前人研究认为,受海因里希1(Heinrich Stadial 1,HS1)早期(约18.3—16.3cal ka BP)北半球降温的影响,热带辐合带(intertropical convergence zone,ITCZ)雨带的平均位置会向南移动。但是,最新结果发现,HS1早期北半球低纬度地区(3oN—9oN)...前人研究认为,受海因里希1(Heinrich Stadial 1,HS1)早期(约18.3—16.3cal ka BP)北半球降温的影响,热带辐合带(intertropical convergence zone,ITCZ)雨带的平均位置会向南移动。但是,最新结果发现,HS1早期北半球低纬度地区(3oN—9oN)呈现湿润水文条件,而其南北部却同步出现干旱。可见HS1早期ITCZ对北大西洋降温事件的响应方向及位移幅度仍存争议。孟加拉湾的海洋炭屑记录保存了周边陆地大量气候成因古火事件的信息。研究发现,在HS1早期(18.3—16.3 cal ka BP),位于9°54′N的YDY09孔的炭屑总浓度与木本型炭屑百分比均降至最低,而草本型炭屑百分比则有所上升,这表明火灾发生强度急剧降低。这一变化,结合有孔虫和石笋δ^(18)O记录所揭示的降水减少信号,可能源于当时气候干旱与温度降低共同导致的植被退化。该结论说明炭屑、孢粉与有孔虫等其他指标重建的印度夏季风降水结果一致,也与来自10°N的YDY10岩芯和15°N的E87-32B岩芯中常绿阔叶林花粉低值所反映的干旱情形相符。同期,苏门答腊岛2个孔(分别位于6°N和6°S)的炭屑和孢粉含量也分别显示湿润和干旱,反映其炭屑和孢粉源区当时处于ITCZ雨带范围内部与外部区域。炭屑与孢粉记录共同揭示,HS1早期在10°N至6°S范围之外存在干旱证据;结合苏门答腊岛6°N孔的湿润证据,间接支持了该时期ITCZ位置在6°N两侧。展开更多
【目的】制备番鸭丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase,MAPK1)蛋白多克隆抗体,鉴定其特异性与适用性,并探究MAPK1蛋白在卵泡颗粒细胞及卵泡中的表达定位,为研究其在番鸭卵泡发育与生殖调控中的功能提供试验工具。【...【目的】制备番鸭丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase,MAPK1)蛋白多克隆抗体,鉴定其特异性与适用性,并探究MAPK1蛋白在卵泡颗粒细胞及卵泡中的表达定位,为研究其在番鸭卵泡发育与生殖调控中的功能提供试验工具。【方法】以番鸭卵巢组织cDNA为模板,通过PCR扩增MAPK1基因并测序,运用生物信息学工具分析MAPK1蛋白理化性质及主要抗原表位,筛选免疫原区段。对免疫原序列进行大肠杆菌密码子优化并人工合成,经同源重组克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达载体pET30a-MAPK1并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。在HB-PET自诱导培养基中表达、纯化MAPK1重组蛋白,将纯化蛋白与QuickAntibody-Rabbit8W佐剂混合后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。采用ELISA、Western blotting、细胞免疫荧光(CIF)、组织免疫荧光(TIF)和免疫组化(IHC)等方法检测多克隆抗体的效价、特异性与适用性,并以颗粒细胞标志物促卵泡激素受体(FSHR)为参照分析MAPK1表达定位。【结果】成功克隆了番鸭MAPK1基因,大小约1107 bp,编码368个氨基酸。MAPK1蛋白理论分子质量约42 ku。生物信息学预测显示,MAPK1蛋白不含信号肽和跨膜结构;第50—100、200—300和250—350位氨基酸区段亲水性良好,第30—90和200—300氨基酸区段抗原指数较高,第30—70、120—150、200—260及320—360位氨基酸区段的氨基酸表面暴露概率较大。MAPK1蛋白二级结构以α-螺旋为主,包含典型激酶保守结构,活化环呈无规则卷曲状态,主要定位于细胞质和细胞核。综合蛋白特性,最终筛选了第4—364位氨基酸作为候选免疫原区段。成功构建原核重组表达载体pET30-MAPK1,MAPK1重组蛋白以可溶性形式表达,分子质量约48 ku。成功制备了兔抗鸭MAPK1蛋白多克隆抗体,ELISA结果显示该抗体效价达1∶102400;Western blotting、CIF、TIF和IHC结果显示,制备的多克隆抗体可特异识别MAPK1重组蛋白及番鸭卵泡颗粒细胞和卵泡中的内源性MAPK1蛋白。在颗粒细胞中,MAPK1主要定位于卵泡颗粒细胞的细胞质和细胞核;在卵泡中,MAPK1主要分布于卵泡颗粒细胞层,表达定位与FSHR基本一致。【结论】试验成功制备了番鸭MAPK1多克隆抗体,该抗体特异性良好,适用于番鸭卵泡相关细胞与组织样本中MAPK1的免疫学检测。研究结果为MAPK1在卵泡发育及生殖调控中的功能研究提供了技术支撑。展开更多
文摘前人研究认为,受海因里希1(Heinrich Stadial 1,HS1)早期(约18.3—16.3cal ka BP)北半球降温的影响,热带辐合带(intertropical convergence zone,ITCZ)雨带的平均位置会向南移动。但是,最新结果发现,HS1早期北半球低纬度地区(3oN—9oN)呈现湿润水文条件,而其南北部却同步出现干旱。可见HS1早期ITCZ对北大西洋降温事件的响应方向及位移幅度仍存争议。孟加拉湾的海洋炭屑记录保存了周边陆地大量气候成因古火事件的信息。研究发现,在HS1早期(18.3—16.3 cal ka BP),位于9°54′N的YDY09孔的炭屑总浓度与木本型炭屑百分比均降至最低,而草本型炭屑百分比则有所上升,这表明火灾发生强度急剧降低。这一变化,结合有孔虫和石笋δ^(18)O记录所揭示的降水减少信号,可能源于当时气候干旱与温度降低共同导致的植被退化。该结论说明炭屑、孢粉与有孔虫等其他指标重建的印度夏季风降水结果一致,也与来自10°N的YDY10岩芯和15°N的E87-32B岩芯中常绿阔叶林花粉低值所反映的干旱情形相符。同期,苏门答腊岛2个孔(分别位于6°N和6°S)的炭屑和孢粉含量也分别显示湿润和干旱,反映其炭屑和孢粉源区当时处于ITCZ雨带范围内部与外部区域。炭屑与孢粉记录共同揭示,HS1早期在10°N至6°S范围之外存在干旱证据;结合苏门答腊岛6°N孔的湿润证据,间接支持了该时期ITCZ位置在6°N两侧。
