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补肾养精颗粒调控早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢颗粒细胞凋亡机制研究 被引量：15
1
作者 张芳 丁怡 +2 位作者 于潇 刘鹏飞 刘金星 《山东中医药大学学报》 2022年第3期365-372,378,共9页
目的:探讨补肾养精颗粒抑制卵巢颗粒细胞凋亡治疗早发性卵巢功能不全的机制。方法:选择动情周期正常的SD雌性大鼠40只,随机分为空白组、模型组、中药组、激素组,每组各10只,模型诱导期间,空白组予生理盐水灌胃14 d,其他组予50 mg/kg雷... 目的:探讨补肾养精颗粒抑制卵巢颗粒细胞凋亡治疗早发性卵巢功能不全的机制。方法:选择动情周期正常的SD雌性大鼠40只,随机分为空白组、模型组、中药组、激素组,每组各10只,模型诱导期间,空白组予生理盐水灌胃14 d,其他组予50 mg/kg雷公藤多苷片混悬液灌胃14 d建模。其后,空白组、模型组分别予生理盐水灌胃15 d,中药组予3.50 g/kg补肾养精颗粒灌胃15 d;激素组予0.1 mg/kg戊酸雌二醇片(第4天同时加用1 mg/kg醋酸甲羟孕酮片)灌胃,4 d为1个疗程,每4 d停用1 d,共15 d。通过免疫组化检测卵巢颗粒细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及双向调控的核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;通过异硫氰酸荧光黄/碘化丙啶(Annexin-V-FITC/PI)荧光双染细胞凋亡及原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况。结果:与空白组比较,模型组卵巢颗粒细胞VEGF、TGF-β、IGF-1水平显著下调,而NF-κB、TNF-α水平显著上调,细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与模型组比较,中药组、激素组VEGF、TGF-β、IGF-1水平上调,NF-κB、TNF-α水平下调,细胞凋亡率下降(P<0.05);与激素组比较,中药组VEGF、IGF-1、TGF-β水平上调,NF-κB水平下调(P<0.05)。结论:补肾养精颗粒可通过上调卵巢颗粒细胞中VEGF、TGF-β、IGF-1的表达,降低NF-κB、TNF-α的表达,进而抑制卵巢颗粒细胞凋亡,促进卵泡发育。 展开更多
关键词 补肾养精颗粒 早发性卵巢功能不全 卵巢颗粒细胞 细胞凋亡 血管内皮生长因子 转化生长因子-Β 胰岛素样生长因子-1 核因子ΚB 肿瘤坏死因子-α 大鼠
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基于microRNA探讨补肾养精颗粒对高龄小鼠卵母细胞质量的影响 被引量：2
2
作者 王昭 付凌宇 +3 位作者 武丽丽 刘鹏飞 于潇 刘金星 《现代中西医结合杂志》 CAS 2023年第14期1919-1924,1939,共7页
目的基于颗粒细胞miR-23a和miR-27a探讨补肾养精颗粒对高龄小鼠卵母细胞质量的影响。方法采用C57BL/6J小鼠,雌性6~8周龄10只、10月龄30只,雄性6~8周龄10只。雌性6~8周龄小鼠作为青年组,将10月龄小鼠随机分为高龄组、补肾养精低剂量组、... 目的基于颗粒细胞miR-23a和miR-27a探讨补肾养精颗粒对高龄小鼠卵母细胞质量的影响。方法采用C57BL/6J小鼠,雌性6~8周龄10只、10月龄30只,雄性6~8周龄10只。雌性6~8周龄小鼠作为青年组,将10月龄小鼠随机分为高龄组、补肾养精低剂量组、补肾养精高剂量组各10只。补肾养精低、高剂量组分别给予补肾养精颗粒5.5 g/kg、11 g/kg灌胃,青年组和高龄组给予同等体积生理盐水灌胃,均连续干预45 d。收集卵母细胞,记录获卵数、卵母细胞成熟率;进行体外受精,培养至4.5 d,记录体外受精率和囊胚率;用JC-1试剂盒检测卵母细胞线粒体膜电位,用活性氧(ROS)试剂盒检测卵母细胞线粒体ROS含量;RT-PCR法检测颗粒细胞miR-23a和miR-27a mRNA表达量。结果与青年组比较,高龄组小鼠获卵数、卵母细胞成熟率、体外受精率和囊胚率、卵母细胞线粒体膜电位均明显降低(P均<0.05),卵母细胞线粒体ROS含量和颗粒细胞miR-23a、miR-27a mRNA表达量均明显增高(P均<0.05)。与高龄组比较,补肾养精高剂量组小鼠获卵数、卵母细胞成熟率、体外受精率、卵母细胞线粒体膜电位均明显增高(P均<0.05),补肾养精高剂量组卵母细胞线粒体ROS含量和补肾养精低、高剂量组颗粒细胞miR-23a、miR-27a mRNA表达量均明显降低(P均<0.05)。结论补肾养精颗粒可能通过下调miR-23a和miR-27a表达,减少颗粒细胞凋亡,促进颗粒细胞增殖,从而提高卵母细胞质量。 展开更多
关键词 高龄小鼠 卵母细胞 颗粒细胞 miR-23a miR-27a 补肾养精颗粒
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基于Rho/ROCK信号通路探讨补肾养精颗粒改善早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢功能的机制 被引量：15
3
作者 张芳 师伟 +1 位作者 刘震 刘金星 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期2678-2683,共6页
目的:基于Rho/ROCK信号通路探讨补肾养精颗粒治疗早发性卵巢功能不全的机制。方法:选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组,模型组,补肾养精颗粒低、中、高剂量(1.75、3.50、7.00g/kg)组,补佳乐组。HE及Masson染色观察大鼠卵... 目的:基于Rho/ROCK信号通路探讨补肾养精颗粒治疗早发性卵巢功能不全的机制。方法:选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组,模型组,补肾养精颗粒低、中、高剂量(1.75、3.50、7.00g/kg)组,补佳乐组。HE及Masson染色观察大鼠卵泡数目及纤维化情况;ELISA检测大鼠血清FSH、LH、IL-1、ET浓度;RT-PCR检测卵巢组织中Rhoa、Rhob、Rhoc的表达;Western Blot检测Rhoa、Rhob、Rhoc、ROCK1、ROCK2、TGF-β、VEGF的表达;免疫组化检测caspase-3的表达。结果:模型组成熟卵泡数目显著减少、闭锁卵泡数目显著增加、纤维化显著(P<0.01),予补肾养精颗粒中剂量干预后可显著改善(P<0.01,P<0.05);模型组大鼠体质量、卵巢指数、子宫指数均显著降低(P<0.01),予补肾养精颗粒干预后可显著改善(P<0.01,P<0.05);在血清FSH、IL-1、ET方面,模型组大鼠显著升高(P<0.01),予补肾养精颗粒中剂量干预后可显著改善(P<0.01,P<0.05);模型组卵巢组织中Rhoa、Rhoc、ROCK1、TGF-β、caspase-3的表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05),予补肾养精颗粒中剂量干预后可改善(P<0.01,P<0.05);模型组VEGF显著降低(P<0.05),予补肾养精颗粒干预后显著改善(P<0.01,P<0.05)。结论:补肾养精颗粒可通过调控Rho/ROCK通路的表达,降低IL-1、ET、TGF-β及促凋亡因子的caspase-3表达,改善血清FSH及VEGF蛋白水平,减少卵巢纤维化及卵泡闭锁,改善卵巢功能。 展开更多
关键词 RHO/ROCK信号通路 补肾养精颗粒 早发性卵巢功能不全 卵巢纤维化 卵巢功能 卵泡 转化生长因子-Β 血管内皮生长因子
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补肾养精颗粒调控HIF-1α/VEGF信号通路干预早发性卵巢功能不全模型大鼠的机制 被引量：12
4
作者 张兵 王丽 +4 位作者 左瑾楠 李金晓 刘鹏飞 于潇 刘金星 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期4148-4153,共6页
目的:观察补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠的干预作用,并从缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨其作用机制。方法:选取动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组... 目的:观察补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠的干预作用,并从缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨其作用机制。方法:选取动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组和补肾养精颗粒低、中、高剂量组(简称中药低、中、高剂量组),每组10只。干预结束后,计算卵巢性腺指数;ELISA检测大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)水平;HE染色观察卵巢组织病理变化;Western Blot、RT-PCR检测卵巢组织HIF-1α、VEGF、Caspase-9蛋白及mRNA表达水平。结果:造模后,与空白组比较,模型组大鼠体质量及卵巢性腺指数显著下降(P<0.05),闭锁卵泡数量明显增加;血清SOD水平显著下降(P<0.01),FSH、LH、ROS、MDA水平显著升高(P<0.01),卵巢组织VEGF mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),HIF-1α和Caspase-9 mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.01,P<0.05)。干预后,与模型组比较,中药中剂量组体质量和卵巢性腺指数显著增长(P<0.01,P<0.05),各治疗组闭锁卵泡数量下降;各治疗组血清SOD水平显著升高(P<0.01),中药中剂量组卵巢组织VEGF mRNA和中药高剂量组VEGF蛋白水平均显著升高(P<0.05);各治疗组血清FSH、LH、ROS、MDA水平及卵巢组织HIF-1αmRNA水平及蛋白水平均显著降低(除中药低剂量组HIF-1α蛋白水平外)(P<0.01,P<0.05);中药中、高剂量组Caspase-9蛋白及中药低剂量组Caspase-9 mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:补肾养精颗粒可通过调控HIF-1α/VEGF信号通路下调HIF-1α及Caspase-9的表达,改善血清内分泌水平及VEGF表达水平,抑制氧化应激及细胞凋亡过程,促进卵泡发育,改善卵巢功能。 展开更多
关键词 补肾养精颗粒 早发性卵巢功能不全 缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路 卵巢功能 机制 激素 氧化应激 细胞凋亡
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基于血管生成探讨补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全大鼠模型的影响 被引量：15
5
作者 张芳 刘震 +4 位作者 于潇 丁怡 张毅然 石雅馨 刘金星 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2021年第4期1332-1338,共7页
目的基于血管生成及凋亡相关因子探讨补肾养精颗粒治疗早发性功能不全的机制。方法选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组、模型组、补肾养精颗粒组(低剂量组(1.75 g·kg^(-1))、中剂量组(3.50 g·kg^(-1))、高剂量... 目的基于血管生成及凋亡相关因子探讨补肾养精颗粒治疗早发性功能不全的机制。方法选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组、模型组、补肾养精颗粒组(低剂量组(1.75 g·kg^(-1))、中剂量组(3.50 g·kg^(-1))、高剂量组(7.00 g·kg^(-1))、补佳乐组。通过阴道涂片观察动情周期的变化;ELISA检测大鼠血清E2、AMH、NF-κB、MMP-2、Caspase-3、Caspase-9浓度;Western blot检测卵巢组织中MMP-2、MMP-9、VEGF、Caspase-3的表达;HE染色观察大鼠卵泡发育及血管分布情况。结果(1)模型组大鼠的动情周期明显延长,予补肾养精颗粒干预后明显缩短;(2)模型组的血清E2、AMH、NF-κB、MMP-2浓度较低,予补肾养精颗粒干预后其表达升高(P<0.05);(3)模型组的Caspase-3、Caspase-9表达偏高,予补肾养精颗粒干预后其表达降低(P<0.05);(4)在卵巢组织MMP-2、MMP-9、VEGF的蛋白含量方面,模型组均低于空白组,予补肾养精颗粒干预后其表达升高;(5)在HE方面,模型组的卵泡数目及血管较少,予补肾养精颗粒干预后可改善。结论补肾养精颗粒可通过升高血管生成相关因子NF-κB、MMP-2、MMP-9、VEGF的表达,降低凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的表达,进而改善血清E2、AMH水平,促进卵巢血管的形成及卵泡的发育。 展开更多
关键词 补肾养精颗粒 早发性卵巢功能不全 血管的形成 凋亡
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补肾养精颗粒灌胃对早发性卵巢功能不全大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用及其机制 被引量：8
6
作者 于潇 王玉超 +3 位作者 刘金星 郑伟 张芳 刘鹏飞 《山东医药》 CAS 2022年第26期12-16,共5页
目的观察补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法取雌性SD大鼠90只,随机分为空白组15只和模型组75只,模型组采用雷公藤多苷灌胃方法制备POI模型,空白组给予0.9%氯化纳注射液灌胃... 目的观察补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法取雌性SD大鼠90只,随机分为空白组15只和模型组75只,模型组采用雷公藤多苷灌胃方法制备POI模型,空白组给予0.9%氯化纳注射液灌胃,每天1次,连续14 d。造模结束后,将模型组分为模型对照组、补佳乐组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组各15只。补佳乐组给予0.1 mg/(kg·d)补佳乐灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予补肾养精颗粒1.75、3.5、7.0 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型对照组给予0.9%氯化纳注射液2 mL/d灌胃,连续给药15 d。给药结束后24 h,每组分别取6只大鼠给予孕马血清促性腺激素(PMSG)50 IU皮下注射,48 h后处死,取双侧卵巢,流式细胞定量分析法检测卵巢颗粒细胞的凋亡状态。各组剩余9只大鼠取双侧卵巢,透射电子显微镜下观察卵泡的超微化结构;取卵巢组织,采用Westernblotting法检测Hedgehog信号通路关键基因Shh、Ptch1、Gli1及凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与空白组比较,模型对照组颗粒细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均升高,正常细胞比例降低;与模型对照组比较,各治疗组颗粒细胞晚期凋亡率降低,正常细胞比例增加;中药高剂量组颗粒细胞早期凋亡率较其他剂量组降低;中药中、高剂量组颗粒细胞晚期凋亡率较中药低剂量、补佳乐组降低,正常细胞比例增加(P<0.05或<0.01)。与空白组比较,模型对照组见卵母细胞形态欠规则,细胞核固缩,颗粒细胞形态欠规则,见凋亡相,细胞器结构异常且数量偏少。与模型对照组比较,各治疗组细胞器形态改善或恢复正常,数量增多,卵母细胞及颗粒细胞形态改善,其中中药中、高剂量组卵母细胞形态基本接近空白组。模型大鼠卵巢组织中Shh、Ptch1、Gli1以及Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高;各治疗组卵巢Shh、Ptch1、Gli1及Bcl-2蛋白表达均升高,Bax蛋白表达均降低;中药中、高剂量组Shh、Gli1蛋白表达水平较中药低剂量组、补佳乐组升高(P<0.05或<0.01)。结论中、高剂量补肾养精颗粒可明显抑制POI大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与激活Hedgehog信号通路后下调促凋亡基因、上调抑凋亡基因表达有关。 展开更多
关键词 补肾养精颗粒 早发性卵巢功能不全 细胞凋亡 HEDGEHOG信号通路 凋亡基因 动物实验
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补肾养精颗粒调节早发性卵巢功能不全模型大鼠卵泡颗粒细胞凋亡机制研究 被引量：14
7
作者 王文静 刘金星 《山东中医药大学学报》 2019年第1期87-91,共5页
目的:探讨补肾养精颗粒调节早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠卵泡颗粒细胞凋亡的机制。方法:60只通过雷公藤多苷片造模POI大鼠,随机分为补肾养精颗粒高、中、低剂量组,空白组及非模型组。干预组给予不同剂量补肾养精颗粒连续灌胃15 d,... 目的:探讨补肾养精颗粒调节早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠卵泡颗粒细胞凋亡的机制。方法:60只通过雷公藤多苷片造模POI大鼠,随机分为补肾养精颗粒高、中、低剂量组,空白组及非模型组。干预组给予不同剂量补肾养精颗粒连续灌胃15 d,空白组及非模型组给予生理盐水灌胃。连续观测大鼠动情周期的改变,Elise检测血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平的改变,流式细胞术检测卵泡颗粒细胞凋亡数量,Western blot检测卵泡颗粒细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的改变。结果:给予补肾养精颗粒干预后,大鼠动情时间较模型组明显缩短(P<0.05),血清FSH水平明显降低(P<0.05),E2水平明显升高(P<0.05),且均有剂量依赖性;同时大鼠卵泡颗粒细胞凋亡数明显减少(P<0.05),且具有剂量依赖性。补肾养精颗粒干预后,磷酸化PI3K及磷酸化Akt蛋白表达上升,抑凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达升高,促凋亡Bcl相关x蛋白(Bax)表达降低。结论:补肾养精颗粒通过PI3K/Akt信号通路调节凋亡相关基因,从而达到抑制卵泡颗粒细胞凋亡、改善卵巢功能的目的。 展开更多
关键词 早发性卵巢功能不全 补肾养精颗粒 卵泡颗粒细胞 动情周期 凋亡机制 大鼠
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中药调控大鼠卵巢颗粒细胞凋亡干预早发性卵巢功能不全的机制研究 被引量：3
8
作者 张兵 刘鹏飞 +2 位作者 刘金星 于秀红 于潇 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期607-611,共5页
目的探讨中药对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法动情周期规律的SD大鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、中药(补肾养精颗粒)低、中、高剂量组。灌胃雷公藤多苷混悬液(50mg·kg^(-1))... 目的探讨中药对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法动情周期规律的SD大鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、中药(补肾养精颗粒)低、中、高剂量组。灌胃雷公藤多苷混悬液(50mg·kg^(-1))14d建立POI大鼠模型,并给予不同药物灌胃治疗。干预14d后HE染色观察卵巢组织病理变化;ELISA检测血清FSH、E_(2)、AMH水平;免疫组化检测卵巢组织Bax表达水平。提取大鼠原代卵巢颗粒细胞,HE染色及FSHR染色鉴定卵巢颗粒细胞,显微镜下观察不同时间点不同组卵巢颗粒细胞的生长状态;Western blot检测各组颗粒细胞Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组大鼠血清FSH水平升高,E_(2)、AMH水平下降(P均<0.01);各级卵泡数量减少,闭锁卵泡数增加;卵巢组织Bax表达水平上升(P<0.01)。干预后各治疗组闭锁卵泡数下降,血清FSH水平下调,E_(2)、AMH水平上调(P均<0.01),卵巢组织Bax表达水平下降(P<0.01)。经HE染色及FSHR染色鉴定机械法提取的大鼠原代卵巢颗粒细胞纯度较高,空白组颗粒细胞提取量最多,细胞贴壁生长,形态为长梭形或多角形;模型组颗粒细胞数量最少,细胞贴壁状态及细胞形态欠佳,易脱落;其余各组颗粒细胞数量较模型组有不同程度增加,细胞生长状态同空白组相似。与空白组相比,模型组颗粒细胞Caspase-9、Caspase-3、Bax的蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);各治疗组的Caspase-9、Caspase-3、Bax蛋白表达水平有不同程度的下调(P<0.01或P<0.05);Bcl-2蛋白表达上调(P<0.05)。结论中药可下调血清FSH水平,上调E2、AMH水平,下调卵巢颗粒细胞中Caspase-9、Caspase-3、Bax表达,上调Bcl-2表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,减少卵泡闭锁,促进卵泡发育。 展开更多
关键词 中药 补肾养精颗粒 早发性卵巢功能不全 卵巢颗粒细胞 凋亡
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