目的:基于电压门控钠离子通道NAV1.7探究运气方苁蓉牛膝汤对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)慢性疼痛的影响及作用机制。方法:将18只8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组,每组6只。模型组和苁蓉牛膝汤组采用内侧半月板失稳术于小鼠...目的:基于电压门控钠离子通道NAV1.7探究运气方苁蓉牛膝汤对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)慢性疼痛的影响及作用机制。方法:将18只8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组,每组6只。模型组和苁蓉牛膝汤组采用内侧半月板失稳术于小鼠右后肢构建KOA模型,假手术组暴露关节腔后缝合皮肤。造模手术后第2天起,苁蓉牛膝汤组按0.02 mL·g^(-1)以苁蓉牛膝汤浓缩液(生药浓度1 g·mL^(-1))灌胃,模型组和假手术组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃12周。造模后6周、8周、10周、12周分别采用Von Frey测痛纤维丝和智能热板仪测定小鼠机械性疼痛阈值和热敏性疼痛阈值。造模后12周药物干预结束后,取小鼠右侧膝关节和L_(4)~L_(6)右侧背根神经节,采用Micro-CT进行膝关节骨微结构检测;采用阿尔辛蓝-苏木素-橙黄G染色进行膝关节软骨组织病理学观察,并采用国际骨关节炎研究学会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)评分系统对膝关节软骨病理变化进行评价;采用免疫组织化学染色检测膝关节软骨中Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL^(-1)8表达情况;采用免疫荧光技术检测L_(4)~L_(6)背根神经节中NAV1.7和c-fos表达情况及膝关节软骨中NAV1.7表达情况。结果:①机械性疼痛阈值测定结果。模型组机械性疼痛阈值随时间变化不明显(F=1.764,P=0.186),假手术组和苁蓉牛膝汤组机械性疼痛阈值随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=6.764,P=0.002;F=4.188,P=0.019)。造模后6周、8周、10周、12周,模型组的机械性疼痛阈值均低于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.042;P=0.002,P=0.009;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.001)。②热敏性疼痛阈值测定结果。热敏性疼痛阈值随时间变化总体呈先升高后降低的趋势(F=14.383,P=0.000)。模型组的热敏性疼痛阈值低于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.000)。③膝关节骨微结构检测结果。Micro-CT检查结果显示,假手术组膝关节结构基本正常,模型组可见明显骨赘和软骨下骨钙化,苁蓉牛膝汤组可见轻微骨赘和软骨下骨钙化。模型组的骨体积分数、骨小梁厚度均高于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.012;P=0.000,P=0.000),骨小梁分离度低于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.027)。④膝关节软骨组织病理学观察结果。模型组的膝关节软骨OARSI评分高于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.004)。⑤膝关节软骨中Ⅱ型胶原、MMP-9、IL-1β、IL-18表达情况检测结果。模型组的Ⅱ型胶原阳性表达面积小于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.000),MMP-9、IL-1β、IL-18阳性表达面积均大于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.002;P=0.000,P=0.000)。⑥L_(4)~L_(6)背根神经节中NAV1.7和c-fos表达情况检测结果。模型组L_(4)~L_(6)背根神经节中NAV1.7和c-fos阳性表达面积均大于假手术组(NAV1.7:P=0.001,P=0.000,P=0.000;c-fos:P=0.001,P=0.000,P=0.000)和苁蓉牛膝汤组(NAV1.7:P=0.006,P=0.013,P=0.003;c-fos:P=0.019,P=0.018,P=0.006)。⑦膝关节软骨中NAV1.7表达情况检测结果。模型组膝关节软骨中NAV1.7阳性表达面积大于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.005,P=0.006)。结论:运气方苁蓉牛膝汤可改善KOA模型小鼠的慢性疼痛症状,其机制可能与下调NAV1.7表达水平,以及减轻炎症反应和延缓软骨退变有关。展开更多
用RSM法以MRS培养基为基础对副干酪乳杆菌HD1.7的液体培养基进行优化。首先采用Plackett-Burman试验设计筛选显著因子,确定了影响细菌素产生的主要成分:牛肉膏、葡萄糖、酵母粉;运用最陡爬坡试验逼近最大细菌素产生区域;利用RSM法对培...用RSM法以MRS培养基为基础对副干酪乳杆菌HD1.7的液体培养基进行优化。首先采用Plackett-Burman试验设计筛选显著因子,确定了影响细菌素产生的主要成分:牛肉膏、葡萄糖、酵母粉;运用最陡爬坡试验逼近最大细菌素产生区域;利用RSM法对培养基进行优化。试验结果表明培养基最佳配方为酵母粉0.26%、牛肉膏0.88%、蛋白胨1.5%、葡萄糖2.45%、Mg-SO40.06%、K2HPO40.2%、吐温80 0.1%、MnSO40.005%、NaC l 0%。展开更多
文摘目的:基于电压门控钠离子通道NAV1.7探究运气方苁蓉牛膝汤对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)慢性疼痛的影响及作用机制。方法:将18只8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组,每组6只。模型组和苁蓉牛膝汤组采用内侧半月板失稳术于小鼠右后肢构建KOA模型,假手术组暴露关节腔后缝合皮肤。造模手术后第2天起,苁蓉牛膝汤组按0.02 mL·g^(-1)以苁蓉牛膝汤浓缩液(生药浓度1 g·mL^(-1))灌胃,模型组和假手术组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃12周。造模后6周、8周、10周、12周分别采用Von Frey测痛纤维丝和智能热板仪测定小鼠机械性疼痛阈值和热敏性疼痛阈值。造模后12周药物干预结束后,取小鼠右侧膝关节和L_(4)~L_(6)右侧背根神经节,采用Micro-CT进行膝关节骨微结构检测;采用阿尔辛蓝-苏木素-橙黄G染色进行膝关节软骨组织病理学观察,并采用国际骨关节炎研究学会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)评分系统对膝关节软骨病理变化进行评价;采用免疫组织化学染色检测膝关节软骨中Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL^(-1)8表达情况;采用免疫荧光技术检测L_(4)~L_(6)背根神经节中NAV1.7和c-fos表达情况及膝关节软骨中NAV1.7表达情况。结果:①机械性疼痛阈值测定结果。模型组机械性疼痛阈值随时间变化不明显(F=1.764,P=0.186),假手术组和苁蓉牛膝汤组机械性疼痛阈值随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=6.764,P=0.002;F=4.188,P=0.019)。造模后6周、8周、10周、12周,模型组的机械性疼痛阈值均低于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.042;P=0.002,P=0.009;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.001)。②热敏性疼痛阈值测定结果。热敏性疼痛阈值随时间变化总体呈先升高后降低的趋势(F=14.383,P=0.000)。模型组的热敏性疼痛阈值低于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.000)。③膝关节骨微结构检测结果。Micro-CT检查结果显示,假手术组膝关节结构基本正常,模型组可见明显骨赘和软骨下骨钙化,苁蓉牛膝汤组可见轻微骨赘和软骨下骨钙化。模型组的骨体积分数、骨小梁厚度均高于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.012;P=0.000,P=0.000),骨小梁分离度低于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.027)。④膝关节软骨组织病理学观察结果。模型组的膝关节软骨OARSI评分高于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.004)。⑤膝关节软骨中Ⅱ型胶原、MMP-9、IL-1β、IL-18表达情况检测结果。模型组的Ⅱ型胶原阳性表达面积小于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.000),MMP-9、IL-1β、IL-18阳性表达面积均大于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.002;P=0.000,P=0.000)。⑥L_(4)~L_(6)背根神经节中NAV1.7和c-fos表达情况检测结果。模型组L_(4)~L_(6)背根神经节中NAV1.7和c-fos阳性表达面积均大于假手术组(NAV1.7:P=0.001,P=0.000,P=0.000;c-fos:P=0.001,P=0.000,P=0.000)和苁蓉牛膝汤组(NAV1.7:P=0.006,P=0.013,P=0.003;c-fos:P=0.019,P=0.018,P=0.006)。⑦膝关节软骨中NAV1.7表达情况检测结果。模型组膝关节软骨中NAV1.7阳性表达面积大于假手术组和苁蓉牛膝汤组(P=0.005,P=0.006)。结论:运气方苁蓉牛膝汤可改善KOA模型小鼠的慢性疼痛症状,其机制可能与下调NAV1.7表达水平,以及减轻炎症反应和延缓软骨退变有关。
文摘用RSM法以MRS培养基为基础对副干酪乳杆菌HD1.7的液体培养基进行优化。首先采用Plackett-Burman试验设计筛选显著因子,确定了影响细菌素产生的主要成分:牛肉膏、葡萄糖、酵母粉;运用最陡爬坡试验逼近最大细菌素产生区域;利用RSM法对培养基进行优化。试验结果表明培养基最佳配方为酵母粉0.26%、牛肉膏0.88%、蛋白胨1.5%、葡萄糖2.45%、Mg-SO40.06%、K2HPO40.2%、吐温80 0.1%、MnSO40.005%、NaC l 0%。
