目的探索酮还原酶家族1成员C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,AKR1C3)对乳腺癌恶性细胞生物学行为的干预作用及对程序性细胞死亡蛋白/程序性死亡-配体1(programmed cell death protein1/programmed death-ligand1,PD-1/PD-L)...目的探索酮还原酶家族1成员C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,AKR1C3)对乳腺癌恶性细胞生物学行为的干预作用及对程序性细胞死亡蛋白/程序性死亡-配体1(programmed cell death protein1/programmed death-ligand1,PD-1/PD-L)通路的影响。方法把MCF-7人乳腺癌细胞中NC组和AKR1C3组分别转染空质粒和AKR1C3质粒,采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h细胞活力;采用流式细胞技术测定各组细胞的存活率以及早期、晚期凋亡比例;通过Transwell实验对各组细胞的迁移和侵袭能力进行检测;通过Western blot检测各组细胞PD-1、PD-L1、蛋白激酶B(protein kinase b,AKT)蛋白表达水平。使用C57BL/6小鼠构建荷瘤模型,将采用人乳腺癌MCF-7细胞转染NC质粒和AKR1C3质粒进行细胞荷瘤,每3 d测量瘤体积,持续21 d,绘制两组小鼠肿瘤生长曲线,并于实验终点测量肿瘤质量。结果相较于NC组,AKR1C3组细胞活力降低(P<0.05),并且具有时间依赖效应(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡比例升高(P<0.05),PD-1、PD-L1、AKT蛋白表达水平降低(P<0.05)。动物实验表明,AKR1C3组小鼠肿瘤体积降低,肿瘤质量下降(P<0.05)。结论AKR1C3可以抑制人乳腺癌细胞恶性生物学行为,抑制PD-1/PDL1信号通路蛋白表达。展开更多
目的:探究卵巢癌(ovarian cancer,OV)浸润性CD4^(+)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的脂质摄取与积累情况,及其与CD4^(+)Treg中程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxi...目的:探究卵巢癌(ovarian cancer,OV)浸润性CD4^(+)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的脂质摄取与积累情况,及其与CD4^(+)Treg中程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4,CTLA-4)表达的相关性。方法:采用亲脂性荧光染料BODIPY^(TM)493/503和荧光脂肪酸探针BODIPY^(TM)500/510 C1 C12分别检测OV组织中的或与不同OV细胞系(ES-2、SKOV3、CAOV3)上清液共培养的人源CD4^(+)Treg的细胞内脂质含量和脂质摄取能力;使用脂肪酸氧化抑制剂(Etomoxir)、脂肪酸合成抑制剂(C75)和脂肪酸摄取抑制剂磺基-N-琥珀酰亚胺油酸酯(sulfo-N-succinimidyl oleate,SSO)干预脂质代谢;通过流式细胞术分析CD4^(+)Treg上免疫抑制分子PD-1和CTLA-4的表达。结果:OV组织CD4^(+)Treg相比传统CD4^(+)T细胞表现出更高的脂质含量和脂质摄取能力(P均<0.01)。在体外实验中,与基础培养基相比,OV细胞培养上清可显著提升CD4^(+)Treg的胞内脂质含量与脂质摄取能力(P均<0.05),其中CAOV3来源的上清作用最为显著。此外,CAOV3上清液还能提升CD4^(+)Treg中PD-1与CTLA-4的表达(P<0.05)。CD4^(+)Treg的脂质积累随CAOV3上清浓度增加呈剂量依赖性上升(P<0.05),且其对胞外荧光脂肪酸类似物的摄取能力具有浓度依赖性(P<0.05)。脂肪酸摄取抑制剂SSO可有效逆转CAOV3上清液诱导的CD4^(+)Treg脂质积累及PD-1、CTLA-4的高表达(P<0.05);而脂肪酸氧化抑制剂Etomoxir与合成抑制剂C75则无显著影响。结论:OV微环境通过促进CD4^(+)Treg的脂质摄取,提高细胞内脂质含量,促进其免疫抑制分子PD-1和CTLA-4表达。靶向脂肪酸摄取途径可能是逆转OV中Treg介导的免疫抑制的潜在策略。展开更多
文摘目的:探究卵巢癌(ovarian cancer,OV)浸润性CD4^(+)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的脂质摄取与积累情况,及其与CD4^(+)Treg中程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4,CTLA-4)表达的相关性。方法:采用亲脂性荧光染料BODIPY^(TM)493/503和荧光脂肪酸探针BODIPY^(TM)500/510 C1 C12分别检测OV组织中的或与不同OV细胞系(ES-2、SKOV3、CAOV3)上清液共培养的人源CD4^(+)Treg的细胞内脂质含量和脂质摄取能力;使用脂肪酸氧化抑制剂(Etomoxir)、脂肪酸合成抑制剂(C75)和脂肪酸摄取抑制剂磺基-N-琥珀酰亚胺油酸酯(sulfo-N-succinimidyl oleate,SSO)干预脂质代谢;通过流式细胞术分析CD4^(+)Treg上免疫抑制分子PD-1和CTLA-4的表达。结果:OV组织CD4^(+)Treg相比传统CD4^(+)T细胞表现出更高的脂质含量和脂质摄取能力(P均<0.01)。在体外实验中,与基础培养基相比,OV细胞培养上清可显著提升CD4^(+)Treg的胞内脂质含量与脂质摄取能力(P均<0.05),其中CAOV3来源的上清作用最为显著。此外,CAOV3上清液还能提升CD4^(+)Treg中PD-1与CTLA-4的表达(P<0.05)。CD4^(+)Treg的脂质积累随CAOV3上清浓度增加呈剂量依赖性上升(P<0.05),且其对胞外荧光脂肪酸类似物的摄取能力具有浓度依赖性(P<0.05)。脂肪酸摄取抑制剂SSO可有效逆转CAOV3上清液诱导的CD4^(+)Treg脂质积累及PD-1、CTLA-4的高表达(P<0.05);而脂肪酸氧化抑制剂Etomoxir与合成抑制剂C75则无显著影响。结论:OV微环境通过促进CD4^(+)Treg的脂质摄取,提高细胞内脂质含量,促进其免疫抑制分子PD-1和CTLA-4表达。靶向脂肪酸摄取途径可能是逆转OV中Treg介导的免疫抑制的潜在策略。
