目的:探讨阻断白介素-17F(interleukin-17F,I L-17 F)通路对小鼠实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效观察.方法:24只C57BL/6J♀小鼠随机分为3组,分别为Normal组、葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)+anti-IL-17F组...目的:探讨阻断白介素-17F(interleukin-17F,I L-17 F)通路对小鼠实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效观察.方法:24只C57BL/6J♀小鼠随机分为3组,分别为Normal组、葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)+anti-IL-17F组、DSS+PBS组.DSS+anti-IL-17F组、DSS+PBS组以5%DSS溶液为唯一饮用水由动物自由饮用;Normal组以蒸馏水为唯一饮用水由动物自由饮用.分别于第4、7、10天予以DSS+anti-IL-17F组经腹腔注射IL-17F antibody(anti-IL-17F)100μg,予以DSS+PBS组同等剂量的PBS溶液.观察小鼠每日的体质量变化、大便性状和隐血情况.14 d后取小鼠结肠组织,进行大体形态和组织病理学改变观察,收集血清进行ELISA检测.结果:通过中和性使用anti-IL-17F阻断IL-17F通路发现,与N o r m a l组相比,D S S+a n t iI L-1 7 F组、D S S+P B S组每日疾病活动度(disease activity index,DAI)评分明显增高(P<0.01),DSS+anti-IL-17F组与DSS+PBS组相比,DSS+anti-IL-17F组DAI评分降低(P<0.05);DSS+PBS组结肠长度与DSS+anti-IL-17F组相比缩短程度更为显著[5.855 cm±0.1139 cm、7.300 cm±0.1732 cm vs Normal组(8.500 cm±0.1789 cm),P<0.01];在IL-17F含量测定方面,DSS+PBS组含量明显高于其他2组[207.3 pg/m L±12.74 pg/m L vs Normal组(10.06 pg/m L±2.310 pg/m L)、DSS+anti-IL-17F组(73.63 pg/m L±8.114 pg/m L),P<0.01].结论:阻断IL-17F通路明显缓解UC的发生发展,为UC的临床治疗提供一种新的可能的治疗方法.展开更多
目的构建hIL-17F重组逆转录病毒载体并研究它在293T细胞中的表达。方法以测序验证的pUCm-T/hIL-17F为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(包括20aa信号肽序列,而且hIL-17F基因内EcoR I酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点...目的构建hIL-17F重组逆转录病毒载体并研究它在293T细胞中的表达。方法以测序验证的pUCm-T/hIL-17F为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(包括20aa信号肽序列,而且hIL-17F基因内EcoR I酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变,即AA T→AA C,均为Asn),并正向插入逆转录病毒载体pSIV-1后经PCR、双酶切和测序鉴定。将构建正确的pSIV-1/hIL-17F与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60混合后,采用脂质体法共转染293T包装细胞,获得具有感染能力的成熟重组逆转录病毒感染293T细胞,经G418筛选获得阳性细胞株,并应用PCR、RT-PCR和dot-ELISA法检测hIL-17F目的基因在293T细胞中的整合、转录和表达。结果成功构建了hIL-17F基因内EcoRI酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变的重组逆转录病毒载体pSIV-1/hIL-17F,并在293T细胞中稳定表达。结论以逆转录病毒为载体感染的稳定表达rhIL-17F的293T转基因细胞株的首次获得,为进一步研究hIL-17F的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。展开更多
文摘目的:探讨阻断白介素-17F(interleukin-17F,I L-17 F)通路对小鼠实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效观察.方法:24只C57BL/6J♀小鼠随机分为3组,分别为Normal组、葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)+anti-IL-17F组、DSS+PBS组.DSS+anti-IL-17F组、DSS+PBS组以5%DSS溶液为唯一饮用水由动物自由饮用;Normal组以蒸馏水为唯一饮用水由动物自由饮用.分别于第4、7、10天予以DSS+anti-IL-17F组经腹腔注射IL-17F antibody(anti-IL-17F)100μg,予以DSS+PBS组同等剂量的PBS溶液.观察小鼠每日的体质量变化、大便性状和隐血情况.14 d后取小鼠结肠组织,进行大体形态和组织病理学改变观察,收集血清进行ELISA检测.结果:通过中和性使用anti-IL-17F阻断IL-17F通路发现,与N o r m a l组相比,D S S+a n t iI L-1 7 F组、D S S+P B S组每日疾病活动度(disease activity index,DAI)评分明显增高(P<0.01),DSS+anti-IL-17F组与DSS+PBS组相比,DSS+anti-IL-17F组DAI评分降低(P<0.05);DSS+PBS组结肠长度与DSS+anti-IL-17F组相比缩短程度更为显著[5.855 cm±0.1139 cm、7.300 cm±0.1732 cm vs Normal组(8.500 cm±0.1789 cm),P<0.01];在IL-17F含量测定方面,DSS+PBS组含量明显高于其他2组[207.3 pg/m L±12.74 pg/m L vs Normal组(10.06 pg/m L±2.310 pg/m L)、DSS+anti-IL-17F组(73.63 pg/m L±8.114 pg/m L),P<0.01].结论:阻断IL-17F通路明显缓解UC的发生发展,为UC的临床治疗提供一种新的可能的治疗方法.
文摘目的探讨五虎汤对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱导的哮喘小鼠模型树突细胞自噬和炎性因子白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、白细胞介素-17F(interleukin-17F,IL-17F)的影响。方法采用RSV联合鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组及五虎汤低、中、高剂量(1.6、3.2、6.4g/kg)组和地塞米松(1.82mg/kg)组、雷帕霉素(1mg/kg)组,连续给药14d后采用苏木-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理变化,电镜观察肺组织自噬小体变化,Westernblotting法检测肺组织树突细胞中微管相关蛋白轻链3I(microtubule-associated protein lightc hain 3I,LC3I)和LC3II表达,ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-17A、IL-17F的水平。SD大鼠随机分为对照组及五虎汤低、中、高(1.1、2.2、4.4 g/kg)组,各给药组ig相应药物,2次/d,连续给药7 d后腹主动脉取血,离心取血清,灭活后滤过。将分离的树突细胞与CD4^(+)T细胞共培养,采用RSV联合OVA-17肽建立RSV诱导的树突细胞自噬模型,流式细胞术检测五虎汤含药血清对CD4^(+)T细胞增殖与T细胞活化标志物CD69表达的影响。结果模型组小鼠气道狭窄,血管周围有大量炎症细胞浸润,肺组织自噬小体增加,自噬蛋白LC3II/LC3I表达水平显著升高(P<0.01),IL-17A和IL-17F水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,五虎汤组肺组织炎症表现减轻,肺组织自噬小体增加,LC3II/LC3I蛋白表达水平显著升高(P<0.01),IL-17A和IL-17F水平显著降低(P<0.05、0.01)。RSV联合OVA-17肽诱导的树突细胞自噬模型中,与对照组比较,模型组CD4^(+)T细胞增殖与CD69表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,五虎汤中、高剂量含药血清组CD4^(+)T细胞增殖与CD69表达显著降低(P<0.05、0.01)。结论RSV可诱导小鼠肺组织树突细胞自噬水平升高,上调IL-17A和IL-17F水平,从而介导炎症反应;五虎汤可通过上调RSV诱导的哮喘小鼠肺组织树突细胞自噬水平,下调IL-17A和IL-17F水平,从而改善哮喘气道炎症。
文摘目的构建hIL-17F重组逆转录病毒载体并研究它在293T细胞中的表达。方法以测序验证的pUCm-T/hIL-17F为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(包括20aa信号肽序列,而且hIL-17F基因内EcoR I酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变,即AA T→AA C,均为Asn),并正向插入逆转录病毒载体pSIV-1后经PCR、双酶切和测序鉴定。将构建正确的pSIV-1/hIL-17F与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60混合后,采用脂质体法共转染293T包装细胞,获得具有感染能力的成熟重组逆转录病毒感染293T细胞,经G418筛选获得阳性细胞株,并应用PCR、RT-PCR和dot-ELISA法检测hIL-17F目的基因在293T细胞中的整合、转录和表达。结果成功构建了hIL-17F基因内EcoRI酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变的重组逆转录病毒载体pSIV-1/hIL-17F,并在293T细胞中稳定表达。结论以逆转录病毒为载体感染的稳定表达rhIL-17F的293T转基因细胞株的首次获得,为进一步研究hIL-17F的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。
