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应用酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断牛东毕吸虫病的初步研究 被引量：3
1
作者 耿进明 朱莉 +1 位作者 史学增 李泽鸿 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第3期88-91,100,共5页
本试验探索了使用ＥＬＩＳＡ诊断牛东毕吸虫病的方法，并对７８份阴性血清，５５份阳性血清进行了检测。试验结果表明，阳性符合率达９３．７％，阴性符合率达９８．４％。与ＩＨＡ等方法的比较表明，ＥＬＩＳＡ检出率最高．
关键词 elisa 牛病 诊断 牛东毕吸虫病
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化学发光免疫分析（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗环瓜氨酸肽抗体评价 被引量：2
2
作者 杨曙梅 丛辉 +1 位作者 王建新 王惠民 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第2期126-128,共3页
目的对化学发光免疫分析（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗环瓜氨酸肽（抗CCP）抗体进行评价。方法依据2010ACR／EULAR类风湿关节炎分类诊断标准收集2012年1月～4月南通大学附属医院RA患者58例。其他风湿性疾病患者67例，南通大... 目的对化学发光免疫分析（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗环瓜氨酸肽（抗CCP）抗体进行评价。方法依据2010ACR／EULAR类风湿关节炎分类诊断标准收集2012年1月～4月南通大学附属医院RA患者58例。其他风湿性疾病患者67例，南通大学附属医院体检健康且排除自身抗体阳性的健康体检者67例。用CLIA法和ELISA法分别检测所有研究对象血清中的抗CCP抗体；评估CLIA法检测抗CCP抗体的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及与ELISA法的相关性。结果CLIA法对RA的诊断敏感度和特异度分别为72．41％和97．01％；阳性预测值和阴性预测值分别为91．30％和89．04％；CLIA与ELISA方法差异无统计学意义（χ^2=1．207，P〉0．05）。结论CLIA自动化仪器检测，其操作的智能化程度高，快速简便，且易于进行质量控制。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 化学发光免疫分析 酶联免疫吸附法 抗环瓜氨酸肽抗体
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TPPA、TP—Ab（ELISA）、TRUST三种方法检测血清梅毒的结果分析
3
作者 杨延龙 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第B12期30-32,共3页
目的探讨TPPA、TP—Ab（ELISA法）、TRUST三种方法在梅毒诊断中的适用性和优越性。方法对4500例标本同时用TP-Ab（ELISA法）和TRUST进行检测，并对阳性标本用TPPA进行确证试验。结果在4500例标本中，TP—Ab（ELISA法）阳性120例，阳性率... 目的探讨TPPA、TP—Ab（ELISA法）、TRUST三种方法在梅毒诊断中的适用性和优越性。方法对4500例标本同时用TP-Ab（ELISA法）和TRUST进行检测，并对阳性标本用TPPA进行确证试验。结果在4500例标本中，TP—Ab（ELISA法）阳性120例，阳性率为2．7％；TRUST阳性82例，阳性率为1．8％。用TPPA法对TP_Ab（ELISA法）阳性120侧和TRUST阳性82例进行确证检测试验，TPPA法共检测出阳性118例，阳性率2．62％。从而得出：用ELISA法检测阳性120例，敏感性98．33％（118／120），特异性99．95％（4380／4382），阳性预测值98．33％（118／120），假阳性率为0．04％（2／4382）；用TRUST检测出82例阳性，敏感性69．5％（sz／118），特异性99．13％（4380／4418），阳性预测值92．68％（76／82），假阳性率为0．14％（6／4382）；ELISA、TRUST法均阳性为78例，敏感性66．1％（78／118），特异性100％（4422／4422），阳性预测值100％（78／78），假阳性率为0．0％（0／4382）。结论TPPA、TP—Ab-（ELISA法）、TRUST都有各自的适用性和优越性，Tp-ELISA法灵敏度和特异性高，与TPPA相关性好，但检测时间长，也存在一定的假阳性扣假阴性。TRUST虽然灵敏度差，但特异性好而且方法简便、快捷，适用于急诊筛检及梅毒的疗效观察。TPPA、Tp-Ab-（ELISA法）、TRUST三种方法合理联合使用将减少漏诊、误诊率，为临床诊断梅毒及判断疗效提供更快速准确参考依据，并且在梅毒的发展、痊愈及药物疗效方面都具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 TPPA TP-Ab(elisa法) TRUST
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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
4
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争elisa
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ELISA试验室内质控框架构建方法改进初探
5
作者 段友斌 王瑞 +6 位作者 常乐 邱昌文 李志强 陈庚瑞 杨婧涓 何清 王露楠 《中国输血杂志》 2026年第1期103-108,共6页
目的对9家血站实验室室内质控数据进行统计分析,提出改进ELISA试验室内质控框架构建方法的参考建议,并进行验证。方法1)收集9家血站室内质控数据,以某国产HBsAg ELISA检测试剂为例进行分析;2)比较血站1各批次室内质控值是否存在差异;3)... 目的对9家血站实验室室内质控数据进行统计分析,提出改进ELISA试验室内质控框架构建方法的参考建议,并进行验证。方法1)收集9家血站室内质控数据,以某国产HBsAg ELISA检测试剂为例进行分析;2)比较血站1各批次室内质控值是否存在差异;3)统计分析9家血站室内质控批次使用情况、使用批次数、使用天数、质控次数、各批次均值和变异系数;4)采用改进的ELISA试验室内质控框架构建方法,构建血站1和血站9各批次室内质控的临时框架和固定框架,并对离群值进行判定。结果1)ELISA试验各批次室内质控数据有差异(P<0.01),宜更换质控品和试剂时均更换质控框架。2)9家血站之间使用的质控品和试剂批号、每批次质控次数、相同批号质控值差异较大,宜由各实验室单独建立室内质控框架。3)改进ELISA试验室内质控框架构建方法为:使用框架平移,即预实验均值和上一批次累积变异系数构建临时框架,如该批次使用时间≥20 d且质控数据≥20点,则累积20 d至少20个点后,汇集计算在控数据累积质控均值和标准差构建固定框架。使用该方法构建的临时框架和固定框架,判定血站1和血站9室内质控26个极端离群值均为失控。218个一般离群值,除10个被临时框架判定为正常外,其余均判定为警告和失控,能够有效监控试验稳定性。结论根据不同规模血站室内质控情况的统计分析结果,结合ELISA试验的特性、试剂质控品批间的不稳定性,建议在更换质控品或试剂批号时重新构建质控图,以框架平移建立临时框架,以累计数据计算固定框架,适用于不同规模血站实验室,能够对ELISA试验过程稳定性进行有效控制。 展开更多
关键词 elisa试验 室内质控 质控框架 血站实验室
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腐败梭菌α毒素单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立
6
作者 马祎芳 赵佳慧 +4 位作者 马清龙 高鹏程 曾巧英 李学瑞 储岳峰 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第2期31-39,共9页
为方便临床上检测腐败梭菌血清样本,以及评价腐败梭菌疫苗对动物的免疫效果,本试验利用大肠杆菌表达系统诱导α毒素重组蛋白的表达,经纯化后免疫BALB/c小鼠,制备α毒素单克隆抗体。以筛选的单抗为捕获抗体,通过棋盘滴定法优化反应条件,... 为方便临床上检测腐败梭菌血清样本,以及评价腐败梭菌疫苗对动物的免疫效果,本试验利用大肠杆菌表达系统诱导α毒素重组蛋白的表达,经纯化后免疫BALB/c小鼠,制备α毒素单克隆抗体。以筛选的单抗为捕获抗体,通过棋盘滴定法优化反应条件,建立腐败梭菌α毒素抗体的竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,利用该方法检测绵羊血清样本的阴阳性临界值,并评估其重复性、灵敏度、特异性和符合率,同时检测牛血清样本的阴阳性临界值。结果显示,成功诱导表达和纯化出约65 kDa的目的蛋白;通过杂交瘤技术筛选获得1株稳定分泌特异性抗体的单抗8H2;竞争ELISA最佳抗原包被条件为300 ng/孔、16 h,血清稀释度为1∶1,单抗稀释度为1∶2000,封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)、90 min,血清和单抗竞争时间为90 min,二抗稀释度为1∶15000、孵育30 min,显色时间为15 min;该方法检测绵羊血清样本的阳性临界值为27.19%,阴性临界值为22.59%;批间和批内变异系数均低于10%,重复性良好;标准阳性血清稀释度为1∶16时仍为阳性;与产气荚膜梭菌、布鲁氏菌和鼠伤寒沙门菌均无交叉反应,特异性良好;利用该方法检测100份绵羊血清样本,与间接ELISA的检测总符合率为89.00%(89/100);检测牛血清样本的阳性临界值为20.00%,阴性临界值为16.30%。本试验成功制备了1株腐败梭菌α毒素特异性单抗,并构建了抗体竞争ELISA检测方法,为腐败梭菌病的早期诊断和疫苗免疫效果评价提供了技术支撑。 展开更多
关键词 腐败梭菌 Α毒素 单克隆抗体 竞争elisa
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基于RdRp蛋白的兔出血症病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立
7
作者 朱薇 仇汝龙 +7 位作者 陈萌萌 胡波 魏后军 范志宇 葛雷 伍孟婷 宋艳华 王芳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期414-422,共9页
为建立区别兔出血症病毒(RHDV)感染与疫苗免疫的诊断ELISA方法,本研究通过原核表达系统表达RHDV1和RHDV2 RdRp蛋白,成功纯化获得这两种可溶性RdRp蛋白,并以RdRp蛋白作为包被抗原,建立检测抗RdRp血清抗体的间接ELISA方法。结果显示,经纯... 为建立区别兔出血症病毒(RHDV)感染与疫苗免疫的诊断ELISA方法,本研究通过原核表达系统表达RHDV1和RHDV2 RdRp蛋白,成功纯化获得这两种可溶性RdRp蛋白,并以RdRp蛋白作为包被抗原,建立检测抗RdRp血清抗体的间接ELISA方法。结果显示,经纯化和酶切后,获得不含标签蛋白的RdRp蛋白,约为57 ku。经Western blot验证,2种RdRp蛋白均与RHDV1或RHDV2感染血清发生特异性反应且无型别间差异。因此,选择RHDV2-RdRp作为包被抗原,包被浓度为2.5μg·mL^(-1);最佳血清稀释度为1∶100,孵育时间为37℃60 min;酶标抗体的最佳稀释度为1∶10000;临界值为0.225。经验证,该ELISA方法具有较好的特异性和敏感性;其批内、批间重复性试验变异系数均小于10%,具有较好的稳定性。通过对RHDV攻毒后样本及基因工程疫苗免疫后血清样本进行检测。结果显示,RHDV感染后可以诱导机体产生针对RdRp蛋白的血清抗体,而基因工程疫苗免疫后血清检测为阴性。本研究基于RHDV-RdRp蛋白所建立的ELISA方法可以对基因工程疫苗免疫和RHDV感染进行区分,为筛查RHDV的临床感染提供有效的检测方法。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp) 间接elisa
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基于牛病毒性腹泻病毒核心蛋白C间接ELISA抗体检测方法的建立
8
作者 贾东鹭 阮武营 +11 位作者 刘飞飞 李星仪 杨澳飞 尹波 陈慧敏 陈建 魏颖 何雷 余祖华 马雪连 丁轲 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期63-70,共8页
为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检... 为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。结果显示,pET-32a-C重组质粒构建成功,重组C蛋白大小约为30 k Da,能够以可溶形式表达,30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h可溶性表达最佳;该蛋白免疫BABL/c小鼠后制备血清抗体效价为1∶128000,能够特异性识别C蛋白。该ELISA检测方法的最适条件为:0.5μg/m L抗原37℃包被2 h,10 g/L BSA溶液37℃封闭3 h,1∶16000稀释血清孵育2 h,二抗孵育40 min,避光显色10 min,阴阳性临界值判定标准为0.224,具有良好的特异性和重复性。利用本方法对未免疫接种的疑似BVDV感染的牛血清进行检测,与RT-qPCR核酸检测方法相比,二者阳性符合率达94.73%。上述结果表明,基于C蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为BVDV临床诊断及开发基于C蛋白的间接ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 核心蛋白C 原核表达 多克隆抗体 间接elisa
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立
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作者 赵嘉豪 李树凡 +4 位作者 薛凤 王君 张灿 刘文华 徐守振 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期56-62,共7页
为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法... 为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行了验证,并与IDEXX商品化试剂盒及RT-PCR进行临床样品符合。结果显示,获得2株效价较高的Ig G1型单克隆抗体杂交瘤细胞2B3、2B10,轻链均为κ链。选用效价更高的2B10单克隆抗体作为检测抗体,家兔源BVDV多克隆抗体作为捕获抗体,建立的BVDV抗原捕获ELISA与临床常见病原(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛支原体)无交叉反应,最低可检测102.53TCID50的BVDV病毒液,批内和批间变异系数均低于5%,与IDEXX试剂盒和RT-PCR的总体符合率分别为91.76%~93.33%和94.12%~96.67%。结果表明,基于2B10单克隆抗体建立的BVDV抗原捕获ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为BVDV的检测和防控提供了借鉴和技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 Erns蛋白 单克隆抗体 elisa
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ELISA法与UPLC-MS/MS法检测水产品中喹诺酮类药物残留的比较分析
10
作者 张乐 徐加兵 +2 位作者 孙伟翔 江翰 杨海峰 《中国饲料》 北大核心 2026年第3期156-163,共8页
采用酶联免疫法(ELISA)和超高效液相色谱-串联质谱联用法(UPLC-MS/MS)检测市售6种水产品中14种喹诺酮类药物(QNs)残留的效果,旨在比较两种方法结果的差异性和相关性。其中,UPLC-MS/MS法参考国家标准GB/T 20366-2006进行检测分析,建立14... 采用酶联免疫法(ELISA)和超高效液相色谱-串联质谱联用法(UPLC-MS/MS)检测市售6种水产品中14种喹诺酮类药物(QNs)残留的效果,旨在比较两种方法结果的差异性和相关性。其中,UPLC-MS/MS法参考国家标准GB/T 20366-2006进行检测分析,建立14种QNs药物标准曲线,外标法进行定量分析的结果与ELISA法比较。结果表明:ELISA法检测QNs类药物样品阳性检出率为78.57%,UPLC-MS/MS法检出率为64.29%,环丙沙星最高残留量在黄颡鱼头中为15.76μg/kg,恩诺沙星UPLC-MS/MS法的阳性检出率为64.29%,且最高残留量高达2128.41μg/kg。其中ELISA法样品检出率普遍高于UPLC-MS/MS法,说明ELISA法存在假阳性的情况。鉴于ELISA法分析速度快,样品前处理方法简单等优点,适合用于大批量的样品初筛,UPLC-MS/MS法准确度高,重现性好,可用于ELISA法阳性结果的验证和更精确的药物残留含量测定。本实验为水产品中监测QNs药物残留提供新的检测思路,可结合实际工作情况,选择更快更好的方法,为水产品中用药或水产养殖饲料添加剂的QNs类药物残留检测提供技术支持。 展开更多
关键词 elisa法 UPLC-MS/MS法 喹诺酮类药物 水产品
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E种牛肠道病毒VP1蛋白的截短表达及抗体间接ELISA检测方法的建立
11
作者 崔平 刘澜 +3 位作者 李本科 白耀国 李玉坤 管宇 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第2期40-48,共9页
为了开展E种牛肠道病毒(BEV-E)的流行病学调查和抗体筛查,本试验采用原核表达技术对BEV-E外衣壳蛋白VP1进行体外截短表达,采用His-Tag蛋白纯化柱对VP1重组蛋白进行纯化,采用蛋白免疫印迹(WB)方法对重组蛋白进行鉴定。以纯化的VP1重组蛋... 为了开展E种牛肠道病毒(BEV-E)的流行病学调查和抗体筛查,本试验采用原核表达技术对BEV-E外衣壳蛋白VP1进行体外截短表达,采用His-Tag蛋白纯化柱对VP1重组蛋白进行纯化,采用蛋白免疫印迹(WB)方法对重组蛋白进行鉴定。以纯化的VP1重组蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化和确定临界值,建立了检测BEV-E抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,并进行特异性、灵敏性、重复性、符合率试验和临床样品检测。结果显示,成功表达VP1重组蛋白;间接ELISA检测方法的最佳抗原工作浓度为15.0μg/mL,最佳一抗稀释倍数为1∶80,最佳酶标二抗稀释倍数为1∶3000,最佳封闭液为10%马血清,最佳一抗、酶标二抗、封闭液工作时间分别为30、30、60 min;临界值为0.386;与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒、O型口蹄疫病毒、A型口蹄疫病毒、产肠毒素性大肠杆菌阳性血清均无交叉反应,特异性良好;BEV-E阳性血清1∶25600稀释时仍可检测出阳性,灵敏性较高;批内和批间变异系数均小于10%,重复性良好;该方法与间接免疫荧光检测方法的符合率为92.5%;临床样品检测结果显示,BEV-E抗体平均阳性率为7.88%。结果表明,本试验建立的BEV-E VP1抗体间接ELISA检测方法为开展BEV-E临床诊断和流行病学调查提供了试验依据。 展开更多
关键词 E种牛肠道病毒(BEV-E) VP1蛋白 截短表达 抗体检测 间接elisa
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基于猪流行性腹泻病毒S蛋白夹心ELISA定量的疫苗质控方法的建立及验证
12
作者 张承凤 杜久斌 +4 位作者 曹光辉 陈晓洁 黎明 贺笋 杨延丽 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期216-224,共9页
本试验旨在建立一种准确、灵敏的定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的夹心ELISA方法,用于PED疫苗的质量控制。采用重组PEDV全长S蛋白作为标准品,测定家兔源单克隆抗体GC44F3-1和GC32C11-5与PEDV S蛋白标准品的亲和力;优化夹心ELISA条... 本试验旨在建立一种准确、灵敏的定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的夹心ELISA方法,用于PED疫苗的质量控制。采用重组PEDV全长S蛋白作为标准品,测定家兔源单克隆抗体GC44F3-1和GC32C11-5与PEDV S蛋白标准品的亲和力;优化夹心ELISA条件,验证方法的检测线性、检测限、准确性、重复性、稀释平行性及特异性;监测PEDV S蛋白标准品与预包被的ELISA酶标板保存稳定性,验证方法作为质控方法的可行性。制备的PEDV S蛋白纯度>90%,尺寸均一性较好;GC44F3-1和GC32C11-5的结合速率常数k_(on)分别为4.294×10^(5)和9.445×10^(4)(mol/L)^(-1)·s^(-1),二者解离速率常数k_(off)<1×10^(-7)s^(-1),解离常数Kd<10^(-12)mol/L。ELISA最优检测条件为:捕获抗体2μg/m L,检测抗体0.125μg/m L,捕获抗体4℃过夜包被,抗原37℃孵育1 h,检测抗体37℃孵育1 h,Streptavidin-HRP 37℃孵育25 min,37℃显色15 min。方法学验证表明,该方法具有良好的检测线性(R^(2)=0.9993,n=7),检测限为0.098 ng/m L;高、中、低3个浓度的PEDV S蛋白标准品回收率为94.5%~100.2%,加标回收率为84.3%~98.1%;批内和批间检测CV<5%,重复性良好;不同稀释倍数下检测值CV<5%,稀释平行性好;仅对PEDV检测时结果呈阳性,特异性良好。PEDV S蛋白标准品和预包被的ELISA酶标板稳定保存12个月。该方法能够用于不同生产过程样品的检测和不同批次乳化样品的保存稳定性监测。本研究建立的PEDV S蛋白夹心ELISA定量检测方法具有灵敏、准确、稳定等优点,对PED疫苗质量控制具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 双抗体夹心elisa 疫苗 质量控制
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拆封后ELISA检测微孔板条不同保存时间稳定性验证
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作者 程丽英 张婧 +1 位作者 刘正敏 胡京辉 《医学检验与临床》 2026年第1期20-24,共5页
目的:探讨ELISA试剂拆封后微孔板条在室温放置不同时间对检测结果的影响,为实验室试剂规范管理提供依据。方法:以2个厂家生产的梅毒螺旋体(TP)抗体诊断试剂盒A和B为研究对象,拆封后的微孔板条分别于室温条件下保存0天(对照组)、3天(试验... 目的:探讨ELISA试剂拆封后微孔板条在室温放置不同时间对检测结果的影响,为实验室试剂规范管理提供依据。方法:以2个厂家生产的梅毒螺旋体(TP)抗体诊断试剂盒A和B为研究对象,拆封后的微孔板条分别于室温条件下保存0天(对照组)、3天(试验组1)和7天(试验组2),采用标准物质进行检测,系统分析各组检测结果的差异性。结果:①定性结果符合性:采用Kappa检验分析,A、B两种试剂,试验组1和试验组2与对照组相比,阴阳性结果具有高度一致性。②定量结果一致性:采用Bland-Altman分析,A、B两种试剂试验组1和试验组2的检测结果均有95.8%的点落在95%一致性界限之内,与对照组数值具有一致性。③批内变异;每种试剂的三组数据批内变异系数(CV)均在15%之内,且各组之间无显著性差异(P>0.05)。④批间变异;两种试剂各组批间变异均在实验室可接受范围之内。结论:TP诊断试剂盒的微孔板条在拆封后室温放置7天内具有良好的稳定性,可满足实验室检测要求。 展开更多
关键词 elisa 梅毒螺旋体 微孔板条 稳定性
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3种猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA试剂盒的比较
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作者 田原 曹静 +3 位作者 柴文娴 余昊天 于重伟 夏福芳 《现代畜牧兽医》 2026年第1期25-29,共5页
研究旨在评价3种商品化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA试剂盒的检测性能。选用PRRSV阴性、阳性血清各3份和临床血清样本409份,比较3种试剂盒的分析敏感性、批内重复性以及阴性、阳性符合率。结果显示,试剂盒C分析敏感性最高,... 研究旨在评价3种商品化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA试剂盒的检测性能。选用PRRSV阴性、阳性血清各3份和临床血清样本409份,比较3种试剂盒的分析敏感性、批内重复性以及阴性、阳性符合率。结果显示,试剂盒C分析敏感性最高,试剂盒A和B基本一致;试剂盒A、B、C批内变异系数小于4%,均具有较好的重复性,其中试剂盒B的重复性最好,试剂盒C次之;试剂盒B、C的阳性符合率均为100.00%,试剂盒A的阳性符合率为98.08%,3种试剂盒的诊断敏感性为B=C>A;试剂盒A的阴性符合率为100.00%,试剂盒B、C分别为99.59%和97.22%,3种试剂盒的诊断特异性为A>B>C。研究表明,试剂盒B综合性能评价最高,重复性好,诊断敏感性和特异性高,是抗体检测的首选;若临床检测偏重敏感性,可选择分析敏感性和诊断敏感性更高的试剂盒C;若临床检测偏重特异性,可选择诊断特异性更高的试剂盒A。 展开更多
关键词 PRRSV elisa 抗体检测 检测性能
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一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量：2
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作者 王东升 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 刘霞 王永录 杜晓华 刘新生 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2760-2773,共14页
为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV... 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 截短N蛋白 IGG抗体 间接elisa
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溶血性曼氏杆菌OmpA的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1
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作者 尚珂 高远集 +9 位作者 刘畅 代静蕾 丁梦豪 聂孟川 王怡轩 陈松彪 贾艳艳 郭荣显 丁轲 余祖华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期376-383,共8页
为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司... 为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司测序及酶切鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导重组OmpA蛋白(r OmpA)的表达,SDS-PAGE检测结果显示,在约57 ku处出现目的条带,且rOmpA主要以为包涵体形式表达。rOmpA表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在57.03 ku处出现特异性条带,表明r OmpA可与MH阳性血清产生良好的反应原性。以rOmpA作为包被抗原,采用方阵法通过对各反应条件的优化,初步建立MH抗体的间接ELISA检测方法。利用该方法检测多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、MH-1、MH CVCC4091(A5型)以及MH-2(A1型)阳性血清,结果显示,除MH-1、CVCC4091以及MH-2检测为阳性外,其他细菌阳性血清均为阴性结果,特异性较强。利用该间接ELISA方法检测2倍倍比稀释的待检阳性血清(1:8000~1:512000),结果显示,阳性血清稀释至1:512000时仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r OmpA包被ELISA板,按照该ELISA方法检测5份MH阳性血清,分析该方法的重复性。结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法重复性好。采用建立的间接ELISA方法和间接血凝试验(IHA),对82份临床动物(羊、兔、鼠)血清样品检测,结果显示,间接ELISA检测方法的阳性率为47.6%,阴性率为52.4%;IHA检测方法的阳性率为45.1%,阴性率为54.9%。二者的阳性符合率为94.9%,阴性符合率为95.6%,总符合率为99.3%。另外,从鼠体内检出MH阳性率最高为75.0%,表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床样品的检测。该检测方法的建立为临床MH抗体的检测提供可靠的技术手段,为MH的流行病学调查等奠定了基础。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌5型 外膜蛋白A 原核表达 小鼠 间接elisa
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禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1
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作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页
为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 间接elisa方法 抗体检测 净化
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施马伦贝格病毒N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1
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作者 李阳 孙睿雪 +3 位作者 陈天杰 刘思彤 曹家慧 赵建军 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3877-3887,共11页
[目的]建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)检测方法。[方法]将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET-28a-SBV,利用大肠杆菌... [目的]建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)检测方法。[方法]将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET-28a-SBV,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,以纯化的SBV N蛋白作为检测抗原进行包被,建立一种iELISA方法,并对其包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育时间等反应条件进行优化,检测其阴阳性临界值、特异性、灵敏性和重复性。[结果]SDS-PAGE结果显示,SBV N蛋白分子质量为30 ku;Western blotting结果显示,纯化后SBV N蛋白与SBV阳性血清能产生特异性反应。本研究建立的SBV iELISA检测方法最佳条件为:SBV N抗原包被浓度4μg/mL、4℃包被12 h、1%明胶37℃封闭1 h、血清稀释度为1:200、37℃孵育1 h、1:6 000稀释的酶标二抗37℃孵育1 h,其阴阳性临界值为0.371。该iELISA检测方法仅与SBV阳性血清产生特异性反应,与牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和阿卡斑病毒(AKAV)阳性血清均无明显交叉反应,灵敏性较高,SBV阳性血清稀释度为1:1280时仍有明显反应。批间重复试验和批内重复试验变异系数均<10%;与商品化试剂盒相比,其总符合率为94.57%。[结论]本研究建立了一种以SBV N蛋白为检测抗原的SBV iELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能运用于SBV血清学检测,试验结果为SBV的快速诊断提供更多选择。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒(SBV) N蛋白 间接elisa(ielisa) 原核表达
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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用 被引量：1
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作者 刘兵 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期68-75,共8页
为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法,本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示:gD基因PCR扩增产物约945 bp,构建原核表达载体pET30a-gD,经IPTG诱导表达,Weste... 为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法,本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示:gD基因PCR扩增产物约945 bp,构建原核表达载体pET30a-gD,经IPTG诱导表达,Western blot检测显示重组蛋白具有良好的反应活性,以纯化蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)阳性血清均为阴性,检测IBRV阳性血清的最低抗体检出效价为1∶12800,与病毒中和试验方法的符合率为96.15%,批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和8%,检测825份免疫疫苗牛血清样品和514份未免疫疫苗牛血清样品的阳性率分别为90.67%和7.39%。本研究建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性、重复性,为IBRV的临床诊断、流行病学调查、免疫抗体监测、疫苗免疫效果评价等提供了一种简单快速的血清学检测方法。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 原核表达 间接elisa
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鸡痘病毒ORF127蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
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作者 华炯钢 朱寅初 +6 位作者 叶加林 张存 陈柳 倪征 付媛 霍苏馨 云涛 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第10期2057-2065,共9页
为建立快速、准确的鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)抗体检测方法,将FPV ORF127基因的抗原表位区域克隆于pET-28a(+)原核表达载体,诱导表达并纯化获得FPV ORF127截短蛋白,以纯化的蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件,建立检测FPV抗体的间... 为建立快速、准确的鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)抗体检测方法,将FPV ORF127基因的抗原表位区域克隆于pET-28a(+)原核表达载体,诱导表达并纯化获得FPV ORF127截短蛋白,以纯化的蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件,建立检测FPV抗体的间接ELISA方法,经特异性、敏感性、重复性等试验和临床血清样本检测进行系统验证。结果显示,间接ELISA检测FPV抗体的最佳反应条件为:包被抗原质量浓度为10μg·mL^(-1),待检血清稀释度为1∶100,酶标二抗稀释度为1∶25000;特异性试验结果显示,除FPV阳性血清呈阳性反应外,与其他6种病毒(新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽腺病毒4型、火鸡疱疹病毒)的阳性血清均无交叉反应;敏感性结果显示,FPV阳性血清稀释800倍后检测结果仍为阳性;批内、批间重复试验结果显示,批内变异系数为1.81%~7.07%,批间变异系数为2.12%~7.16%,均小于10%。临床血清样品检测结果显示,180份血清样本总阳性率为79.4%(143/180)。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性和稳定性好,可为免疫鸡群FPV抗体水平监测和FPV流行病学调查提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 ORF127蛋白 间接elisa 抗体
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