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肠出血性大肠杆菌0157:H7感染动物模型的建立 被引量:4
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作者 程建平 邹全明 +4 位作者 毛旭虎 易勇 童文德 王庆旭 丁红雷 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期276-278,共3页
目的 建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法 不同大小(5、7和9周龄)的Balb/c小鼠分别随机分成3组,先以链霉素处理3d ,再分别以不同剂量(1×10 10 CFU和1×10 9CFU)经口感染具链霉素抗性的0 15 7:H7 SMR2菌株,... 目的 建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法 不同大小(5、7和9周龄)的Balb/c小鼠分别随机分成3组,先以链霉素处理3d ,再分别以不同剂量(1×10 10 CFU和1×10 9CFU)经口感染具链霉素抗性的0 15 7:H7 SMR2菌株,进行临床观察和微生物学、病理学检查。结果 5和7周龄实验组小鼠在感染后2~5d有33%~83%死亡,肾、肝、肺和肠道出现不同程度的病理变化,所有实验组未死小鼠粪便排菌时间在13~2 2d以上。结论 小鼠感染O15 7后可表现出人类感染O15 7所出现的主要临床症状和病理变化,对研究EHEC的致病机制和疫苗研究有重要意义。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 0157:H7 动物模型 小鼠
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Four natural epothilone derivatives isolated from Sorangium cellulosum strain So0157-2 被引量:1
2
作者 鲁春华 赵林 +1 位作者 李越中 沈月毛 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2013年第1期28-31,共4页
Four natural epothilone analogues, including two 14-membered epothilones L (1), L1 (2) and two epoxide opened epothilones A (3) and B (4), were isolated from the extract of fermentation adsorber resin of Soran... Four natural epothilone analogues, including two 14-membered epothilones L (1), L1 (2) and two epoxide opened epothilones A (3) and B (4), were isolated from the extract of fermentation adsorber resin of Sorangium cellulosum strain So0157-2. Their structures were elucidated on the basis of comprehensive NMR and MS data. They are all isolated from the wild type S. cellulosum strain So0157-2 as natural products for the first time. 展开更多
关键词 14-Membered epothilones Epoxide opened epothilone Sorangium cellulosum strain So0157-2
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应用酶联免疫吸附试验检测肠出血性大肠杆菌0157:H7方法研究
3
作者 宋志荣 王利民 +1 位作者 郭宏 孙克江 《医学检验与临床》 2002年第1期16-19,共4页
目的制备和纯化0157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗0157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对0157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延.方法ELISA双抗体夹心法检测0157:H7抗原.步骤:包被特异性抗... 目的制备和纯化0157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗0157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对0157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延.方法ELISA双抗体夹心法检测0157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗0157:H7酶结合物,最后加入底物显色.结果本课题所研制的抗0157:H7酶结合物只对0157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸咐试验(即双抗体夹心法)对肠出血性大肠杆菌0157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌0157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段. 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌0157:H7 酶联免疫吸附实验(ELISA) 大肠杆菌 胃肠出血
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使用SPR生物传感器快速检测大肠杆菌E.Coli 0157∶H7 被引量:19
4
作者 葛晶 殷涌光 王凯 《吉林大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期214-218,共5页
利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,使用集成化手持式 SpreetaTM SPR传感器快速检测大肠杆菌E.Coli 0157∶H7,采用亲和素 生物素系统放大检测的响应信号,并引入复合抗体作为二次抗体,使该传感器对大肠杆菌的检测限由106cfu/mL下降到105cfu... 利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,使用集成化手持式 SpreetaTM SPR传感器快速检测大肠杆菌E.Coli 0157∶H7,采用亲和素 生物素系统放大检测的响应信号,并引入复合抗体作为二次抗体,使该传感器对大肠杆菌的检测限由106cfu/mL下降到105cfu/mL。 展开更多
关键词 食品检测 SPR生物传感器 快速检测 大肠杆菌 复合抗体
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应用优化的双向电泳技术建立纤维堆囊菌So0157-2蛋白质组数据库(英文)
5
作者 张鹏翼 李越中 +3 位作者 吴志红 刘红 徐培培 熊娟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第1期86-94,共9页
堆囊菌丰富的次级代谢产物是新药的重要来源,而蛋白质组学分析是研究代谢调控的有效方法.然而堆囊菌含有大量的胞外多糖以及黏液,干扰了蛋白质组学分析中蛋白质的溶解度、分辨率及重现性.为了高通量地筛选Sorangium cellulosumSo0157-2... 堆囊菌丰富的次级代谢产物是新药的重要来源,而蛋白质组学分析是研究代谢调控的有效方法.然而堆囊菌含有大量的胞外多糖以及黏液,干扰了蛋白质组学分析中蛋白质的溶解度、分辨率及重现性.为了高通量地筛选Sorangium cellulosumSo0157-2表达的特异性蛋白,实验优化了S.cellulosum So0157-2双向电泳方法.首先,S.cellulosum So0157-2蛋白在裂解液中有更好的溶解度.pH 3~10非线性胶条和1 mg的蛋白上样量适用于第一向等电聚焦,分别提高了蛋白质点的分辨率和低丰度蛋白质的表达.15%SDS-PAGE改善了S.cellulosum So0157-2蛋白分离的分辨率和重现性.最终,通过优化的双向电泳方法获得了S.cellulosum So0157-2在M26培养基中培养3天的全蛋白质表达谱,并检测到552个蛋白质点.进而对表达蛋白通过MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定,其中474个蛋白质得到鉴定,鉴定率85.9%.得到鉴定的蛋白质包括细胞结构和功能组分,以及细胞代谢合成酶类,其中8个蛋白质与糖类的转化和代谢相关,这有助于糖基化埃博霉素A的深入研究.该优化方法为进一步建立纤维堆囊菌So0157-2在各种培养条件下的蛋白质组表达数据库打下基础. 展开更多
关键词 双向电泳 纤维堆囊菌So0157-2 优化 蛋白质组
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检测大肠杆菌0157:H7免疫传感器三种酶固定方法的效果比较
6
作者 马静 佟荟 +3 位作者 李江陵 刘军 余云芳 韩福郎 《公共卫生与预防医学》 2011年第4期89-90,共2页
肠出血性大肠杆菌(Escherichia coli 0157:H7)是危害严重的致病肠道菌之一,欧美、日本等国都有多次暴发流行及散发病例报道,对人类健康构成严重威胁,因此建立特异、灵敏及快速的Ecoli 0157:H7检测方法显得尤为重要。
关键词 肠出血性大肠杆菌 0157:H7 免疫传感器 固定方法 检测 病例报道 暴发流行 人类健康
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肉制品中沙门菌和大肠杆菌0157:H7的检测与体会
7
作者 翟庆桂 韩冰 李羡亭 《中国城乡企业卫生》 2009年第6期87-87,共1页
章丘市疾控中心中心实验室于2006年12月通过了国家实验室认可。2007年参加了由中国合格评定国家认可委员会(CNAS)组织的肉制品中沙门菌和大肠杆菌0157:H7检测能力验证。能力验证是认可机构和管理机构判定实验室能力的重要技术手段,... 章丘市疾控中心中心实验室于2006年12月通过了国家实验室认可。2007年参加了由中国合格评定国家认可委员会(CNAS)组织的肉制品中沙门菌和大肠杆菌0157:H7检测能力验证。能力验证是认可机构和管理机构判定实验室能力的重要技术手段,也是实验室内部质量控制的补充措施。沙门菌和大肠杆菌0157:H7是影响食品安全的主要食源性致病菌。 展开更多
关键词 肉制品 沙门菌 大肠杆菌0157:H7
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Therapeutic and Immunomodulatory Effects of Raw Maize "OGI" on Rats Infected with Escherichia coil 0157:H7
8
作者 Busuyi Micheal Komolafe Ayodele O. Ogundare Tinuola Tokunbo Adebolu 《Journal of Life Sciences》 2013年第6期570-576,共7页
Escherichia coli O157:H7 is known to cause food borne illness globally. Treatment of infections caused by this organism is difficult because the administration of antibiotics might precipitate kidney complications; t... Escherichia coli O157:H7 is known to cause food borne illness globally. Treatment of infections caused by this organism is difficult because the administration of antibiotics might precipitate kidney complications; therefore there is the need to search for alternative therapy. In this study, the therapeutic and immunomodulatory effects of raw maize "ogi" was investigated on rats infected with Escherichia coli 0157:H7. Infected rats treated with maize "ogi" slurry 1.0 mL once or twice daily and maize "ogi" liquor, 1.0 mL twice daily recovered 72 h while those that were treated with less than 1.0 mL recovered by 96 h. Without treatment with "ogi" however, the rats started recovering by 120 h. The treatment caused the white blood cells which had already gone up as a result of the infection to reduce significantly (P 〈 0.05) by 24 h of administration of raw fermented maize "ogi" components to the infected rats. It also caused a significant decrease in the lymphocyte counts of the infected and treated rats by 24 h. On the other hand, there was an increase in the neutrophil count irrespective of the different volumes and different components of raw "ogi" used by 24 h but by the 72 h of treatment, it started to decrease and by 120 h reduced to normal levels. Since the administration of raw maize "ogi" either slurry or liquor caused the duration of infection in rats infected with Escherichia coli 0157:H7 to reduce from 120 h to 72 h, it is therefore suggested that people having diarrhoea caused by this organism could drink fermented raw maize "ogi" slurry or liquor to treat the infection. 展开更多
关键词 Maize "ogi" E. coli 0157:H7 THERAPEUTIC immunomodulatory.
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大肠杆菌0157袭击东瀛
9
作者 黄建珍 《广东畜牧兽医科技》 1997年第1期50-51,共2页
1996年5月下旬,日本冈山县小学发生集体中毒事件。以后,同样的中毒事件在日本连续不断。经查明,引发这次事件的元凶是大肠杆菌0157:H7。到目前为止,已在东京、大贩、京都等地44个都县发现太肠杆菌0157:H7引发的腹泻流行,患者达9500人,死... 1996年5月下旬,日本冈山县小学发生集体中毒事件。以后,同样的中毒事件在日本连续不断。经查明,引发这次事件的元凶是大肠杆菌0157:H7。到目前为止,已在东京、大贩、京都等地44个都县发现太肠杆菌0157:H7引发的腹泻流行,患者达9500人,死亡11人。 展开更多
关键词 家畜 家禽 大肠杆菌0157 流行病学
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EHEC0157:H7紧密黏附素及突变体与受体Tir的结合特性研究
10
作者 易勇 肖敏 +12 位作者 罗萍 樊峥 贾莉萍 魏平 陈兴明 李丹 刘春雷 高峰 王贵华 司少艳 毛旭虎 邹全明 敬华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期525-531,共7页
目的表达纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)0157:H7的紧密黏附素(intimin)及突变体intiminN916Y,并构建其转位紧密黏附素受体(translocatedint intin receptor,Tir)结合片段(intiminbinding domain,Tir-IBD),通过BIACore技术检... 目的表达纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)0157:H7的紧密黏附素(intimin)及突变体intiminN916Y,并构建其转位紧密黏附素受体(translocatedint intin receptor,Tir)结合片段(intiminbinding domain,Tir-IBD),通过BIACore技术检测紧密黏附素及突变体intiminN916Y与Tit.IBD蛋白质相互作用特性的变化,探索特定氨基酸的突变对其黏附结合功能的影响。方法设计引物采用PCR法自EHEC0157:H7基因组扩增Tir—IBD的编码基因tir-~d,TA克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-tir—ibd,经测序鉴定后转化最coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测。目的蛋白经Ni.NTA亲和纯化后,再用阴离子交换柱ResourceQ和分子筛柱Superdex200进行纯化。同时按包涵体复性后纯化的方案制备紧密黏附素及突变体intiminNgl6Y,将所得高纯度目的蛋白Tir-IBD适当稀释后耦联BIACore3000配套的NTA芯片,在25℃和37℃条件下分别以紧密黏附素及突变体intim.inN916Y作为流动相进行BIACore检测。结果EHEC0157:H7基因组扩增出了约270bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a(+)-tir-ibd经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化EcoliBL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约15%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(肘,)约10x103,破菌后电泳证实目的蛋白为可溶表达。Ni-NTA亲和纯化和阴离子交换纯化效果明显,高纯度的Tir-IBD蛋白耦联NTA芯片,在25℃和37℃条件下对紧密黏附素及突变体intiminN916Y与'Fir.IBD相互作用的BIACore检测结果显示,intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。结论EHEC0157:H7的紧密黏附素、突变体intiminN916Y及Tir-IBD经基因克隆后获得了较好的表达,纯化后获得高纯度的目的蛋白。在此基础上建立了蛋白相互作用的BIACore检测体系,证明intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。 展开更多
关键词 EHEC0157:H7 蛋白质相互作用 紧密黏附素 imiminNgl6Y Tir—IBD
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大肠杆菌0157:H7呼吸系统调控蛋白FNR对三型分泌系统调控的研究
11
作者 徐雪芳 阎泽军 +1 位作者 熊衍文 徐建国 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1043-1046,共4页
目的了解大肠杆菌0157:H7FNR(fumarate nitrate reduction,富马酸硝酸盐还原)对三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)表达的影响。方法本研究采用kRed重组技术,利用PCR产物,通过Bet(a ssDNA annealing protein,ssDN... 目的了解大肠杆菌0157:H7FNR(fumarate nitrate reduction,富马酸硝酸盐还原)对三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)表达的影响。方法本研究采用kRed重组技术,利用PCR产物,通过Bet(a ssDNA annealing protein,ssDNA退火蛋白)和Exo(a5’-3’dsDNA exonuclease,5’-3’dsDNA外切酶)蛋白促进同位交换的方法,成功构建了.—矿突变株。结果虽然细胞黏附结果显示,与野生株相比,缺失株的黏附力并没有明显下降。但是T3SS的蛋白图谱显示.加突变株中蛋白分泌量有明显下降。结论推测可能是fnr基因敲除后导致高浓度的ClpXP(caseinolytic proteaseX&P,酪蛋白水解酶X&P)引起GrlA(global regulator of LEE activator)蛋白的降解,从而导致LEE(locus of enteroeyte effacement)表达的下降,造成T3SS蛋白分泌量的下降。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 H7 FNR T3SS
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减少环境中危胁人民健康的“E型大肠菌0157”的有效办法
12
作者 李增有 《饲料与畜牧(新饲料)》 1999年第2期9-10,共2页
大肠杆菌广泛存在于人类生活的环境中,但人们只将其作为生活环境的“污染”指标,而不是当做危险致病的细菌看待,认为它的少量存在是难免的,其实,有些大肠菌不仅致病,甚至个别菌株对人类还有巨毒。在美国,它是很受重视的,例如,E型大肠菌0... 大肠杆菌广泛存在于人类生活的环境中,但人们只将其作为生活环境的“污染”指标,而不是当做危险致病的细菌看待,认为它的少量存在是难免的,其实,有些大肠菌不仅致病,甚至个别菌株对人类还有巨毒。在美国,它是很受重视的,例如,E型大肠菌0157,就有过下面的事例: 展开更多
关键词 大肠杆菌 E型大肠菌0157 健康
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农产品中大肠杆菌O157:H7的来源及分布研究进展 被引量:19
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作者 山珊 赖卫华 +1 位作者 陈明慧 崔希 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第1期289-293,共5页
近年来,由大肠杆菌O157∶H7污染农产品而引起的食源性疾病频繁发生。农产品可能会在生长过程中感染大肠杆菌O15 7∶H7,了解农产品中大肠杆菌O157∶H7的来源及其分布,可以为预防农产品污染提供建议。本文就农产品中大肠杆菌O157∶H7可能... 近年来,由大肠杆菌O157∶H7污染农产品而引起的食源性疾病频繁发生。农产品可能会在生长过程中感染大肠杆菌O15 7∶H7,了解农产品中大肠杆菌O157∶H7的来源及其分布,可以为预防农产品污染提供建议。本文就农产品中大肠杆菌O157∶H7可能的来源和其在农产品中的大致分布情况进行了综述。 展开更多
关键词 农产品 大肠杆菌0157 H7~来源 分布
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三种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立 被引量:16
14
作者 舒畅 姜琛璐 +1 位作者 钟慈平 李林 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期49-54,共6页
目的:建立同时快速检测沙门氏菌、志贺氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法:根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因及肠出血性大肠杆菌O157∶H7的uidA基因设计3对引物,通过单因素实验、L9(34)正交实验优化反应体系... 目的:建立同时快速检测沙门氏菌、志贺氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法:根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因及肠出血性大肠杆菌O157∶H7的uidA基因设计3对引物,通过单因素实验、L9(34)正交实验优化反应体系,并对多重PCR扩增的敏感性进行分析。结果:3对引物能特异性扩增出495、620、252bp的目的片段;在最优多重PCR反应体系下,多重PCR检测3种致病菌的灵敏度达104CFU/mL;将该法应用于人工污染实验,可在5h内得到准确、稳定的检测结果。结论:该方法操作简单、检测特异性和灵敏度较高,能够实现对沙门氏菌、志贺氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7 3种食源性致病菌的快速监控和诊断。 展开更多
关键词 食源性致病菌 多重PCR 沙门氏菌 志贺氏菌 肠出血性大肠杆菌0157:H7
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上转磷光免疫层析检测肠出血性大肠杆菌O157 被引量:17
15
作者 王静 周蕾 +4 位作者 李伟 胡孔新 陈维娜 闫中强 杨瑞馥 《中国食品卫生杂志》 2007年第1期41-44,共4页
目的建立一种肠出血性大肠杆菌O157的上转磷光免疫层析快速检测方法。方法利用上转换磷光标记和双抗体夹心免疫层析技术检测大肠杆菌O157,评价了该法的敏感性和特异性,并用于模拟污染食品样品的检测。结果该法能在40min内完成检测,应用... 目的建立一种肠出血性大肠杆菌O157的上转磷光免疫层析快速检测方法。方法利用上转换磷光标记和双抗体夹心免疫层析技术检测大肠杆菌O157,评价了该法的敏感性和特异性,并用于模拟污染食品样品的检测。结果该法能在40min内完成检测,应用于不同的肠杆菌科细菌如其他大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸杆菌、沙雷菌、耶尔森菌以及葡萄球菌、副溶血弧菌、单增李斯特菌等23种28株常见细菌,未发现有交叉反应,检测灵敏度为5×103CFU/ml,每次最低可检测500个细菌,对奶粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、绿豆糕、果冻、燕窝、果汁等样品中的人工染菌均可检测,最低检测浓度为5×103CFU/ml。结论肠出血性大肠杆菌O157上转磷光免疫层析方法简便快速,特异性和灵敏性好,适用于现场的快速检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌0157 发光 上转换发光材料 免疫学技术
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肠出血性大肠杆菌(O157:H7)的特异性荧光探针检测方法的建立 被引量:4
16
作者 姜君 王鹏志 +2 位作者 刘利成 吴伟立 陈唯军 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第12期2201-2204,共4页
目的:建立一种real-time PCR,快速准确检测肠出血性大肠杆菌O157:H7。方法:以肠出血性大肠杆菌0157:H7 rfbE为待检靶基因,设计一对引物和一条Taqman探针,探针5'端用FAM基团标记,3'端用TAMRA标记。通过重组质粒的构建,建立并优... 目的:建立一种real-time PCR,快速准确检测肠出血性大肠杆菌O157:H7。方法:以肠出血性大肠杆菌0157:H7 rfbE为待检靶基因,设计一对引物和一条Taqman探针,探针5'端用FAM基团标记,3'端用TAMRA标记。通过重组质粒的构建,建立并优化了大肠杆菌0157:H7的荧光定量PCR检测方法。结果:在人工污染样本无需富集的情况下,检测的最低DNA浓度是10拷贝/反应(3CFU/mL);特异性检测实验中,0157菌株检测结果均为rfbE阳性,而非0157:H7菌株检测结果均为阴性;重复性实验中,批内、批间变异系数均小于3%。结论:实验结果显示此荧光定量PCR方法特异性、灵敏度高,重复性好,可对分离的可疑大肠杆菌0157:H7菌株进行快速鉴定。 展开更多
关键词 大肠杆菌0157:H7 荧光定量PCR(real-timePCR) TAQMAN探针 rfbE
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食品样品中大肠杆菌O157:H7复合PCR检测方法的研究 被引量:13
17
作者 赵志晶 刘秀梅 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期716-719,共4页
根据大肠杆菌O15 7:H7特异性基因fliC ,rfbE ,SLTI与SLTII设计四对引物 ,建立了复合PCR方法 ,扩增产物长度分别为为 5 6 0bp ,6 78bp ,2 10bp与 4 84bp。该方法可以一步检测出O15 7与H7特异性抗原基因 ,并可同时检测该菌产生SLT毒素的类... 根据大肠杆菌O15 7:H7特异性基因fliC ,rfbE ,SLTI与SLTII设计四对引物 ,建立了复合PCR方法 ,扩增产物长度分别为为 5 6 0bp ,6 78bp ,2 10bp与 4 84bp。该方法可以一步检测出O15 7与H7特异性抗原基因 ,并可同时检测该菌产生SLT毒素的类型 ,与 71株试验菌株的基因型完全配合 ,是一种特异、高效的检测方法。该方法适用于牛奶样品中大肠杆菌O15 7:H7的检测 ,经过增菌步骤检测限可达 0 1cfu 展开更多
关键词 E.COLI 0157:H7 复合PCR 食品样品
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鉴定大肠杆菌O157:H7特异基因的PCR方法 被引量:8
18
作者 温群文 段永翔 +1 位作者 刘楚云 曾小思 《实用预防医学》 CAS 2007年第5期1562-1564,共3页
目的建立一种特异、灵敏鉴定大肠杆菌O157:H7的PCR检测方法。方法针对大肠杆菌O157:H7表面抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbO157、fliCH7设计引物,分别扩增出目的产物。结果利用建立的方法对4株大肠杆菌O157:H7菌及12株非大肠杆菌O157... 目的建立一种特异、灵敏鉴定大肠杆菌O157:H7的PCR检测方法。方法针对大肠杆菌O157:H7表面抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbO157、fliCH7设计引物,分别扩增出目的产物。结果利用建立的方法对4株大肠杆菌O157:H7菌及12株非大肠杆菌O157进行检测,rfbO157、fliCH7基因的特异性均为100%;rfbO157基因的灵敏度约为6×104cfu/ml;fliCH7基因的灵敏度可达6cfu/ml。结论本方法特异性好,为实验室鉴定大肠杆菌O157:H7提供了一种简单、容易操作的手段。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 PCR rfb0157 fliCH7基因
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化 被引量:2
19
作者 马颖 毛旭虎 +1 位作者 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第15期1582-1584,共3页
目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后... 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11 c(+)-stx2 a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和W esten b lot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2 a基因约950bp;原核表达质粒pET-11 c(+)-stx2 a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%。结论EHEC O157∶H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157∶H7菌的感染机制奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌0157:H7 毒素A亚单位 表达 纯化
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