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猪链球菌2型和9型双重Basic-RPA检测方法的构建与应用
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作者 张慧辉 王可心 +6 位作者 李艳伟 魏小兵 王磊 胡建和 丁轲 刘明成 夏小静 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第5期849-858,共10页
【目的】通过构建猪链球菌(Streptococcus suis,SS)2型(SS2)和9型(SS9)双重快速检测方法,为监测SS的流行和传播提供技术支持。【方法】分别以SS2特有荚膜多糖糖编码基因(capsular polysaccharide 2J gene,cps2J)和SS9特有荚膜多糖糖编... 【目的】通过构建猪链球菌(Streptococcus suis,SS)2型(SS2)和9型(SS9)双重快速检测方法,为监测SS的流行和传播提供技术支持。【方法】分别以SS2特有荚膜多糖糖编码基因(capsular polysaccharide 2J gene,cps2J)和SS9特有荚膜多糖糖编码基因(capsular polysaccharide 9H gene,cps9H)为靶标设计引物和探针,对反应体系和反应条件进行优化,建立基础型重组酶聚合酶等温扩增(Basic-recombinase polymerase amplification,Basic-RPA)快速检测技术,并对其特异性、灵敏度、重复性和临床应用效果进行评价。【结果】构建的SS2/9双重Basic-RPA检测方法引物为CPS2J212和CPS9H304,引物体积V(CPS2J212/μL)∶V(CPS9H304/μL)为2.4∶1.8,反应温度为39℃,反应时间为20 min。特异性结果表明,该方法与其他常见病原体无交叉反应,特异性良好。灵敏度结果显示,该方法针对SS2/9检测限达到1×10^(-3) mg·L^(-1),优于常规PCR的1×10^(-2) mg·L^(-1)。重复性结果显示,该方法有良好的稳定性。用该方法对41例临床样品进行检测,其检出率为24.4%,与单重Basic-RPA方法检测结果一致,高于细菌分离方法的检出率12.2%,以及常规PCR方法的检出率19.5%。【结论】构建的SS2/9的双重Basic-RPA检测方法,特异性和稳定性好,灵敏度高,可应用于SS快速诊断和血清分型。 展开更多
关键词 猪链球菌 基础型重组酶聚合酶等温扩增 荚膜多糖 血清分型 双重检测
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葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系的建立 被引量:3
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作者 黄强 张强强 顾沛雯 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期89-97,共9页
【目的】建立葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(recombinase polymerase amplification-lateral flow dipstick,LFD-RPA)检测体系,为快速准确诊断和有效防治葡萄霜霉病提供参考。【方法】依据葡萄霜... 【目的】建立葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(recombinase polymerase amplification-lateral flow dipstick,LFD-RPA)检测体系,为快速准确诊断和有效防治葡萄霜霉病提供参考。【方法】依据葡萄霜霉病菌内转录间隔区(ITS)序列设计了PF1/PR1、PF2/PR2和PF3/PR3共3对引物及探针RPA-P,对葡萄霜霉病菌DNA的ITS序列进行PCR扩增,建立了葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系,并对其反应条件进行优化,对其特异性和灵敏性进行检测。【结果】建立了葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系,引物PF1/PR1和探针RPA-P对靶标片段具有良好的特异性,检测条件为36℃扩增30 min,对葡萄霜霉病菌具有特异性;最低检测下限为10 pg/μL,灵敏性略低于常规PCR(1 pg/μL)和荧光定量PCR(100 fg/μL);对田间发病叶片的检测结果与常规PCR一致,准确性高。【结论】建立的葡萄霜霉病菌重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(LFD-RPA)检测体系,可以对目标物质进行快速、可视化检测,具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点,适宜推广使用。 展开更多
关键词 葡萄霜霉病 葡萄生单轴霉 重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条检测 病原检测
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基于RT-RPA-LFD等温扩增的西瓜银斑驳病毒快速检测技术的建立及应用
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作者 李文扬 修筠清 +7 位作者 徐志红 王敏 古勤生 康保珊 刘莉铭 赵胜杰 玉山江·麦麦提 吴会杰 《园艺学报》 北大核心 2025年第11期3079-3089,共11页
建立了一种基于逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术的西瓜银斑驳病毒(watermelon silver mottle virus,WSMoV)快速检... 建立了一种基于逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术的西瓜银斑驳病毒(watermelon silver mottle virus,WSMoV)快速检测方法。针对WSMoV的L基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,确定RT-RPA-LFD最佳引物浓度为0.1μmol·L^(-1)、探针浓度为0.06μmol·L^(-1)、反应温度为37℃和时间12 min。该方法对WSMoV具有高度特异性,与黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、新德里番茄曲叶病毒(tomato leaf curl new delhi virus,To LCNDV)、西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和甜瓜黄斑病毒(melon yellow spot virus,MYSV)等常见西甜瓜病毒无交叉反应;灵敏度与RT-PCR一致,最低检测限达总RNA的10^(-4)稀释度。对田间32份西甜瓜样品进行检测验证,RT-RPA-LFD与RT-PCR均检出14份阳性,结果一致。本研究建立的RT-RPA-LFD方法反应温度恒定,扩增时间约12 min,结合侧向层析检测,整个过程在20 min内完成,较传统RT-PCR(约2~3 h)更为简便快捷,且检测结果可视,可用于WSMo V的田间现场快速检测。 展开更多
关键词 西瓜 西瓜银斑驳病毒 RT-rpa-LFD 可视化检测
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甲型肝炎病毒RT-RPA结合侧流横向试纸条快检方法的建立
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作者 徐佳乐 汪艺涵 +1 位作者 王永杰 喻勇新 《生物学杂志》 北大核心 2025年第6期101-107,共7页
研究针对甲型肝炎病毒(HAV)的快速检测需求,开发一种基于逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)技术结合侧流横向试纸条(LFS)的新型检测方法。从GenBank核苷酸数据库下载HAVⅠ~Ⅲ基因型序列,进行基因分型、分析,设计RT-RPA引物和探针。该方... 研究针对甲型肝炎病毒(HAV)的快速检测需求,开发一种基于逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)技术结合侧流横向试纸条(LFS)的新型检测方法。从GenBank核苷酸数据库下载HAVⅠ~Ⅲ基因型序列,进行基因分型、分析,设计RT-RPA引物和探针。该方法能在42℃、20 min内完成HAV检测,灵敏度达到10 copies/μL,具有高度特异性,不与其他肠道病毒产生交叉反应,并且重复性达到71.4%,相较传统RT-qPCR技术,展现出更高的灵敏度和操作便捷性。RT-RPA-LFS检测技术的建立为HAV的现场快速诊断提供技术支持,对提高HAV检测效率、预防和控制HAV引起的食源性疫情具有重要意义。随着HAV疫苗的广泛使用,该检测技术的发展对区分疫苗株和野生株以及应对未来病毒多重检测的需求具有潜在的应用前景,为食品安全监测和公共卫生领域提供新的技术手段。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 RT-rpa-LFS 灵敏度 特异性 现场诊断
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利用RT-RPA-CRISPR/Cas12a方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒
5
作者 徐司琦 韩春雪 +4 位作者 王欣宇 谢丽杨 王琰 周涛 范在丰 《植物检疫》 2025年第3期22-28,共7页
马铃薯纺锤块茎类病毒(potato spindle tuber viroid,PSTVd)是中国重要检疫性病原物之一,能够侵染茄科等多个科的植物,导致严重病害,具有高度侵袭性和潜伏期长的特点,极易传播。本研究针对PSTVd基因组,建立了基于反转录(reverse transcr... 马铃薯纺锤块茎类病毒(potato spindle tuber viroid,PSTVd)是中国重要检疫性病原物之一,能够侵染茄科等多个科的植物,导致严重病害,具有高度侵袭性和潜伏期长的特点,极易传播。本研究针对PSTVd基因组,建立了基于反转录(reverse transcription,RT)-重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和CRISPR/Cas系统(CRISPR/Cas12a)的RT-RPA-CRISPR/Cas12a可视化核酸检测系统。结果表明,整个过程可在45 min内完成,只有PSTVd质粒检测结果呈阳性,作为对照的5种茄科植物病毒与空白对照检测结果均呈阴性反应,检测灵敏度为4.134×10^(-7)ng/μL。本研究建立的RT-RPA-CRISPR/Cas12a可视化核酸检测方法特异性强、灵敏度高,操作简便,适用于田间或口岸现场,利于PSTVd的监测与暴发流行的早期预警。 展开更多
关键词 马铃薯纺锤块茎类病毒 CRISPR/Cas12a RT-rpa 快速检测
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齿兰环斑病毒RT-RPA荧光实时检测体系的构建与应用
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作者 吴洁秋 庄华才 +4 位作者 谭志勇 李早文 范俊强 傅海平 徐匆 《热带作物学报》 北大核心 2025年第7期1745-1753,共9页
齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是危害兰花的主要致病病毒之一,该病毒导致兰花叶片黄化、出现斑块,花朵畸形,对兰花的观赏性和商业价值影响极大。为实现ORSV的早期快速检测,本研究根据Gen Bank数据库中兰花齿兰环斑... 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是危害兰花的主要致病病毒之一,该病毒导致兰花叶片黄化、出现斑块,花朵畸形,对兰花的观赏性和商业价值影响极大。为实现ORSV的早期快速检测,本研究根据Gen Bank数据库中兰花齿兰环斑病毒外壳蛋白cp基因的保守区域设计、筛选RT-RPA引物和探针,优化扩增条件,建立基于RPA的ORSV快速检测技术;对RT-RPA特异性和灵敏性进行测定,并通过开展田间样品检测试验,以验证该检测技术在生产上的应用可行性。结果表明:RT-RPA的最佳扩增引物组合为F1/R1,荧光探针为P1,最佳扩增温度为41℃,扩增时间为20 min;特异性良好,对建兰花叶病毒、黄瓜花叶病毒无交叉反应;灵敏度较高,ORSV核酸最低检测浓度达到2.8×10^(–5 )ng/μL。田间样品检测中,采用齿兰环斑病毒为阳性对照,dd H_(2)O为阴性对照,20份蝴蝶兰样本均检出ORSV,与Taq Man探针RT-q PCR (real time quantitative PCR)检测结果一致。本研究建立的ORSV RT-RPA荧光实时检测技术,具有快速、灵敏、准确和简便的优点,且适用于田间样品检测,为兰花病害预防、切断感染源和控制ORSV的传播提供有效方法,有助于兰花产业的健康发展。 展开更多
关键词 兰花 齿兰环斑病毒 反转录-重组酶聚合酶扩增(RT-rpa) 检测
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Exploring Distinct Ethical Challenges Deriving from AI-RPA Technical Characteristics
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作者 Jelle Tuls 《Journal of Computer and Communications》 2025年第2期16-27,共12页
Addressing the existing gap in ethical research surrounding distinct technical characteristics of Robotic Process Automation enhanced with Artificial Intelligence (AI-RPA), this analysis examines the unique ethical di... Addressing the existing gap in ethical research surrounding distinct technical characteristics of Robotic Process Automation enhanced with Artificial Intelligence (AI-RPA), this analysis examines the unique ethical dimensions by positioning AI-RPA as a distinct technological subdivision. From an analytical perspective, this study highlights key characteristics such as minimal reliance on programming, rapid development cycles, and restricted algorithmic control, which differentiate AI-RPA from traditional AI systems. These characteristics underscore the need for tailored ethical considerations, to identify ethical perils within AI-RPA’s technological origins. By positioning AI-RPA as a distinct subdivision and examining its unique characteristics alongside their emerging ethical challenges, this paper enriches the evolving discourse on AI ethics, providing valuable insights for researchers, policymakers, and organizations implementing AI-RPA technologies. 展开更多
关键词 Robotic Process Automation Artificial Intelligence AI-rpa Digital Ethics Distinct Characteristics
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RPA驱动的AI大模型出题系统构建
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作者 魏丽芬 庞晓晨 张丹 《福建电脑》 2026年第2期73-77,共5页
本文构建了基于RPA与AI大模型的自动化出题系统,以应对传统命题中效率低、覆盖不均及题型单一等问题。系统整合RPA流程自动化与AI生成能力,依托结构化知识点库与提示词工程技术,实现多题型、情境化试题的智能生成,并构建“机器生成—人... 本文构建了基于RPA与AI大模型的自动化出题系统,以应对传统命题中效率低、覆盖不均及题型单一等问题。系统整合RPA流程自动化与AI生成能力,依托结构化知识点库与提示词工程技术,实现多题型、情境化试题的智能生成,并构建“机器生成—人工审核—迭代优化”的人机协同机制。测试结果表明,“RPA+AI”模式每题出题时间约5秒,含人工审核后平均每题耗时约9秒,错误率仅为0.07%,在效率和稳定性方面显著优于“人工+AI”模式。该系统有效提升了命题效率与标准化水平,为教育测评智能化提供了可行的技术路径。 展开更多
关键词 机器人流程自动化 AI大模型 智能出题 提示词工程
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A型动物流感病毒RT-RPA检测方法的建立及初步应用 被引量:9
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作者 王潇 曹琛福 +3 位作者 林彦星 黄超华 贾伟新 花群义 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-6,共6页
根据A型流感病毒M基因核苷酸序列设计引物及探针,建立了一种灵敏度高、特异性强、检测迅速、操作简便的重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)。选用常见动物疫病病原验证引物探针的特异性,设计多对引物及探针,筛选出最适反应体系及反应条件,... 根据A型流感病毒M基因核苷酸序列设计引物及探针,建立了一种灵敏度高、特异性强、检测迅速、操作简便的重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)。选用常见动物疫病病原验证引物探针的特异性,设计多对引物及探针,筛选出最适反应体系及反应条件,并与实时荧光RT-PCR方法比较。结果显示,本研究建立的RT-RPA方法特异性强,只有A型动物流感病毒呈阳性,其他相关常见病原均为阴性;反应时间短,检测反应时间仅需20 min;灵敏度高,最低可检测到A型动物流感病毒核酸浓度为0.96×10-2g/mL。与实时荧光RT-PCR方法相比,其灵敏度稍低。本研究建立的检测A型动物流感病毒的RT-RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,检测快速,适合现场检测以及在基层实验室推广应用。 展开更多
关键词 A型动物流感病毒 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 等温扩增
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南方菜豆花叶病毒RT-RPA检测方法的建立 被引量:11
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作者 魏霜 袁俊杰 +7 位作者 李桂芬 乾义柯 魏梅生 冯黎霞 胡学难 何日荣 武目涛 张永江 《植物检疫》 北大核心 2018年第1期50-53,共4页
本研究针对南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)保守序列设计了特异性PRA引物,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),采用SBMV,BPMV,SMV,Ar MV和TRSV共5种病毒评价该方法的特异性,并对其灵敏... 本研究针对南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)保守序列设计了特异性PRA引物,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),采用SBMV,BPMV,SMV,Ar MV和TRSV共5种病毒评价该方法的特异性,并对其灵敏度进行评价。结果显示,建立的RT-RPA方法特异性强;灵敏度达到0.1 ng。本研究建立的RT-RPA方法检测SBMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒 RPA 检测
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鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-双重RT-RPA快速检测方法的建立 被引量:2
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作者 蒋增海 徐耀辉 +5 位作者 张晓战 彭志锋 陈益 唐光武 吕玉金 乐敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1254-1261,共8页
为了保障食品公共卫生安全,基于实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA),针对鼠伤寒沙门菌、沙门菌血清型4,[5],12:i:-共同携带的STM4495基因以及鼠伤寒沙门菌携带的flj B1,2基因,设计2条探针和一系列候选引物,并进行引物筛选、特异性试... 为了保障食品公共卫生安全,基于实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA),针对鼠伤寒沙门菌、沙门菌血清型4,[5],12:i:-共同携带的STM4495基因以及鼠伤寒沙门菌携带的flj B1,2基因,设计2条探针和一系列候选引物,并进行引物筛选、特异性试验、敏感性试验、各种方法比较检测和人工污染试验,建立一种快速检测鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的双重RT-RPA方法。结果显示,该方法在39℃条件下20 min内完成检测,鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的检测下限分别为25.6和251CFU/0.1 m L,不能检出其他肠道致病菌,针对猪产业链及临床样品来源的99株沙门菌与PCR、RT-PCR方法的检测结果一致,针对人工污染样品的检测结果与传统培养法一致。本研究成功建立了一种快速检测鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的双重RT-RPA方法,具有特异性高、敏感性强的特点,快速简便,20min获取检测结果,在新鲜猪肉、临床病猪肝样品中得到初步应用。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 鼠伤寒单相变种 重组酶聚合酶扩增法 快速检测方法
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甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-RPA-LFD检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 王永江 乔奇 +4 位作者 王爽 赵付枚 田雨婷 张德胜 张振臣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期2781-2790,共10页
【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV... 【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(west African strain,WA)的RT-RPA-LFD检测方法。【方法】根据SPCSV-WA外壳蛋白基因和热激蛋白基因的保守序列设计并筛选扩增效果好、特异性强的引物和探针。然后对引物和探针的浓度、扩增体系、温度、反应时间等条件进行优化,建立SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法。利用该方法对SPCSV-EA、甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)、甘薯潜隐病毒(sweet potato latent virus,SPLV)、甘薯G病毒(sweet potato virus G,SPVG)等常见的甘薯病毒进行检测,验证方法的特异性;将感染SPCSV-WA甘薯叶片样品总RNA进行10倍梯度稀释,分别采用RT-PCR和RT-RPA-LFD进行检测,比较RT-PCR和RT-RPA-LFD方法的灵敏度;对采自田间的甘薯样品和试管苗样品进行RT-RPA、RT-RPA-LFD和RT-PCR检测,验证该方法的实用性。【结果】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,最适引物为CSV357F/R,探针CSV-CP-Probe(47 bp),引物和探针工作浓度分别为0.2和0.06μmol·L^(-1),温度为42℃,时间5 min。该方法可对SPCSV-WA进行特异性检测,与甘薯上其他常见病毒无交叉反应。RT-RPA-LFD最低可检测到总RNA稀释至10^(-4)溶液,而RT-PCR最低检测到总RNA稀释至10^(-3)溶液,RT-RPA-LFD灵敏度是RT-PCR的10倍。田间采集的22份甘薯样品经RT-PCR、RT-RPA和RT-RPA-LFD检测,均检出11份阳性样品,3种方法检测结果一致。28份试管苗样品的检测结果表明,RT-PCR和RT-RPA-LFD检测结果一致,均检出5份阳性样品。【结论】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,该方法具有快速、简便、特异、灵敏、可视的特点,既可用于甘薯脱毒试管苗样品的病毒检测,也适用于基层单位田间甘薯病毒样品的现场快速检测。 展开更多
关键词 甘薯褪绿矮化病毒西非株系 逆转录酶重组酶聚合酶扩增 侧向流层析 快速检测 甘薯
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基于重组酶聚合酶扩增技术的大丽轮枝菌快速检测方法的建立
13
作者 暴晓阳 田茜 +5 位作者 孟青青 张瑞平 潘磊 赵文军 刘记 蔡璐璐 《植物保护》 北大核心 2026年第1期248-257,共10页
棉花黄萎病是由大丽轮枝菌Verticillium dahliae引起的一种毁灭性土传真菌病害,也是我国农业植物检疫性病害。本研究建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的实时荧光型(real-time RPA)和侧流层析... 棉花黄萎病是由大丽轮枝菌Verticillium dahliae引起的一种毁灭性土传真菌病害,也是我国农业植物检疫性病害。本研究建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的实时荧光型(real-time RPA)和侧流层析试纸条型(RPA-LFD)2种快速检测方法。通过文献检索和基因序列对比设计了7对引物,特异性扩增结果表明,引物XY-VDS-01F/R和VD-RPA-F/R对棉花黄萎病菌的特异性强,XY-VDS-01F/R作为RPA引物的灵敏度更高。灵敏度检测结果表明:RPA-LFD检测灵敏度为8.5×10^(-5)ng/μL,real-time RPA检测灵敏度为8.5×10^(-3)ng/μL。对来自室内接种和田间采集的土样和棉花植株样品进行检测,real-time RPA和RPA-LFD均能检测出带菌样品。与常规PCR检测方法相比,本研究建立的2种基于重组酶聚合酶扩增检测法能快速、准确地检测棉花黄萎病菌,用时短、易于操作,灵敏性高、特异性强,对棉花黄萎病的早期发现和防治具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 棉花黄萎病 大丽轮枝菌 实时荧光型RPA 侧流层析试纸条型RPA 快速检测
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菊花B病毒和番茄不孕病毒RT-RPA双重荧光实时检测体系的构建与性能评价 被引量:3
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作者 姜自红 刘文干 孙钦花 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期174-184,共11页
菊花B病毒(Chrysanthemum virus B, CVB)和番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus, TAV)是危害菊花的2种主要优势病毒。为构建一种同步检测CVB和TAV逆转录重组酶聚合酶恒温核酸扩增(Reverse transcriptionrecombinase polymerase amplifica... 菊花B病毒(Chrysanthemum virus B, CVB)和番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus, TAV)是危害菊花的2种主要优势病毒。为构建一种同步检测CVB和TAV逆转录重组酶聚合酶恒温核酸扩增(Reverse transcriptionrecombinase polymerase amplification, RT-RPA)双重荧光实时检测方法,本研究以CVB和TAV编码外壳蛋白(coat protein, CP)基因保守区域作为靶标设计RIA引物和探针,CVB和TAV探针的5’端分别标记FAM和VIC荧光素,通过对商业化的RT-RPA试剂筛选,引物探针的组合筛选,扩增体系的优化和扩增条件的摸索试验,构建了一种可同时用于CVB和TAV检测的RT-RPA双重荧光实时检测方法。并对该体系进行优化,优化后RT-RPA双重荧光扩增体系中CVB和TAV的最优引物浓度为400 nmol/L,最优探针浓度分别为100 nmol/L和120 nmol/L;最适反应温度为39℃,最适反应时间为15 min。在此扩增体系和条件下,对CVB和TAV的检测敏感性均为1拷贝/μL;对烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、菊花矮化类病毒和褪绿斑驳类病毒核酸检测结果为阴性,对菊花B病毒、番茄不孕病毒核酸检测结果为阳性;对1.0×10^(4)拷贝/μL和10拷贝/μL的高、低两种浓度的质粒平行检测10次,检测荧光出现阳性扩增拐点所需的时间T变异系数均小于5%,重复性好。采用RTRPA和RT-qPCR方法同步对实验室留存的有症状的100株菊花进行核酸提取并检测,检出6例CVB病毒株和4例TAV病毒株,总符合率100%。因此,本研究建立了一种能同时检测CVB和TAV的快速、灵敏的RT-RPA双重荧光实时检测方法。 展开更多
关键词 菊花B病毒 番茄不孕病毒 逆转录重组酶聚合酶恒温扩增(RT-rpa) 双重荧光实时检测
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RPA-VBA协同建模驱动国家三级公立医院绩效考核病案首页智能质控研究
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作者 李昕昊 骆振宇 +5 位作者 叶丽娴 杨金龙 汤盛兴 陈俊樱 赖伏虎 张莉 《中国数字医学》 2026年第2期110-115,共6页
目的:构建基于机器人流程自动化与VBA智能数据建模的病案首页质控系统,以实现质量与效率的双重提升。方法:依托RPA机器人WeAutomate实现数据自动化采集与流程控制,结合VBA工具构建智能校验模型,针对国家三级公立医院绩效考核病案首页的1... 目的:构建基于机器人流程自动化与VBA智能数据建模的病案首页质控系统,以实现质量与效率的双重提升。方法:依托RPA机器人WeAutomate实现数据自动化采集与流程控制,结合VBA工具构建智能校验模型,针对国家三级公立医院绩效考核病案首页的1038项核心字段,以某市5家中医院为研究对象,系统性开展数据完整性、格式规范性及逻辑关联性的多维度校验。结果:机器人流程自动化通过预设流程自动触发VBA校验程序,全流程自动化运行时间缩短至5 min以内(较传统人工核查效率提升36倍),质控准确率提升至100%,显著降低人工干预误差。结论:本研究创新性地整合机器人流程自动化与VBA智能建模技术,成功构建高精度、低时延的智能化质控体系。该方案不仅满足国家三级公立医院绩效考核病案首页数据的标准化校验需求,更通过技术融合突破传统质控瓶颈,为医院数据治理提供了标准化解决方案,具有较好的示范效应和推广价值。 展开更多
关键词 RPA技术 智能数据建模 病案首页 医疗数据治理 国家三级公立医院绩效考核
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基于RPA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒基因检测方法建立
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作者 董小旭 牛楠楠 +5 位作者 赵印震 杜学利 李灵轲 王继创 李玉林 王云龙 《郑州大学学报(理学版)》 北大核心 2026年第1期87-94,共8页
利用基于重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和簇状规则间隔短回文重复序列相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)建立猴... 利用基于重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和簇状规则间隔短回文重复序列相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)建立猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)核酸快速检测体系,并与侧向层析(lateral flow assay,LFA)相结合,构建基于RPA-CRISPR/Cas12a的MPXV核酸层析快速检测系统,实现可视化快速检测。实验结果表明:RPA最佳反应条件为37℃、15 min;CRISPR体系Cas12a、crRNA、NEBuffer、ssDNA最佳加入量分别为1.0,0.25,3.0,0.25μL。整个检测流程仅需1 h,与灭活的甲、乙型流感病毒原液以及牛痘、天花质粒对照无交叉反应,最低检测限为10 copies/μL。成功开发了基于RPA-CRISPR/Cas12a灵敏度高、特异性强、快速检测MPXV的方法,可应用于现场检测,为MPXV检测提供了一种简便快速的检测方法。 展开更多
关键词 猴痘病毒 簇状规则间隔短回文重复序列相关蛋白12a 重组酶聚合酶等温扩增技术 胶体金试纸条
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基于核酸分子光开关的可视化重组酶聚合酶扩增检测方法
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作者 邓帆 孙娜娜 +4 位作者 周凯乐 刘江花 李国梁 徐秦峰 冯霞 《分析测试学报》 北大核心 2026年第1期184-189,共6页
该研究将核酸分子“光开关”[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)作为荧光染料应用于实时荧光RPA扩增,实现了对食源性致病菌(如金黄色葡萄球菌(S. aur)和沙门氏菌(S. spp))的单重和多重实时荧光RPA扩增检测。此外,基于[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)建... 该研究将核酸分子“光开关”[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)作为荧光染料应用于实时荧光RPA扩增,实现了对食源性致病菌(如金黄色葡萄球菌(S. aur)和沙门氏菌(S. spp))的单重和多重实时荧光RPA扩增检测。此外,基于[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)建立了一种快速、可视化RPA检测方法,该方法通过直接观察扩增产物DNA与[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)结合后在可见光下产生的强烈红色荧光信号判定扩增结果,避免了高浓度[Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+)对扩增反应产生的明显抑制,有良好的可视化检测效果,具有高特异性和高灵敏度,有望广泛应用于环境监测、食品安全和临床诊断的现场快速核酸检测。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增(RPA) [Ru(bpy)_(2)(dppz)]^(2+) 可视化检测 金黄色葡萄球菌
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口蹄疫病毒实时荧光RT-RPA快速检测方法的建立 被引量:11
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作者 刘立兵 王金凤 +5 位作者 张若曦 石蕊寒 韩庆安 李睿文 王建昌 袁万哲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期168-173,共6页
为建立一种简单、快速、特异的口蹄疫病毒(FMDV)分子检测方法,本研究基于FMDV的3D基因,设计特异性引物和exo探针,建立了用于FMDV快速检测的等温实时荧光反转录重组酶聚合酶(Real-time RT-RPA)方法。该方法采用便携式等温扩增仪-Genie ... 为建立一种简单、快速、特异的口蹄疫病毒(FMDV)分子检测方法,本研究基于FMDV的3D基因,设计特异性引物和exo探针,建立了用于FMDV快速检测的等温实时荧光反转录重组酶聚合酶(Real-time RT-RPA)方法。该方法采用便携式等温扩增仪-Genie Ⅲ实时监测扩增结果,40℃20 min即可完成检测。结果显示,FMDV RT-RPA方法能够特异性扩增FMDV 3D基因,而对水泡性口炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、脑心肌炎病毒等均无扩增;以体外转录的FMDV 3D RNA作为模板,该方法在95%置信区间检出下限为1.0×10~2拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1%;使用43份含有灭活FMDV的模拟临床样品分析显示,RT-RPA对FMDV的检出率为34.9%(15/43),略低于荧光定量RT-PCR的检出率(39.5%,17/43),而两种方法的符合率为95.3%(41/43)。RT-RPA能够在6 min~16 min内完成检测,而实时荧光RT-PCR则需要30 min~51 min。本研究所建立的实时荧光RT-RPA方法反应快速,特异性强,灵敏性高,操作简单,结合便携式具有荧光检测功能的等温扩增仪Genie Ⅲ,组建了FMDV快速检测平台,在基层兽医部门,尤其在野外及疫情现场的FMDV检测中具有极大的应用潜力,为设备仪器有限的实验室和田间对FMDV的快速检测提供了一种有效的方法,对于条件有限地区FMD的防控具有重要意义。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D基因 exo探针 实时荧光RT-rpa
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透析法体外复性抗凝溶栓双功能HV12p-rPA融合蛋白 被引量:6
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作者 梁兰 余蓉 +2 位作者 邓璇 李磊 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第2期140-143,共4页
探索表达于大肠杆菌中的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白(The fusion protein of 12 peptide of hirudin and reteplase,HV12p-rPA)的体外复性方法。采用直接透析复性和氧化复性结合透析复性两种方式,并分析复性时间、温度... 探索表达于大肠杆菌中的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白(The fusion protein of 12 peptide of hirudin and reteplase,HV12p-rPA)的体外复性方法。采用直接透析复性和氧化复性结合透析复性两种方式,并分析复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系比例对复性率的影响。分别测定其体外抗凝活性和纤溶活性,确定复性效果。结果显示:将变性溶解的HV12p-rPA在含8mol/L脲,0.05mmol/LGSSG,0.7mol/LL-Arg的50mmol/LGly-NaOH(pH9.20)缓冲液中于25℃氧化复性6h后,再在含0.5mol/LL-Arg,1mmol/L胱氨酸,2mmol/L半胱氨酸的20mmol/LGly-NaOH(pH9.20)缓冲液中于4℃进行梯度脲浓度透析,每隔8h换液一次,透析48h,可获得具有抗凝活性为730ATU/mg,纤溶活性为19768IU/mg的可溶性蛋白质。 展开更多
关键词 HV12p-rpa 包涵体 透析 氧化 复性
原文传递
融合LNS与强化特征的电力RPA异常检测算法
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作者 陈文超 程宇 +2 位作者 林景 毕士凡 杨佳圣 《电子设计工程》 2026年第3期89-93,共5页
针对电力RPA场景下的异常数据检测问题,文中提出了一种融合大规模邻域搜索与强化特征的异常数据检测算法。通过K均值聚类结合自适应样本系数选取方法得到初始数据聚类结果,并引入隶属度函数和正态分布原理,提升了聚类中心点的选取准确性... 针对电力RPA场景下的异常数据检测问题,文中提出了一种融合大规模邻域搜索与强化特征的异常数据检测算法。通过K均值聚类结合自适应样本系数选取方法得到初始数据聚类结果,并引入隶属度函数和正态分布原理,提升了聚类中心点的选取准确性,为后续处理提供更加准确的基准特征值。将该结果送入Spark架构进行并行数据处理,从而提升了算法的处理效率,再采用两组Transformer编解码结构进行多层次的算法处理,最终输出异常数据检测结果。依据多层Transformer的原理,制定了算法的总体损失函数和异常数据判定标准。实验结果表明,所提算法的精确率相较于未优化前提升了约13.54%。 展开更多
关键词 邻域搜索 RPA 电力系统 异常检测
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