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3种脂质体介导法转染大鼠小胶质细胞的比较研究 被引量：3
1
作者 许期年 王秀云 +1 位作者 左剑玲 王中 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第4期35-37,共3页
目的以LipofectamineTM2000为对照,研究GenEscortTMⅠ和GenEscortTMⅢ在大鼠小胶质细胞中的转染效率及毒性。方法分别采用LipofectamineTM2000、GenEscortTMⅠ和GenEscortTMⅢ为载体,转染绿色荧光蛋白(GFP)标记的siRNA进入大鼠小胶质细... 目的以LipofectamineTM2000为对照,研究GenEscortTMⅠ和GenEscortTMⅢ在大鼠小胶质细胞中的转染效率及毒性。方法分别采用LipofectamineTM2000、GenEscortTMⅠ和GenEscortTMⅢ为载体,转染绿色荧光蛋白(GFP)标记的siRNA进入大鼠小胶质细胞。计算转染效率。采用磺基罗丹明B法(SRB)分析转染试剂对细胞的毒性,并研究细胞传代次数、接种密度、脂质体与siRNA的比例及脂质体-siRNA复合物形成时间等对脂质体转染效率的影响。结果 2～3次细胞传代,接种密度为1×105(24孔板)、脂质体与siRNA比例为1∶2.5、脂质体-siRNA复合物形成时间分别为30 min或15 min,转染效率最高。3种不同脂质体介导的GFP-siRNA转染的大鼠小胶质细胞内均有GFP表达,其最佳转染比例下转染效率比较为LipofectamineTM2000组>GenEscortTMⅠ组>GenEscortTMⅢ组(P<0.01);3种转染剂的细胞毒性比较为LipofectamineTM2000组>GenEscortTMⅠ组>GenEscortTMⅢ组(P<0.01)。结论阳离子脂质体GenEscortTMⅠ比LipofectamineTM2000细胞毒性低,转染效率可,是一种更为理想的小胶质细胞基因转染载体。 展开更多
关键词 脂质体 细胞转染 转染效率 小胶质细胞 磺基罗丹明b法 大鼠
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针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测 被引量：2
2
作者 王丽娜 王秀云 +4 位作者 左剑玲 许期年 朱卫东 贾晓明 杨建平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1021-1026,共6页
目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3... 目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3对(siRNA1588,siRNA283,siR-NA232)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。分别采用Real-TimePCR及Western blot方法测定并比较其抑制率;采用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B,SRB)分析转染复合物的细胞毒性。同时采用免疫荧光组织化学结合共聚焦显微镜观察BDNF和OX-42的表达情况。结果①与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNFsiRNA1588(50μmol·L-1,脂质体与siRNA比例1∶3)干扰小胶质细胞后,其mR-NA和蛋白的相对表达量最低(P<0.01)。②Lipofectami-neTM 20008μl复合50μmol·L-1siRNA(脂质体与siRNA比例为1∶3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(P<0.01),为最佳转染条件。③BNDF和OX-42存在共表达;且siR-NA1588作用后OX-42的平均光密度值(IOD/area)明显降低(P<0.01)。结论①siRNA1588对小胶质细胞上BDNF表达的抑制效果最大。②BDNF在小胶质细胞的活性调节中具有重要作用。 展开更多
关键词 小胶质细胞 脑源性神经生长因子 小干扰RNA 筛选 磺基罗丹明b法 细胞毒性 大鼠
暂未订购
筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1表达的小干扰RNA及其毒性检测
3
作者 刘华 跃嵇富海 +2 位作者 王秀云 左剑玲 许期年 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2013年第7期595-599,共5页
目的筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1（Caveolin-1）表达的小干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）序列，并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计合成针对Caveolin-1的siRNA3条（siRNA422，siRNA548，siRNA710）及1条带绿色荧光... 目的筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1（Caveolin-1）表达的小干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）序列，并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计合成针对Caveolin-1的siRNA3条（siRNA422，siRNA548，siRNA710）及1条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在siRNAFect介导下转染血管内皮细胞。用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）测定转染后血管内皮细胞中Caveolin-1mRNA的表达，Westernblot方法测定干扰后Caveolin-1蛋白表达，比较抑制率，筛选出有效抑制Caveolin-1表达的siRNA。采用磺基罗丹明B法（sulforhodamineB，SRB）分析转染复合物的细胞毒性。结果①在siRNAFect相同剂量下，siRNA20、30nmol／L组或40nmol／L组转染效率均达到85％以上（P〈0．01）；②siRNAFect 1．3μl复合10nmol／L或20nmol／LsiRNA组细胞存活率均达到80％以上（P〈0．05）；③siRNA548对EA．hy926细胞Caveolin-1基因mRNA抑制效果最明显（P〈0．01）；④与阴性对照组及siRNA422、siRNA710相比较，siRNA548干扰血管内皮细胞48h后，Caveolin-1蛋白的表达量最低（P〈0．01o结论①siRNA548 对血管内皮细胞Caveolin-1表达的抑制效果最大。②siRNA浓度20nmol／L复合siRNAFect1．3μl转染效率高，细胞毒性低，适合转染。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 小窝蛋白-1 小干扰RNA 磺基罗丹明b法 细胞毒性 筛选
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