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血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞构建血管化两亲性肽凝胶模块
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作者 蒋星海 宋玉林 +6 位作者 李德津 邵建敏 徐军志 刘华凯 吴应国 沈岳辉 冯思诚 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第8期1903-1911,共9页
背景:组织工程模块为股骨头坏死的治疗提供了新的思路,将血管化支架移植于坏死区域,在生长因子及支架的作用下诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化,促进微血管生成改善局部血运能够促进坏死区域的修复。目的:探讨体外构建诱导骨髓... 背景:组织工程模块为股骨头坏死的治疗提供了新的思路,将血管化支架移植于坏死区域,在生长因子及支架的作用下诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化,促进微血管生成改善局部血运能够促进坏死区域的修复。目的:探讨体外构建诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的树枝状两亲性肽自组装凝胶模块的可行性。方法:分离提取4-6周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞,采用流式细胞术进行鉴定,体外定向成脂、成骨诱导分化检测细胞多向分化潜能。采用固相法合成肽IKVAVAK-/RGDK-KGGGGAAAA(K)-C16H31O,调配质量浓度为10 mg/mL多肽溶液,加入生理盐水后触发多肽自组装,形成半透明的水凝胶,透射电子显微镜下观察凝胶结构。用携带血管内皮生长因子165基因的腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,然后将10 mg/mL多肽溶液和细胞悬液混合,细胞分布于凝胶内部形成三维培养体系,设置为实验组;将转染空病毒的骨髓间充质干细胞与10 mg/mL多肽溶液混合形成三维培养体系,设置为对照组。体外培养7 d后采用免疫荧光及RT-qPCR检测血管内皮细胞分化情况。结果与结论:(1)流式细胞术结果显示间质干细胞表面分子CD29、CD44表达≥95%,造血干细胞表面分子CD34、CD45表达≤2%;在体外能够向成骨、成脂诱导分化;(2)树枝状多肽溶液在离子触发下形成的凝胶呈透明状,透射电镜下观察呈形态均一的小尺寸纳米胶束;(3)免疫荧光及RT-qPCR结果显示,实验组血管内皮生长因子165表达水平高于对照组,且血管内皮特异性标记物CD31、CD34表达水平高于对照组。结果表明,血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞种植于多肽凝胶构建组织工程模块,能够诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化。 展开更多
关键词 树枝状两亲性肽 骨髓间充质干细胞 基因转染 血管内皮生长因子165 三维培养 血管化 股骨头坏死
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OIP5-AS1通过VEGF165调控ADSCs-Exos分泌促进创面愈合的研究 被引量:1
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作者 侯国玲 高栋梁 +2 位作者 屈万丽 李明 王亚康 《国际医药卫生导报》 2025年第2期247-252,共6页
目的探讨敲低Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(opa-interactingprotein 5 antisense RNA 1,OIP5-AS1)的脂肪间充质干细胞外泌体(exosomes derived from ADSCs,ADSCs-Exos)在创面愈合中的作用机制。方法选取2024年2月至6月期间在延安大学... 目的探讨敲低Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(opa-interactingprotein 5 antisense RNA 1,OIP5-AS1)的脂肪间充质干细胞外泌体(exosomes derived from ADSCs,ADSCs-Exos)在创面愈合中的作用机制。方法选取2024年2月至6月期间在延安大学附属医院接受选择性吸脂或手术整形的10例人体正常皮下脂肪组织,从中分离脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cell,ADSCs),提取外泌体,并鉴定外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)和CD9的表达。使用实时荧光定量聚合酶链式反应测定OIP5-AS1的表达。采用H_(2)O_(2)处理人永生化表皮细胞HaCaT,构建体外皮肤损伤模型。MTT法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡。采用t检验、方差分析进行统计比较。结果ADSCs-Exos增加H2O2处理的HaCaT细胞活力,抑制细胞凋亡(t=4.358、5.654,均P<0.05)。与ADSCs相比,OIP5-AS1在ADSCs-Exos中表达显著上调(t=4.125,P<0.01),且敲低OIP5-AS1抑制了ADSCs-Exos对创面愈合的修复作用(t=3.367、6.674,均P<0.05)。敲低OIP5-AS1后抑制了血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)的表达(t=3.105,P<0.01),VEGF165过表达可部分逆转敲低OIP5-AS1对创面愈合的抑制作用(t=3.327、5.544,均P<0.05)。结论敲低OIP5-AS1的ADSC-Exos通过调控VEGF165的表达影响创面愈合过程,为皮肤创面愈合的治疗提供新靶点。 展开更多
关键词 创面 愈合 脂肪间充质干细胞外泌体 Opa相互作用蛋白5-反义转录物1 血管内皮生长因子165
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缺氧和高糖对人视网膜色素上皮细胞VEGF_(165)及VEGF_(165b)表达的影响 被引量:1
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作者 陆璐 余锦强 黄煜薇 《湖北医药学院学报》 2025年第1期28-34,共7页
目的:通过研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)在人工模拟的缺氧和高糖环境中VEGF_(165)及VEGF_(165b)表达的情况,探讨VEGF_(165)、VEGF_(165b)在糖尿病视网膜病变(DR)发生发展中的作用及相互之间的关系。方法:正常接种并体外培养... 目的:通过研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)在人工模拟的缺氧和高糖环境中VEGF_(165)及VEGF_(165b)表达的情况,探讨VEGF_(165)、VEGF_(165b)在糖尿病视网膜病变(DR)发生发展中的作用及相互之间的关系。方法:正常接种并体外培养人视网膜色素上皮细胞,150μmol/LCoCl2和25mmol/L葡萄糖分别模拟细胞缺氧和高糖环境,将接种细胞分为正常组、缺氧组、高糖组、联合组共4组。每组分别于12、24、36、48h提取RNA和蛋白,RT-PCR法和WesternBlot法检测四组RPE细胞VEGF_(165)、VEGF_(165b)的mRNA和蛋白相对表达量,比较缺氧和高糖环境下VEGF_(165)和VEGF_(165b)在人视网膜色素上皮细胞的表达及关系。结果:⑴缺氧和高糖环境下RPE细胞分裂增殖受限,细胞活力降低。⑵VEGF_(165)及VEGF_(165b)mRNA和蛋白的表达情况:在缺氧模型建立后12h各组细胞间的表达差异无统计学意义,而24、36、48h时各组细胞的表达差异有统计学意义,其中VEGF_(165)mRNA和蛋白在缺氧组、高糖组、联合组的表达随时间变化而逐渐增加且均高于同一时间的正常组,而VEGF_(165b)mRNA和蛋白的表达则随时间变化而逐渐减少且均低于同一时间的正常组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。⑶联合组的VEGF_(165)mRNA和蛋白表达较缺氧组、高糖组表达增加更多,缺氧组与高糖组比较只在24h时间点差异有统计学意义;而联合组的VEGF_(165b)mRNA和蛋白的表达较缺氧组、高糖组的表达降低更多,缺氧组与高糖组比较差异无统计学意义。结论:体外培养RPE细胞能够正常表达VEGF_(165b),缺氧和高糖在转录水平诱导VEGF_(165)mRNA和蛋白的表达上调,同时降低VEGF_(165b)mRNA和蛋白的表达量。将促血管生成的VEGF_(165)转换为抑制血管生成的VEGF_(165b)将有望成为DR的治疗新思路。 展开更多
关键词 VEGF_(165) VEGF_(165b) 糖尿病视网膜病变 视网膜色素上皮细胞
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热休克蛋白90^ α在血管内皮生长因子165基因治疗大鼠脑梗死中的表达及意义 被引量:3
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作者 胡明均 刘勇 +2 位作者 王家宁 黄永章 常燕群 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期233-235,F003,共4页
目的观察热休克蛋白(HSP)90^ α在血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗大鼠脑梗死中的表达,为治疗脑梗死提供实验依据。方法雌性Wistar大自鼠25只,体重为250~300g,随机分为5组,每组5只。正常对照组(A组)予常规饲养;假手术组(B组)... 目的观察热休克蛋白(HSP)90^ α在血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗大鼠脑梗死中的表达,为治疗脑梗死提供实验依据。方法雌性Wistar大自鼠25只,体重为250~300g,随机分为5组,每组5只。正常对照组(A组)予常规饲养;假手术组(B组)在建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型过程中,仅将栓线插入颈内动脉约1cm即可;单纯MCAO对照组(C组),采用改进的线栓法制成永久性MCAO模型;空载质粒对照组(D组)在MCAO模型术后,头顶部剃毛,消毒后采用立体定位仪在梗死区相应部位钻一小孔,以5μl空载质粒(pUCCAGGS,20μg/μl),然后缝合切口,精心饲养;治疗组(E组)的方法同D组。注入等量的pUCCAGGS/hVEGF165取代空载质粒。实验7d后断头取脑,采用免疫组织化学的方法显示脑中的hSP90^ α表达情况。结果A、B两组整个脑部均无HSP90^ α表达;C、D两组仅有少量表达;E组的半暗带内有明显表达,与C、D组的差异有显著性(P<0.01),半暗带以外区域仅有少量表达或不表达。结论VEGF165基因可诱导HSP90^ α在特定部位表达。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子165 热休克蛋白 基因治疗 脑梗死 大脑中动脉闭塞(MCAO) 大鼠 表达及 VEGF165基因 HVEGF165 MCAO模型 Wistar 免疫组织化学 正常对照组 立体定位仪 颈内动脉 缝合切口 表达情况 特定部位 半暗带 永久性
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高产多抗玉米品种禾育165的选育、栽培及制种技术
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作者 徐桂芝 尹晓红 +3 位作者 杨威 孙传波 纪东铭 刘俊 《中南农业科技》 2025年第6期253-256,259,共5页
禾育165是吉林省禾冠种业有限公司以S586为母本、B8535为父本杂交选育的玉米(Zea mays L.)新品种,2019年通过国家审定,审定编号为国审玉20190109。该品种在华北东部中熟春玉米区生育期132.3 d,株型半紧凑,株高298 cm,穗位121 cm,穗长19.... 禾育165是吉林省禾冠种业有限公司以S586为母本、B8535为父本杂交选育的玉米(Zea mays L.)新品种,2019年通过国家审定,审定编号为国审玉20190109。该品种在华北东部中熟春玉米区生育期132.3 d,株型半紧凑,株高298 cm,穗位121 cm,穗长19.2 cm,籽粒半马齿形;2016—2017年国家区域试验平均产量为12777.0 kg/hm^(2),较对照先玉335增产4.3%;抗大斑病、茎腐病和灰斑病,容重754 g/L,粗淀粉(干基)含量75.15%;适宜种植密度60000~67500株/hm^(2)。阐述了禾育165选育过程、特征特性、产量表现及配套栽培、制种技术,旨在为华北东部地区玉米品种更新提供理论支撑。 展开更多
关键词 玉米(Zea mays L.) 禾育165 品种选育 高产稳产 抗病性 栽培技术 制种技术 华北东部地区
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血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响 被引量:8
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作者 赵燕颖 王秀岩 +3 位作者 秦国涛 孙远杰 刘志忠 李然伟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期101-105,共5页
目的:探讨血管内皮生长因子165b(VEGF165b)对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法:HepG_2细胞分为空白组(仅加转染试剂)、对照组(转染阴性对照PcDNA3.0表达载体)和PcDNA-VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体PcDNA... 目的:探讨血管内皮生长因子165b(VEGF165b)对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法:HepG_2细胞分为空白组(仅加转染试剂)、对照组(转染阴性对照PcDNA3.0表达载体)和PcDNA-VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b)。MTT法检测各组HepG_2细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG_2细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG_2细胞迁移能力。结果:与空白组比较,对照组HepG_2细胞中VEGF165b和VEGF165mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165bmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义(P>0.05);与空白组和对照组比较,PcDNAVEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P<0.05);与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG_2细胞迁移率明显降低(P<0.05)。结论:VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 肝肿瘤 HEPG2细胞 血管内皮细胞生长因子165b 血管内皮细胞生长因子165 细胞增殖 细胞迁移
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VEGF165b在肝细胞癌中的表达及其作用机制 被引量:2
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作者 赵燕颖 李亚刚 +3 位作者 颜波群 刘志忠 秦国涛 孙远杰 《世界华人消化杂志》 CAS 2016年第3期355-361,共7页
目的:研究血管内皮生长因子165b(vascular endothelial growth factor 165b,VEGF165b)在肝细胞癌和正常肝组织中的表达情况,初步探讨其与肝细胞癌的关系和作用机制.方法:用免疫组织化学法检测28例肝细胞癌组织和30例正常肝组织中VEGF165... 目的:研究血管内皮生长因子165b(vascular endothelial growth factor 165b,VEGF165b)在肝细胞癌和正常肝组织中的表达情况,初步探讨其与肝细胞癌的关系和作用机制.方法:用免疫组织化学法检测28例肝细胞癌组织和30例正常肝组织中VEGF165b蛋白的表达情况;用RT-PCR法分别检测肝细胞癌和正常肝组织中VEGF165b和VEGF165 mRNA的表达情况.用Western blot法检测上述肝细胞癌组织和正常肝组织中VEGF165b和VEGF165蛋白的表达情况.用Western blot法检测上述肝细胞癌和正常肝组织中FAK和P-Akt蛋白的表达情况.结果:正常肝脏组织中VEGF165b蛋白表达率为96.67%(29/30),肝细胞癌组织中VEGF165b蛋白的表达率为21.4%(6/28),表达差异有统计学意义(P<0.05).VEGF165b mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达明显低于正常肝脏组织的表达(P<0.01).VEGF165 mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织的表达(P<0.01).FAK和P-Akt蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织的表达(P<0.01).结论:VEGF165b在肝细胞癌组织中的表达明显低于正常肝组织的表达,而VEGF165和FAK、P-Akt在肝细胞癌组织中的表达明显高于正常肝组织的表达.提示VEGF165b与肝癌发生、发展有关,其机制可能是VEGF165b抑制VEGF165、FAK和P-Akt表达及他们的促进血管生成、肿瘤生长作用. 展开更多
关键词 肝细胞癌 血管内皮生长因子165b 血管内皮生长因子165 黏着斑激酶 磷酸化-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶
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VEGF165b和VEGF165在胃癌组织中的表达及与预后的关系 被引量:2
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作者 关云艳 诸静芬 +3 位作者 欧希龙 吴海荣 吴锡平 王倩 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第27期41-44,共4页
目的研究VEGF165b和VEGF165在胃癌及癌旁正常组织中的表达及胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA与预后的关系。方法分别应用实时RT-PCR和免疫组织化学法检测胃癌及癌旁正常组织中VEGF165b和VEGF165的基因及蛋白表达,并对患者进行2... 目的研究VEGF165b和VEGF165在胃癌及癌旁正常组织中的表达及胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA与预后的关系。方法分别应用实时RT-PCR和免疫组织化学法检测胃癌及癌旁正常组织中VEGF165b和VEGF165的基因及蛋白表达,并对患者进行2年的随访,比较VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA比值及这两种蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织中的变化;同时分析VEGF165b与VEGF165蛋白表达的相关性以及胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA与预后的关系。结果在胃癌组织中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA低于癌旁正常组织中的水平;在癌旁正常组织中VEGF165b基因及蛋白表达强于VEGF165,在胃癌组织中VEGF165b基因及蛋白的表达则低于VEGF165,而且两者表达呈负相关关系;此外,在两年内死亡的患者中VEGF165b m RNA/VEGF165 m RNA明显低于生存患者中的比值水平。结论与正常组织相比,胃癌组织中存在VEGF165b向VEGF165基因及蛋白水平上的优势转换,这种变化有望成为治疗胃癌的新靶点。 展开更多
关键词 VEGF165B VEGF165 实时RT-PCR 免疫组织化学 胃癌
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我会巧拼165°角了
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作者 高慧芸 芮金芳(指导) 《数学小灵通(启智版)(上旬刊)》 2025年第10期22-23,共2页
最近,在数学课上我认识了量角工具--量角器,利用它能画出任意度数的角。可是今天老师却布置了一个新的任务给大家:用一副三角尺来拼出165°的角。刚接到这个任务时,大家都觉得不可能拼成功,因为三角尺上有30°、45°、60... 最近,在数学课上我认识了量角工具--量角器,利用它能画出任意度数的角。可是今天老师却布置了一个新的任务给大家:用一副三角尺来拼出165°的角。刚接到这个任务时,大家都觉得不可能拼成功,因为三角尺上有30°、45°、60°、90°这几种角,任意两种角拼摆组合好像都得不到165°角。 展开更多
关键词 三角尺 量角器 165 数学课 度数
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二次调质对165ksi管端加厚钢管组织及性能的影响
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作者 周家祥 史彬 +3 位作者 王亚男 孙卓男 丁炜 姚勇 《特殊钢》 2025年第5期87-90,共4页
钻杆的管端镦粗加厚是钻杆生产过程中非常重要的工序,管端镦粗以后,管体和管端壁厚尺寸不一样,在调质热处理时很难保证管体和管端力学性能的均匀性。这导致材料屈服强度、冲击韧性、硬度、晶粒度等存在较大差异,不利于高强高韧性钻杆的... 钻杆的管端镦粗加厚是钻杆生产过程中非常重要的工序,管端镦粗以后,管体和管端壁厚尺寸不一样,在调质热处理时很难保证管体和管端力学性能的均匀性。这导致材料屈服强度、冲击韧性、硬度、晶粒度等存在较大差异,不利于高强高韧性钻杆的安全作业。天津钢管制造有限公司采用两次调质热处理,900℃×30 min淬火+650℃×60 min回火+900℃×30 min淬火+650℃×60 min回火,充分细化晶粒度,提高强度和韧性,缩小管体管端性能均匀性。最终管体和管端屈服强度1140~1300 MPa,抗拉强度≥1200 MPa,管体-20℃纵向冲击功≥100 J,加厚区室温纵向冲击功≥80 J。实现了较好的强度韧性匹配,以及管体管端均匀性的良好效果。为超高强度高韧性钻杆在9000m以上特深井开采安全服役,提供了良好的材料性能保证。 展开更多
关键词 165ksi 钢管 钻杆 管端镦粗加厚 高强度 高韧性
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莫扎特声乐套曲《欢呼雀跃》K.165的演唱探究
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作者 吴美洲 《黄河之声》 2025年第15期87-91,共5页
莫扎特作为音乐巨匠,其歌剧广为人知,宗教音乐却常遭忽视。《欢呼雀跃》K.165是他宗教音乐中的经典,旋律美妙。文章从莫扎特生平出发,剖析该作品创作背景、首演情况及曲式结构,分演唱前、演唱时解析演唱要点,还将其与亨德尔同名声乐作... 莫扎特作为音乐巨匠,其歌剧广为人知,宗教音乐却常遭忽视。《欢呼雀跃》K.165是他宗教音乐中的经典,旋律美妙。文章从莫扎特生平出发,剖析该作品创作背景、首演情况及曲式结构,分演唱前、演唱时解析演唱要点,还将其与亨德尔同名声乐作品对比,为演唱者理解、演绎莫扎特宗教作品提供参考。 展开更多
关键词 莫扎特 宗教音乐 演唱分析 《欢呼雀跃》K.165
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血管内皮生长因子_(165)和白细胞介素-8促兔动脉粥样硬化斑块形成作用的探讨 被引量:2
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作者 吕军 肖敏 +2 位作者 刘久波 毛达勇 宋培仙 《微循环学杂志》 2005年第1期34-36,F004,共4页
目的 :观察血管内皮生长因子1 6 5(VEGF1 6 5)和白介素 8(IL 8)对兔动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 :15只日本大耳白兔随机分为 3组 :A组为对照组 ,普通饲料喂养 ,B、C组为处理组 ,高胆固醇饲料喂养。至第 3周 ( 2 1天 ) ,A组和B组... 目的 :观察血管内皮生长因子1 6 5(VEGF1 6 5)和白介素 8(IL 8)对兔动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 :15只日本大耳白兔随机分为 3组 :A组为对照组 ,普通饲料喂养 ,B、C组为处理组 ,高胆固醇饲料喂养。至第 3周 ( 2 1天 ) ,A组和B组肌注白蛋白 ( 2ug/kg) ,C组肌注VEGF1 6 5( 2ug/kg) ,之后继续饲养 3周 (共 4 2天 )处死动物 ,测定各组血清IL 8和血脂 ,用计量组织学的方法测定动脉斑块内CD34的阳性细胞数。结果 :① 2 1天及 4 2天时B组和C组分别与A组相比 ,血清IL 8浓度均有显著性升高 (P <0 .0 5)。C组 4 2天与 2 1天相比 ,血清IL 8水平明显增高 (P <0 .0 1)。② 4 2天时 ,各组之间CD34阳性细胞数比较有显著差异 (P <0 .0 5)。③ 4 2天时B组和C组IL 8的水平与CD34的阳性细胞数之间呈正相关 (B组r=0 .6 4,C组r=0 .88)。④各处理组内血脂水平比较 ,2 1天与 0天相比有明显升高 (P <0 .0 1) ,4 2天与 2 1天相比无显著差异。结论 :VEGF1 6 5促进斑块内血管生成的作用可能与其促进炎性细胞分泌有关。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子165 白细胞介素-8 动脉粥样硬化斑块 VEGF165 动脉粥样硬化(AS) 血管生成调节 IL-8 形成与发展 证明 促进
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hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达 被引量:1
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作者 葛建军 周正春 +4 位作者 陈兵 张胜权 罗欣 徐从贞 汪思应 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2005年第3期185-188,共4页
目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)... 目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。 展开更多
关键词 COS-7细胞 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 真核表达载体PCDNA3.1 基因克隆 聚合酶链反应(PCR) 人血管内皮生长因子 VEGF165基因 rhVEGF165 RT-PCR方法 COS7细胞 缺血性心脏病 VEGF蛋白 心肌组织 脂质体介导 基因治疗 核糖核酸
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VEGF_(165)和VEGF_(165b)与肿瘤关系的研究进展 被引量:3
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作者 关云艳 欧希龙 《现代医学》 2006年第6期447-450,共4页
关键词 VEGF165 VEGF165B 血管生成 抗血管生成 肿瘤 综述
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反义VEGF165腺病毒重组体的构建及鉴定 被引量:3
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作者 王家宁 黄永章 +3 位作者 王俊峰 王卫民 李瑞明 张群林 《郧阳医学院学报》 2001年第1期1-4,共4页
目的 :构建含人反义血管内皮生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因的重组腺病毒载体 ,为采用反义VEGF16 5RNA防治肿瘤的研究奠定基础。方法 :将人VEGF16 5cDNA反向插入到穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,即pAd -ahVEGF16 5。后者与pJM17通... 目的 :构建含人反义血管内皮生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因的重组腺病毒载体 ,为采用反义VEGF16 5RNA防治肿瘤的研究奠定基础。方法 :将人VEGF16 5cDNA反向插入到穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,即pAd -ahVEGF16 5。后者与pJM17通过脂质体共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得含人反义VEGF16 5基因的重组腺病毒Ad -ahVEGF16 5。通过PCR共扩增法鉴别Ad -ahVEGF16 5的正确与否。根据 2 6 0nm的紫外光吸收值计算病毒滴度。结果 :VEGF16 5cDNA成功地反向插入了pHCMVSP1A载体 ,以重组病毒基因组DNA为模板 ,同时扩增出了5 76bp的反义VEGF16 5基因片段和 86 0bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了Ad -ahVEGF16 5的正确性。病毒滴度为5 .6× 10 11pfu/ml。结论 :成功构建了携带人反义VEGF16 5基因的腺病毒Ad -ahVEGF16 5 ,本研究为采用反义VEGFRNA途径治疗肿瘤的在体。 展开更多
关键词 反义VEGF165 腺病毒 反义血管内皮生长因子165 基因重组 治疗 肿瘤
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VEGF165基因应用于鼠脑梗塞治疗的初步探讨
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作者 胡明均 刘勇 邓成国 《中华当代医学》 2004年第1期13-14,共2页
目的 探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)基因对大鼠脑梗塞的治疗是否有作用,效果如何,为临床应用VEGF165基因提供依据。方法 用线栓法制成Wistar大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型,将VEGF165基因与质粒载体构成重组DNA经颅注入到梗塞区... 目的 探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)基因对大鼠脑梗塞的治疗是否有作用,效果如何,为临床应用VEGF165基因提供依据。方法 用线栓法制成Wistar大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型,将VEGF165基因与质粒载体构成重组DNA经颅注入到梗塞区。7d后断头取脑制成石蜡切片,用HE染色显示梗塞区,用图像分析仪测梗塞面积。结果 重组DNA治疗组梗塞体积显著缩小(P<0.01)。结论 VEGF165基因对鼠脑梗塞具有显著的治疗效果。 展开更多
关键词 VEGF165基因 脑梗塞 治疗 血管内皮生长因子165 脑组织
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人血管内皮细胞生长因子-165和人血管生成素-1促进大鼠缺血下肢血管新生 被引量:5
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作者 宋建蓉 杨志健 +4 位作者 张馥敏 马文珠 哈团柱 李传富 高翔 《中国介入心脏病学杂志》 2005年第2期103-107,共5页
目的 观察肌肉转染腺病毒(adenovirus ,Ad )携带的人血管内皮细胞生长因子- 1 6 5(ves cularendothelialgrowfactor ,Ad5 VEGF1 65)和人血管形成素- 1 (angiopoietin- 1 ,Ad5 Ang -1 )基因对大鼠缺血下肢的生血管效应。方法 制作大... 目的 观察肌肉转染腺病毒(adenovirus ,Ad )携带的人血管内皮细胞生长因子- 1 6 5(ves cularendothelialgrowfactor ,Ad5 VEGF1 65)和人血管形成素- 1 (angiopoietin- 1 ,Ad5 Ang -1 )基因对大鼠缺血下肢的生血管效应。方法 制作大鼠下肢血管闭塞模型,肌肉内注射Ad5 VEGF1 65 或 和Ad5 Ang -1 ,以Westernblot法检测生长因子蛋白表达,免疫组化检测基因导入后在缺血肌肉引起的效应。结果 肌肉经注射Ad5 VEGF1 65和Ad5 Ang- 1后高表达人VEGF1 65 蛋白和人Ang- 1蛋白。术后7d处理组与对照组新生毛细血管数目无明显差别。但术后1 4d和2 1dAng- 1和VEGF1 65 组的新生毛细血管 肌肉数目比明显高于对照组(P <0 . 0 1 ) ,VEGF1 65+Ang 1两因子合用组明显高于单用组(P <0. 0 1 )。Ad -VEGF1 65组及Ad VEGF1 65+Ad Ang 1合用组出现大量包围着一厚层αSMA阳性平滑肌细胞的血管,其数量与肌肉数比值明显高于对照组(P <0 . 0 1 )。因子单用组和合用组肌肉内出现大量溴化脱氧尿嘧啶阳性细胞浸润,部分细胞表面呈现C- Kit阳性,新生血管内皮细胞中也有C Kit阳性标记。结论 Ad5- VEGF1 65和Ad5 -Ang -1能促进缺血肢体血管新生,二者合用的生血管效应更为显著;VEGF1 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长因子 血管新生 人血管生成素-1 缺血下肢 大鼠 Ad-VEGF165 人VEGF165 溴化脱氧尿嘧啶 Ang-1 平滑肌细胞 C-Kit factor 下肢血管闭塞 WESTEM 免疫组化检测 新生毛细血管 阳性细胞浸润 血管生成作用 血管效应
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VEGF165_b的抗血管生成作用在肾癌发生、发展中的研究进展 被引量:4
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作者 聂明秀 马普能 +1 位作者 张洪秀 李伟 《中国当代医药》 2015年第9期26-28,共3页
肾癌是一种高度血管化的恶性实性肿瘤,其生长和转移依赖于新生血管的形成,而血管形成主要是由促血管生成因子和抑制因子调控失衡、促血管生成因子增多所致。血管内皮生长因子(VEGF)亚型VEGF165是机体内含量最多,生物活性最强的促血管生... 肾癌是一种高度血管化的恶性实性肿瘤,其生长和转移依赖于新生血管的形成,而血管形成主要是由促血管生成因子和抑制因子调控失衡、促血管生成因子增多所致。血管内皮生长因子(VEGF)亚型VEGF165是机体内含量最多,生物活性最强的促血管生成因子,且在肾癌组织中高表达,与肿瘤的生长、转移密切相关。最新研究发现一种新的VEGF异构体VEGF165b具有抑制VEGF165介导的血管生成作用,有可能成为肾癌治疗过程中新的作用靶点,具有重要的临床应用价值。本文对VEGF165b的结构、作用机制进行综述。 展开更多
关键词 肾癌 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子亚型165 血管内皮生长因子异构体165b
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hVEGF_(165)及hBMP-7共表达重组腺相关病毒载体体内诱导成骨及成血管研究 被引量:8
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作者 张晨 马乾鹏 +3 位作者 强辉 李苗 党晓谦 王坤正 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1449-1454,共6页
目的探讨hVEGF165及hBMP-7共表达重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)体内诱导成骨及成血管的活性,为股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)的AAV基因治疗提供理论基础。方法取体外培养... 目的探讨hVEGF165及hBMP-7共表达重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)体内诱导成骨及成血管的活性,为股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)的AAV基因治疗提供理论基础。方法取体外培养的第3代兔BMSCs,分别采用以下4种病毒转染并分为4组:rAAV-hVEGF165-内部核糖体进入位点序列(internal ribosome entry site,IRES)-hBMP-7(A组)、rAAV-hVEGF165-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)(B组)、rAAV-hBMP-7-GFP(C组)及rAAV-IRES-GFP(D组)。取24只雄性新西兰大耳白兔制作后肢缺血模型,并随机分为4组(n=6),于股骨肌肉内植入上述4组病毒转染的BMSCs,8周后应用超声影像学检测兔后肢胫前动脉血流量,行CD34免疫组织化学染色检测微血管生成。另取24只雄性新西兰大耳白兔制作股骨肌袋模型,并随机分为4组(n=6),于肌袋内植入上述4组病毒转染的BMSCs,8周后应用X线片检测兔后肢原位骨化,行von Kossa钙盐染色检测肌肉组织成骨矿化。结果病毒注射后动物未出现局部或全身毒性反应。病毒注射后8周,A组兔后肢胫前动脉血流百分比及CD34阳性微血管数均高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);B组高于C、D组,差异有统计学意义(P<0.05);C、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。病毒注射后8周,A、C组兔后肢肌袋内出现可被X线检测到的原位骨化,von Kossa肌肉组织钙盐染色可见大量钙盐沉积,且A组原位骨化及钙盐沉积程度均较C组强;B组及D组均未见明显原位骨化及钙盐沉积形成。结论 rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7载体具有体内诱导成骨及成血管的生物学活性。 展开更多
关键词 腺相关病毒载体 HVEGF165 HBMP-7 共表达 基因治疗 骨形成 血管形成
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血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞凋亡的影响及机制 被引量:10
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作者 欧希龙 关云艳 +3 位作者 颜芳 孙为豪 杨柳 陈国胜 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期307-310,共4页
目的:本实验探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)对体外培养的胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响和机制.方法:将BGC-823细胞分为对照组、感染复数(MOI=20)病毒Ad-GFP的Ad-GFP组,重组腺病毒Ad-VEGF165转染的Ad-VEGF165组.应用流式细胞仪检测细... 目的:本实验探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)对体外培养的胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响和机制.方法:将BGC-823细胞分为对照组、感染复数(MOI=20)病毒Ad-GFP的Ad-GFP组,重组腺病毒Ad-VEGF165转染的Ad-VEGF165组.应用流式细胞仪检测细胞凋亡的百分率,RT-PCR方法检测凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2蛋白的表达情况.结果:流式细胞仪测定显示Ad-VEGF165组的细胞凋亡率明显低于Ad-GFP组和对照组(4.6%±0.31% vs 8.37%±1.06%.7.73%±0.86%,P<0.01);RT-PCR和细胞免疫化学结果显示VEGF165转染BGC-823细胞后促进了细胞Bcl-2mRNA和蛋白的表达.Ad-VEGF165组Bcl-2mRNA和蛋白均高于对照组和Ad-GFP组(Bcl-2mRNA:0.761±0.05 vs 0.363±0.12.0.356±0.08;Bcl-2蛋白:1.010±0.08 vs 0.865±0.07,0.901±0.05;P<0.01).结论:VEGF165通过上调凋亡抑制基因Bcl-2及其蛋白的表达,来抑制血浆饥饿诱导的胃癌细胞的凋亡. 展开更多
关键词 腺病毒 血管内皮生长因子165 胃癌 凋亡 BCL-2 逆转录聚合酶链式反应
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