·kg^(-1))组,除对照组外,建立致死型H1N1继发S.aureus模型,连续给药5 d,观察死亡率;除对照组外,建立亚致死性H1N1继发S.aureus模型,连续给药5 d,测定肺指数,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肺病毒量,平板法检测肺菌量,苏木精-伊红(HE)染色观察肺损伤;瑞氏-吉姆萨染色法测定肺泡灌洗液中巨噬细胞和中性粒细胞数目;通过qRT-PCR法检测肺单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)、趋化因子(C-X-C基序)配体1(CXCL-1)m RNA表达量;ELISA法检测肺组织MCP-1、TNF-α、IFN-γ水平;流式细胞术测定外周血CD4+IFN-γ+(Th1)和CD4+IL-4+(Th2)细胞比例。结果与模型组比较,LJAE显著降低致死型H1N1继发S.aureus模型小鼠的死亡率(P<0.05、0.01、0.001),显著降低亚致死型H1N1继发S.aureus模型小鼠的肺指数(P<0.001)、肺病毒量(P<0.001)和肺菌量(P<0.001),减轻肺病理损伤;LJAE显著减少肺部中性粒细胞和巨噬细胞的募集(P<0.001),显著降低趋化因子MCP-1和促炎细胞因子TNF-α和IFN-γmRNA和蛋白的表达(P<0.001),降低外周血单核细胞CD4+IFN-γ+/CD4+IL-4+(P<0.001)。结论LJAE具有显著的抗H1N1继发S.aureus感染的活性,能够通过调节过激的Th1型免疫反应,抑制Th1型细胞因子MCP-1、TNF-α和IFN-γ的释放,减轻肺部炎症细胞的过度浸润,修复H1N1继发S.aureus引发的肺损伤。 展开更多
关键词 金银花 甲型H1n1流感病毒 金黄色葡萄球菌 继发感染 巨噬细胞 TH1/TH2
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欧亚类禽H1N1亚型猪流感全病毒灭活疫苗的免疫保护效力评价
10
作者 陈荣琳 邢燕茹 +13 位作者 王娟 李健楠 高硕磊 刘清艳 祝宇翔 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 姜一峰 孔宁 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期35-42,共8页
本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒,并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37℃灭活24 h,以及0.02%BPL终浓度及4℃灭活18 h,灭活后抗原血凝... 本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒,并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37℃灭活24 h,以及0.02%BPL终浓度及4℃灭活18 h,灭活后抗原血凝效价比原始病毒低1个滴度左右。在不同灭活剂基础上分别配伍油佐剂ISA 201 VG和水佐剂HA 208乳化,在BALB/c小鼠上对灭活疫苗进行免疫评估及攻毒保护评价,攻毒使用剂量为1×10~6 TCID50/只。甲醛灭活苗相比BPL灭活苗更能刺激小鼠产生高水平的HI抗体,佐剂选用油佐剂ISA 201 VG相比水佐剂HA 208所产生的HI抗体效价更高。攻毒后疫苗免疫组的存活率均达到100%,与对照组相比免疫组肺脏样品中病毒含量明显减少。据以上试验结果,初步认为甲醛+ISA 201 VG佐剂灭活苗对BALB/c小鼠所产生的免疫效果最佳并能较好地抵抗欧亚类禽猪流感病毒的攻击。以上研究结果为后续猪流感全病毒灭活疫苗的设计以及病毒灭活生产工艺提供了一定的研究基础。 展开更多
关键词 欧亚类禽H1n1 甲醛 BPL 全病毒灭活疫苗 免疫效力评价
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BST-2基因敲除CHO-K1细胞对甲型H1N1流感病毒增殖的影响
11
作者 王怡鹏 白爱英 +7 位作者 郑港 张锦华 章青 王宏 孔翔羽 李希希 庞立丽 段招军 《国际病毒学杂志》 北大核心 2025年第5期368-373,共6页
目的探讨中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell, CHO)敲除骨髓基质细胞抗原2(bone marrow stromal cell antigen 2, BST-2)基因对甲型H1N1流感病毒增殖的影响。方法对敲除BST-2基因的CHO-K1细胞(CHO-K1-BST-2-/-)进行培养鉴定;... 目的探讨中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell, CHO)敲除骨髓基质细胞抗原2(bone marrow stromal cell antigen 2, BST-2)基因对甲型H1N1流感病毒增殖的影响。方法对敲除BST-2基因的CHO-K1细胞(CHO-K1-BST-2-/-)进行培养鉴定;利用CCK-8试剂检测CHO-K1-BST-2-/-细胞增殖活性。甲型H1N1流感病毒感染CHO-K1-BST-2-/-和CHO-K1细胞, 分别收集感染2 h、24 h、48 h和72 h后的冻融裂解液、细胞和上清液, 通过逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病毒核酸水平。利用半数组织培养感染量(50% tissue culture infective dose, TCID50)方法检测感染细胞48 h后上清液中的病毒滴度。结果通过显微镜观察CHO-K1-BST-2-/-细胞, 生长状态良好, PCR测序结果显示BST-2基因发生移码突变;BST-2基因的敲除对细胞的增殖活性没有明显的影响。流感病毒感染CHO-K1-BST-2-/-和CHO-K1细胞, 24 h后冻融裂解液和细胞中的病毒RNA明显增高, 48 h后上清中的病毒RNA水平增高。感染病毒24 h和48 h的冻融裂解液以及24 h、48 h和72 h的上清液中, CHO-K1-BST-2-/-细胞中的流感病毒RNA水平明显高于CHO-K1细胞;细胞中的病毒RNA水平无显著性差异。CHO-K1感染病毒48 h后的上清液中, CHO-K1-BST-2-/-细胞的病毒滴度是CHO-K1细胞的14 ~ 15倍。结论 CHO细胞敲除BST-2基因后有利于甲型H1N1病毒的增殖和从细胞中的释放, 为提高流感病毒分离效率及病毒培养滴度提供有力的工具。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞抗原2 CHO-K1细胞 甲型H1n1流感病毒
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马氏体不锈轴承钢Cr14Mo4V和G30Cr15Mo1N钢的微观组织与耐磨性对比研究
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作者 李檀 王存宇 +3 位作者 王姗姗 俞峰 王辉 曹文全 《钢铁研究学报》 北大核心 2025年第9期1206-1214,共9页
在Cr14Mo4V和G30Cr15Mo1N2种马氏体不锈轴承钢硬度均满足轴承钢使用要求的前提下,针对特殊工况如何选择材料是工程技术人员面临的重要问题。对比研究了Cr14Mo4V和G30Cr15Mo1N钢的微观组织结构,以及在环块磨损条件下的耐磨性。结果表明,... 在Cr14Mo4V和G30Cr15Mo1N2种马氏体不锈轴承钢硬度均满足轴承钢使用要求的前提下,针对特殊工况如何选择材料是工程技术人员面临的重要问题。对比研究了Cr14Mo4V和G30Cr15Mo1N钢的微观组织结构,以及在环块磨损条件下的耐磨性。结果表明,2种试验钢的微观组织都是马氏体基体+碳化物,Cr14Mo4V钢中存在较多大尺寸共晶碳化物,碳化物平均直径为G30Cr15Mo1N钢的3倍以上;G30Cr15Mo1N钢组织均匀细小,碳化物数量约为Cr14Mo4V钢的10倍。环块磨损条件下,Cr14Mo4V钢的磨损体积约为G30Cr15Mo1N钢的1/10,2种钢均表现出了磨粒磨损和氧化磨损的混和磨损机制,高硬度、大尺寸碳化物在摩擦过程中起到了作为耐磨、钉扎组织阻碍马氏体组织剥落的作用,提升了Cr14Mo4V钢的耐磨性。 展开更多
关键词 马氏不锈轴承钢 Cr14Mo4V钢 G30Cr15Mo1n钢 耐磨性 碳化物
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血清CRP、SAA、IL-6水平联合检测对甲型H1N1流感的诊断价值 被引量：1
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作者 赵静 杜豪伟 杨翠 《淮海医药》 2025年第1期5-8,共4页
目的:探究甲型H1N1流感患者血清C-反应蛋白(CRP)、淀粉酶A蛋白(SAA)、白细胞介素-6(IL-6)水平并分析其对甲型H1N1流感的诊断价值。方法:选取2020年6月—2023年6月某院收治的102例甲型H1N1流感患儿为甲流组,乙型流感病毒患儿102例为乙流... 目的:探究甲型H1N1流感患者血清C-反应蛋白(CRP)、淀粉酶A蛋白(SAA)、白细胞介素-6(IL-6)水平并分析其对甲型H1N1流感的诊断价值。方法:选取2020年6月—2023年6月某院收治的102例甲型H1N1流感患儿为甲流组,乙型流感病毒患儿102例为乙流组,另选取同期健康志愿者34例为对照组。比较3组血清CRP、SAA、IL-6水平及实验室指标,依据病情严重程度将甲流组分为轻症者76例、重症者26例,比较其血清CRP、SAA、IL-6水平,分析血清CRP、SAA、IL-6水平与实验室指标、病情严重程度相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析各血清指标对甲型H1N1流感的诊断价值。结果:甲流组血清CRP、SAA、IL-6水平分别为(5.62±1.47)mg/L、(43.26±11.42)mg/L、(15.96±4.32)ng/mL,高于乙流组的(4.11±1.30)mg/L、(36.57±11.19)mg/L、(12.24±3.08)ng/mL和对照组的(2.18±0.70)mg/L、(12.52±4.08)mg/L、(6.85±2.18)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。重症者血清CRP、SAA、IL-6水平分别为(8.16±2.52)mg/L、(52.32±11.44)mg/L、(24.55±6.18)ng/mL,高于轻症者的(4.75±1.38)mg/L、(40.16±10.38)mg/L、(13.02±3.34)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。血清CRP、SAA、IL-6水平与中性粒细胞百分比呈负相关,与单核细胞百分比、病情严重程度呈正相关(P<0.05);血清CRP、SAA、IL-6水平单项及联合诊断甲型H1N1流感的AUC值分别为0.761、0.746、0.780、0.932。结论:甲型H1N1流感患儿血清CRP、SAA、IL-6水平升高,且与病情严重程度呈正相关,联合检测对甲型H1N1流感具有一定诊断价值。 展开更多
关键词 甲型H1n1流感 C-反应蛋白 淀粉酶A蛋白 白细胞介素-6 诊断价值
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上感颗粒对H1N1流感病毒感染小鼠免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响 被引量：3
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作者 郭志洪 李修元 +3 位作者 张梦楠 刘林洁 杨峰 敖素华 《中成药》 北大核心 2025年第2期606-611,共6页
目的观察上感颗粒对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺部炎症反应的作用。方法42只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、奥司他韦组(1.25 mg/kg)和上感颗粒低、中、高剂量组(4、8、12 g/kg),鼻腔接种H1N1流感病毒建立流感病毒肺部感染小... 目的观察上感颗粒对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺部炎症反应的作用。方法42只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、奥司他韦组(1.25 mg/kg)和上感颗粒低、中、高剂量组(4、8、12 g/kg),鼻腔接种H1N1流感病毒建立流感病毒肺部感染小鼠模型,给药干预7 d。记录小鼠的死亡情况,检测肺组织含水量,HE染色观察肺组织病理变化,透射电镜观察肺组织超微结构损伤,ELISA法检测肺组织IL-4、IFN-γ、CCL3、CCL25、CXCL-10水平,流式细胞术检测外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞数,RT-qPCR和Western blot法检测肺组织JAK2、STAT mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,上感颗粒各剂量组小鼠肺组织含水量降低(P<0.01),肺泡灌洗液病毒滴度降低(P<0.01),肺组织损伤减轻,肺组织IL-4水平升高(P<0.05,P<0.01),IFN-γ、CCL3、CCL25、CXCL-10水平降低(P<0.05,P<0.01),外周血CD3^(+)、CD4^(+)T细胞数量和CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低(P<0.01),肺组织JAK2、STAT 3 mRNA和p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论上感颗粒可以通过调节T细胞免疫和相关炎症因子的表达,增强流感病毒感染小鼠免疫能力和减轻流感病毒感染小鼠的肺组织损伤,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路有关。 展开更多
关键词 上感颗粒 H1n1流感病毒 炎症反应 细胞免疫 JAK2/STAT信号通路
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疏风解毒胶囊对甲型流感病毒H1N1特异性抗体的影响
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作者 李欣颖 包蕾 +7 位作者 李舒冉 赵荣华 孙静 谢丹 鲍岩岩 郭姗姗 崔晓兰 耿子涵 《中国药物警戒》 2025年第8期841-850,862,共11页
目的探讨疏风解毒胶囊(SFJD)对甲型流感病毒(H1N1)感染小鼠特异性抗体分泌的影响,并通过体外模型研究其对B细胞激活的调控机制。方法建立H1N1非致死性感染小鼠模型,随机分为正常组,PR8模型组,阳性药磷酸奥司他韦组(27.5 mg·kg^(-1)... 目的探讨疏风解毒胶囊(SFJD)对甲型流感病毒(H1N1)感染小鼠特异性抗体分泌的影响,并通过体外模型研究其对B细胞激活的调控机制。方法建立H1N1非致死性感染小鼠模型,随机分为正常组,PR8模型组,阳性药磷酸奥司他韦组(27.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),SFJD高、中剂量组(2.288 g·kg^(-1)·d^(-1)、1.144 g·kg^(-1)·d^(-1)),并将各组小鼠随机分为感染第0、2、4、6、8天共计5个时间点组。第0至第4天进行灌胃给药,于以上时间点对各组小鼠取材,分别称量各组小鼠肺重和体重,计算肺指数;采用高通量液相蛋白芯片多因子法,检测肺泡灌洗液中的总IgA、IgM、IgG;采用酶联免疫吸附法(ELISA),检测H1N1特异性IgA、IgM与IgG。于第8天,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)法,检测各组小鼠肺组织病毒载量;使用Micro-CT,观察小鼠肺部影像;采用流式分析法,检测外周血和肺泡灌洗液B细胞百分比。将人肺上皮细胞(BEAS-2B)分为正常对照组,病毒感染组,阳性药组(62.5μmol·L^(-1)),SFJD高、中剂量组(15.6、7.8μg·mL^(-1));小鼠肺上皮细胞(MLE12)分为正常对照组,病毒感染组,阳性药组(250μmol·L^(-1)),SFJD高、中剂量组(62.5、31.3μg·mL^(-1))。采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法,检测SFJD对呼吸道上皮细胞B细胞刺激因子(BAFF)表达的影响。结果SFJD可降低第4天至第8天H1N1感染小鼠的肺指数(P<0.05);降低第8天病毒载量(P<0.01),减轻炎症病变,升高外周血及肺组织中的B细胞比例(P<0.01,P<0.001);降低第8天肺泡灌洗液中总IgA水平,升高总IgM水平(P<0.01);降低第4天肺泡灌洗液中特异性IgA(P<0.0001)的分泌、促进第8天特异性IgM(P<0.0001)、IgG(P<0.0001)的分泌;同时,SFJD可抑制呼吸道上皮细胞系BAFF表达(P<0.05,P<0.001)。结论SFJD在H1N1感染早期给药,可恢复外周血B细胞比例,促进其向肺组织浸润,增强病毒特异性IgM和IgG分泌,发挥抗病毒效果。同时,SFJD通过抑制呼吸道上皮细胞BAFF表达,防止B细胞过度激活,进而调节感染后的体液免疫应答。 展开更多
关键词 甲型流感病毒H1n1 病毒性肺炎 疏风解毒胶囊 B细胞刺激因子 特异性抗体
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儿童甲型H1N1流行性感冒相关性脑病死亡危险因素分析 被引量：1
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作者 李珊珊 胡丹丹 《临床儿科杂志》 北大核心 2025年第3期177-183,190,共8页
目的寻找儿童甲型H1N1流行性感冒(简称流感)相关性脑病(IAE)死亡的危险因素,为临床早期诊断及干预提供依据。方法回顾性分析2014年1月至2020年12月医院收治的甲型H1N1 IAE患儿的临床资料,按预后分为存活组与死亡组。通过二分类logistic... 目的寻找儿童甲型H1N1流行性感冒(简称流感)相关性脑病(IAE)死亡的危险因素,为临床早期诊断及干预提供依据。方法回顾性分析2014年1月至2020年12月医院收治的甲型H1N1 IAE患儿的临床资料,按预后分为存活组与死亡组。通过二分类logistic回归分析与甲型H1N1 IAE患儿死亡相关的危险因素。结果共纳入甲型H1N1 IAE 59例患儿,男39例、女20例,中位年龄为42(21~73)个月,<5岁患儿占66.1%(39/59)。出现神经系统症状与发热相距时间中位数为1(0.5~2)天。33例(55.9%)患儿并发重症肺炎、呼吸衰竭,其中1例并发塑型性支气管炎。58例患儿使用奥司他韦抗流感治疗,发病至使用抗流感药物中位时间为2(1~4)天。好转出院48例,死亡11例(18.6%),入院至死亡中位时间为3(1~5)天。与存活组相比,死亡组意识障碍、呼吸衰竭、脑疝发生率以及需要机械通气治疗的比例更高,中性粒细胞计数更高,降钙素原、血糖、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶水平更高,凝血酶原时间更长,头颅CT异常比例更高,单核细胞计数更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。二分类logistic回归分析结果发现,中性粒细胞计数以及乳酸脱氢酶水平升高可能与甲型H1N1 IAE患儿死亡发生相关(P<0.05)。结论对于甲型H1N1 IAE患儿,如中性粒细胞计数和乳酸脱氢酶水平升高时,发生死亡的风险可能增加,需引起重视。 展开更多
关键词 甲型H1n1流感 脑病 死亡 危险因素 儿童
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欧亚类禽H1N1猪流感病毒的演化特征及人群感染现状
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作者 李立博 翁建娥 +5 位作者 巩鑫 张胜 郭克磊 魏新梅 方立群 王国林 《中国热带医学》 北大核心 2025年第8期1022-1029,共8页
猪作为流感病毒的“混合器”,既可以感染人源流感病毒,又可以感染禽源流感病毒,这使得不同来源的流感病毒容易在猪体内通过基因重配产生新型的毒株。目前,欧亚类禽H1N1猪流感病毒(Eurasian avian-like H1N1,EA H1N1)在欧洲和亚洲的猪群... 猪作为流感病毒的“混合器”,既可以感染人源流感病毒,又可以感染禽源流感病毒,这使得不同来源的流感病毒容易在猪体内通过基因重配产生新型的毒株。目前,欧亚类禽H1N1猪流感病毒(Eurasian avian-like H1N1,EA H1N1)在欧洲和亚洲的猪群中广泛传播,并在多个国家引起人类感染。最近几年,中国多省均报道了人感染EA H1N1病毒事件,引发公共卫生担忧。在猪体内,EA H1N1通过与其他猪流感病毒发生基因重配,产生了众多基因型。其中,G4型EA H1N1病毒已具备感染人类所必需的基本特征,在哺乳动物模型上表现出较强的致病力和传播力。血清学调查也显示,职业暴露人群较非暴露对照人群针对G4型EA H1N1病毒有着更高的血清抗体阳性率,提示存在更大的感染风险。本文通过对EA H1N1猪流感病毒在国内外的起源与演化、哺乳动物模型致病力与传播力、关键氨基酸突变位点、人群感染确诊病例以及人群感染血清学调查方面进行综述,为EA H1N1猪流感病毒的防控提供可靠依据,并为后续的进一步研究指明方向。 展开更多
关键词 欧亚类禽H1n1病毒 猪流感病毒 基因重配 致病力 氨基酸突变 血清学调查
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利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09亚型流感病毒
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作者 黎燕 周克茹 +1 位作者 季旻珺 王桂芹 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期319-326,共8页
目的:利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09病毒,评价其在MDCK细胞和鸡胚内的生长特性以及对BALB/c小鼠的致病性。方法:RT-PCR技术扩增A/Puerto Rico/8/1934(简称PR8)病毒基因片段,并克隆至pHW2000双向表达载体上。全球共享流感数据倡... 目的:利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09病毒,评价其在MDCK细胞和鸡胚内的生长特性以及对BALB/c小鼠的致病性。方法:RT-PCR技术扩增A/Puerto Rico/8/1934(简称PR8)病毒基因片段,并克隆至pHW2000双向表达载体上。全球共享流感数据倡议组织(global initiative of sharing all influenza data,GISAID)数据库中下载A/Wisconsin/588/2019(H1N1)的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)序列,将其HA非编码区替换为A/California/07/2009(H1N1)的HA非编码区。全基因合成A/Wisconsin/588/2019的HA和NA片段,分别克隆至pHW2000双向表达载体上。将PR8病毒6个内部基因重组质粒与A/Wisconsin/588/2019的HA和NA重组质粒共转染293T细胞与MDCK细胞,拯救重组病毒。对重组病毒进行血凝效价测定和RT-PCR鉴定以判断是否拯救成功。将重组病毒接种MDCK细胞和9~10日龄鸡胚,评价其生长特性并绘制生长曲线。将重组病毒以滴鼻方式感染BALB/c小鼠,记录小鼠体重变化和生存率以评价其致病性。结果:成功拯救出重组A/Wisconsin/588/2019病毒,血凝效价为1∶8,测序鉴定其HA和NA序列与预期一致,重组病毒接种MDCK细胞后72 h,大部分细胞完全脱落,病毒滴度为10^(5.38)TCID_(50)/mL,复制高峰期为接种后60 h,接种鸡胚后的血凝效价最高可达1∶2^(8)。重组病毒(病毒稀释比为1∶1)滴鼻BALB/c小鼠后第8天,小鼠全部死亡,对小鼠的半数致死剂量为10^(-1.38)/50μL。结论:成功拯救一株重组H1N1pdm09病毒,该病毒在MDCK细胞上生长良好且具有良好的鸡胚适应性,对小鼠具有致病性和致死性,为反向遗传学技术快速拯救流感病毒提供新思路。 展开更多
关键词 季节性流感 H1n1 反向遗传学技术
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甲型H1N1流感mRNA疫苗在小鼠体内免疫原性和免疫保护效果研究
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作者 周玉方 杨众贺 +2 位作者 高婧 袁蕾 雷涵 《中国药学杂志》 北大核心 2025年第10期1013-1018,共6页
目的基于mRNA疫苗技术平台考察甲型流感mRNA疫苗的免疫原性和免疫保护效率,为开发多价季节性流感mRNA疫苗提供新的研究策略。方法利用即用型脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)对mRNA-H1N1进行包封,将LNP/mRNA-H1N1转染至HEK 293T细... 目的基于mRNA疫苗技术平台考察甲型流感mRNA疫苗的免疫原性和免疫保护效率,为开发多价季节性流感mRNA疫苗提供新的研究策略。方法利用即用型脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)对mRNA-H1N1进行包封,将LNP/mRNA-H1N1转染至HEK 293T细胞,通过蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光显微镜对LNP/mRNA-H1N1的体外表达进行分析。进一步地,LNP/mRNA-H1N1以肌内注射途径免疫SPF级BALB/c小鼠,通过酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测LNP/mRNA-H1N1诱导的血凝素(hemagglutinin,HA)特异性血清免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)效价。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)实验检测LNP/mRNA-H1N1诱导的HI效价。通过酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunosorbent spot assay,ELISpot)检测LNP/mRNA-H1N1诱导的细胞因子γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)分泌水平,最后,通过同型H1N1病毒攻击实验检测LNP/mRNA-H1N1的免疫保护效率。结果通过Western blot和免疫荧光显微镜均能检测到抗原蛋白HA的特异性表达,其相对分子质量约为75000。LNP/mRNA-H1N1经初次与加强免疫BALB/c小鼠后诱导产生了有意义的体液免疫应答、细胞免疫应答和HI效价。更为重要的是,LNP/mRNA-H1N1能提供100%的免疫保护效率。结论LNP/mRNA-H1N1是一种有效的甲型流感mRNA候选疫苗,为将来开展临床前大型动物的安评试验奠定了基础,也为开发其他亚型的流感mRNA疫苗或其他传染病疫苗提供了研究思路。 展开更多
关键词 即用型脂质纳米颗粒 mRNA-H1n1 mRNA候选疫苗 免疫原性 免疫保护效率
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安和怡养茶抗甲型H1N1流感病毒作用机制的网络药理学与实验研究
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作者 王淼 卢必超 +6 位作者 张洋 毛宁峰 何嘉伟 赵毅 刘玲玲 周姝含 吕文亮 《时珍国医国药》 北大核心 2025年第20期3993-4000,共8页
目的 研究安和怡养茶抗甲型H1NI流感的主要活性成分及其作用机理。方法 应用网络药理学、分子对接以及分子动力学模拟技术探讨安和怡养茶抗甲型H1NI流感的潜在作用机制。以及体内实验研究探讨安和怡养茶对甲型H1NI流感病毒感染小鼠的肺... 目的 研究安和怡养茶抗甲型H1NI流感的主要活性成分及其作用机理。方法 应用网络药理学、分子对接以及分子动力学模拟技术探讨安和怡养茶抗甲型H1NI流感的潜在作用机制。以及体内实验研究探讨安和怡养茶对甲型H1NI流感病毒感染小鼠的肺指数、脾指数、肺部病理变化以及对TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-4等细胞因子的影响。结果 安和怡养茶抗甲型H1NI流感的核心靶点有EGFR和AKT1,其核心通路包括:HIF-1信号通路、甲型H1N1流感信号通路等;安和怡养茶能下调TNF-α、IFN-γ、IL-6,上调IL-4,下调黏附分子CD54、CD106和IFN-γ。结论 安和怡养茶能通过多靶点多通路交互作用以达到抗炎反应或免疫调节等间接效果从而对机体产生保护作用;通过下调促炎因子的分泌并上调抗炎因子的分泌来控制炎症反应,下调黏附分子CD54、CD106和IFN-γ,以增强机体免疫能力,发挥其治疗甲型H1N1流感病毒感染的作用。 展开更多
关键词 甲型H1n1流感病毒 安和怡养茶 网络药理学 分子对接 分子动力学模拟 细胞因子
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